Page 130 - 《广西植物》2025年第5期
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９ ３ ４ 广 西 植 物 ４５ 卷
质部、茎、叶)及 ＡＢＡ 处理后太子参样品的块根进 Ｐｒｉｍｅｒ￣Ｒ ０.４ μＬꎬｄｄＨ Ｏ ０. ２ μＬꎮ 反应条件按照
２
®
ＴＭ
行环肽 Ｂ 含量测定ꎮ ＴＢ Ｇｒｅｅｎ ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ Ⅱ试剂盒说明书ꎬ每组
１.４.５ 太子参 ＰｈＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ 及 ｐｒｅＰｈＨＢ 基因的表 设置 ３ 次生物学重复ꎬ采用 ２ －ΔＣｔ 方法计算不同组
达分析 通过转录组数据库获得基因序列ꎬ利用 织中基因的表达量ꎬ使用 ＴＢｔｏｏｌｓ 对基因表达量进
Ｐｒｉｍｅｒ ｖ５.０ 设计引物( 表 １)ꎮ 提取总 ＲＮＡꎬ反转 行均一化处理ꎬ聚类热图分析ꎻ采用 ２ －ΔΔＣｔ 方法计
录成 ｃＤＮＡꎬ Ｐｈａｃｔｉｎ１ 作 为 内 参 基 因 ( Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ 算 ＡＢＡ 处理下基因的相对表达量ꎬ利用 ＳＰＳＳ ２７
２０１７)ꎮ ＰＣＲ 反 应 体 系 如 下: ｃＤＮＡ ４ μＬꎬ ＴＢ 软件中单因素方差分析进行显著性差异统计ꎬ并
® ＴＭ
Ｇｒｅｅｎ ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ Ⅱ ５ μＬꎬＰｒｉｍｅｒ￣Ｆ ０.４ μＬꎬ 使用 ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ９ 软件进行作图ꎮ
表 １ 实时荧光定量 ＰＣＲ 引物序列
Ｔａｂｌｅ １ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒｓ ｆｏｒ ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ ＰＣＲ
基因 上游引物序列 (５′￣３′) 下游引物序列 (５′￣３′)
Ｇｅｎｅ Ｕｐｓｔｒｅａｍ ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ (５′￣３′) Ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ (５′￣３′)
Ｐｈａｃｔｉｎ１ ＣＴＧＴＡＴＴＴＡＣＧＣＴＣＡＧＧＴＧＧ ＣＡＴＴＧＴＧＣＴＣＡＧＴＧＧＴＧＧ
ＰｈＭＹＢ１ ＧＣＴＡＣＴＴＣＡＧＣＴＴＣＡＡＴＧＣＣＣ ＴＣＧＧＣＡＡＡＴＴＴＴＧＴＣＣＣＴＧＣ
ＰｈＭＹＢ２ ＧＣＡＡＴＧＡＧＧＧＣＧＴＴＣＡＡＴＣＡ ＴＴＧＡＴＣＧＣＴＡＧＣＧＧＣＡＴＧＡＧ
ＰｈＭＹＢ３ ＡＧＴＧＣＣＣＡＧＡＴＴＴＧＡＡＣＣＴＴＧＡ ＧＣＣＣＣＡＡＡＣＴＡＣＡＡＧＴＧＡＡＧＣ
ＰｈＭＹＢ４ ＡＡＡＣＣＧＧＡＡＣＡＣＣＡＡＣＣＡＧＣ ＧＧＣＴＡＧＣＡＴＣＡＧＴＡＧＡＡＧＣＣＧ
ＰｈＭＹＢ５ ＣＴＣＡＡＧＣＣＡＴＴＧＧＡＧＧＡＧＣＡ ＣＣＧＡＡＣＣＣＡＴＡＴＧＡＧＧＣＧＡＴ
ＰｈＭＹＢ６ ＣＡＣＣＡＣＴＧＣＴＡＡＣＧＴＧＡＣＴＧ ＣＧＴＣＣＧＴＧＡＧＣＧＴＴＧＡＡＡＡＣ
ＰｈＭＹＢ７ ＣＧＴＣＣＡＣＣＴＣＣＡＣＣＴＣＴＡＣＡ ＧＴＡＡＣＣＧＧＧＣＴＡＴＧＴＴＣＣＣＧ
ＰｈＭＹＢ８ ＣＣＧＧＡＧＣＴＡＧＣＡＴＴＡＣＴＣＧＧ ＧＧＴＴＣＡＧＧＡＧＴＣＴＧＧＴＴＣＧＧ
ＰｈＭＹＢ９ ＡＧＡＡＣＡＧＧＴＧＴＣＴＧＴＣＧＣＴＣ ＴＴＡＡＡＴＧＧＣＡＣＴＧＧＣＧＧＴＧＴ
ＰｈＭＹＢ１０ ＧＡＴＧＴＴＡＣＣＧＴＧＧＧＴＣＡＧＴＧＴ ＣＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＴＧＧＣＣＴＡＴ
ＰｈＭＹＢ１１ ＡＴＧＧＣＡＡＧＧＧＴＧＡＴＴＧＧＡＧＧ ＧＴＣＧＡＣＴＧＴＧＧＴＧＡＴＧＴＣＧＴ
ＰｈＭＹＢ１２ ＡＣＡＡＣＧＡＣＡＴＴＧＣＴＣＧＴＧＡＣ ＣＡＴＧＧＡＣＡＴＴＴＣＴＧＣＣＣＴＣＣＴ
ＰｈＭＹＢ１３ ＴＧＣＴＡＧＧＣＴＡＣＴＴＡＡＣＧＧＴＣＧ ＧＡＡＧＧＡＣＴＴＴＣＣＧＧＣＧＡＴＧＡ
ＰｈＭＹＢ１４ ＴＧＣＴＡＧＣＡＴＧＡＣＣＡＡＴＧＣＧＧ ＴＴＴＣＡＡＡＧＣＣＴＧＣＡＣＡＡＧＧＧ
ＰｈＭＹＢ１５ ＴＣＡＴＧＧＴＧＡＧＴＴＣＧＧＡＣＡＧＣ ＧＣＡＴＣＴＣＣＣＴＣＴＡＡＣＡＣＧＧＧ
ｐｒｅＰｈＨＢ ＧＡＡＧＣＣＧＡＧＴＡＴＴＴＴＴＧＧＧＧＧＴＣ ＧＣＡＴＴＡＣＡＡＴＧＣＡＴＡＣＴＴＡＣＡＣＣＡＴＧＡ
１.４.６ ＰｈＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ 基因与太子参环肽 Ｂ 合成的 列ꎬ鉴定到 １５ 个具有完整 ＯＲＦ 序列的 ＰｈＲ２Ｒ３￣
相关性分析 将 １５ 个 ＰｈＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ 基因在太子 ＭＹＢ 转录因子ꎬ分别命名为 ＰｈＭＹＢ１－ＰｈＭＹＢ１５(表
参不同组织中的表达量与其所对应的环肽 Ｂ 含量 ２)ꎮ 由表 ２ 可知ꎬＰｈＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ 蛋白编码的氨基酸
进行合并整理ꎬ利用 ＳＰＳＳ ２７ 软件中的皮尔森相关 数量为 ２２１~１ ０１２ 个氨基酸残基ꎬ蛋白相对分子质
系数进行相关性分析ꎬ使用 Ｏｒｉｇｉｎ ２０２１ 绘制相关 量为 ２４ ４７６.３６~ １１４ ３３５.７４ Ｄａꎬ蛋白等电点小于 ７
性热图ꎮ 相同的方法ꎬ将 ＰｈＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ 的表达量 的成员有 ８ 个ꎬ蛋白等电点大于 ７ 的成员有 ７ 个ꎬ表
与 ｐｒｅＰｈＨＢ 的表达量进行皮尔森相关系数分析ꎬ 明不同 ＰｈＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ 蛋白的生物学功能存在差异ꎻ
并绘制相关性热图ꎮ 蛋白脂溶指数均小于 １００ꎬ蛋白亲疏水性均为负值ꎬ
不稳定指数大于 ４０ 的蛋白有 １４ 个ꎬ表明 ＰｈＲ２Ｒ３￣
２ 结果与分析 ＭＹＢ 蛋 白 多 为 亲 水 性 不 稳 定 蛋 白ꎮ 在 线 网 站
(Ｂｏｌｏｇｎａ Ｕｎｉｆｉｅｄ Ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ Ａｎｎｏｔａｔｏｒ)亚
２.１ 太子参 Ｒ２Ｒ３￣ＭＹＢ 转录因子鉴定及蛋白理化 细胞定位预测结果显示ꎬ１５ 个 ＰｈＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ 蛋白均
性质分析 定位于细胞核中ꎬ具有典型的转录因子特征ꎬ在细
通过验证、筛选ꎬ去掉结构不完整和重复的序 胞核内发挥功能ꎮ
