Page 50 - 《广西植物》2025年第7期
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１ ２ ４ ２ 广 西 植 物 ４５ 卷
２０１３)和甘蓝型油菜冷胁迫后(Ｑｉ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２０)ꎬ维 ＩｍａｇｅＪ 的界面中打开ꎬ再点击 Ａｎａｌｙｚｅ 界面下的 ３Ｄ
管束组织细胞中均会产生大量的 ＲＯＳ 信号ꎬ这进 Ｓｕｒｆａｃｅ ｐｌｏｔꎬ进行 ３Ｄ 图像生成ꎮ
一步说明维管束组织在 ＲＯＳ 信号合成和传导过程 １.２.２ ＲＯＳ(Ｏ ) 信号亚细胞定位 分别对正常处
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中发挥了重要的作用( 张悦婧等ꎬ２０２４)ꎮ 截至目 理和冷胁迫处理后的冬小麦幼苗进行 ＮＢＴ 染色(８
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前ꎬ关于 ＲＯＳ(Ｏ ) 信号分子的研究已成为该领域 ｈ)ꎬ 并 对 染 色 后 的 根 系 组 织 使 用 ＦＡＡ ( ５０％ 乙
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的热点ꎬ但 ＲＯＳ(Ｏ ) 信号在冬小麦生长发育中的 醇 ∶ 乙酸 ∶ 甲醛 ＝ ８９ ∶ ６ ∶ ５ꎬＶ / Ｖ / Ｖ) 液体固定ꎬ
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细胞信号传导模式尚未有深入探究ꎮ 采用常规石蜡切片法(Ｑｉ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２０)ꎮ 采用正置
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ＲＯＳ 信号可作为信号分子参与细胞内的信号 荧光显微镜观察 ＲＯＳ ( Ｏ ) 信号在冬小麦根系组
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转导过程ꎬ而 ＲＯＳ(Ｏ )信号优先于 ＲＯＳ(Ｈ Ｏ )产 织细胞中的分布规律ꎬ并使用 ＣａｓｅＶｉｗｅｒ 软件进行
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生ꎬ主要原因在于植物组织细胞中的线粒体和叶 图像处理ꎬ试验重复 ３ 次ꎮ
绿体及 ＮＡＤＰＨ 酶产生 ＲＯＳ( Ｏ ) 信号后ꎬ超氧化 １.２.３ 测定根长 先对正常生长 １ ｄ 的冬小麦‘ 陇
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物歧化酶( ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅꎬＳＯＤ) 会将 Ｏ 歧 育 １０ 号’ꎬ选择长势一致的幼苗分别进行正常处
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化为 Ｈ Ｏ ꎮ 因此ꎬ阐明 ＲＯＳ(Ｏ )的产生及分布规 理(２５ ℃ )和冷胁迫处理(４ ℃ ) ２ ｄꎬ再测定处理 ２
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律对于理解生命活动的基本规律具有重要意义ꎮ ｄ 后的根系长度ꎮ
１.２.４ 生理指标测定 参照 Ｚｈａｎｇ 等(２０２３) 的实
鉴于此ꎬ本研究以强抗寒冬小麦品种‘陇育 １０ 号’
为材料ꎬ结合 ＮＢＴ 染色技术和组织切片技术ꎬ从 验方法对正常处理和冷胁迫处理后(１２ ｈ) 的冬小
２Ｄ 和 ３Ｄ 角度分析 ＲＯＳ (Ｏ ) 信号在冬小麦根系 麦根系组织进行超氧化物歧化酶( ＳＯＤ) 及过氧化
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组织细胞中的传导模式ꎮ 本研究为揭示冬小麦抗 物酶( ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅꎬＰＯＤ) 酶活 指 标 测 定ꎻ采 用 ＲＯＳ
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寒相关 ＲＯＳ(Ｏ ) 信号传导机制奠定基础ꎬ并为培 试剂盒测定 ＲＯＳ (Ｏ )含量(苏州科铭生物技术有
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育抗寒冬小麦作物新品种的研究提供借鉴ꎮ 限公司)ꎮ
１.３ 数据统计分析及处理
１ 材料与方法 数据采用 ＳＰＳＳ １９.０ 进行单因素方差分析(ｏｎｅ￣
ｗａｙꎬＡＮＯＶＡ)ꎬ以检测 ２ 种处理之间的显著性差异
１.１ 材料 (Ｐ<０.０５)ꎻ使用 Ａｄｏｂｅ Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ ＣＣ ２０１８ 绘图ꎮ
本 研 究 试 验 材 料 为 冬 小 麦 ‘ 陇 育 １０ 号 ’
( Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ａｅｓｔｉｖｕｍ ｃｖ. Ｌｏｎｇｙｕ １０)ꎬ冬性及中熟多穗 ２ 结果与分析
型品种ꎬ陇东学院小麦研究所提供ꎮ
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１.２ 试验方法 ２.１ 冬小麦根系组织细胞中 ＲＯＳ(Ｏ )信号定位及
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１.２.１ 材料种植与处理 挑选籽粒饱满的冬小麦 生理指标变化规律分析
‘陇育 １０ 号’种子ꎬ清洗干净、吸干、低温(４ ℃ ) 春 正常处理(２５ ℃)下ꎬ冬小麦的根尖顶端组织细
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化 １２ ｈ 后ꎬ正常条件下培养 ３ ｄꎬ正常条件为昼夜 胞(图 １:Ａ－Ｄ)区域积累了大量的 ＲＯＳ(Ｏ )ꎬ说明
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温度(２５ ℃ )ꎬ光 / 暗周期( １４ ｈ / １０ ｈ)ꎬ光照强度 ＲＯＳ(Ｏ )参与调控根顶端组织细胞分裂ꎬ对冬小麦
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(６ ０００ ｌｘ)ꎮ 随后ꎬ将试验材料分两组:正常处理 ‘陇育 １０ 号’ 根系的形成发挥着重要作用ꎮ 但是ꎬ
冷胁迫处理(４ ℃) 后ꎬ根尖顶端组织细胞区域(图
(对照组)继续 ２５ ℃ 培养 １２ ｈꎻ试验组为冷胁迫(４
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℃ )培养 １２ ｈꎮ 分别对正常处理和冷胁迫处理后 １:Ｇ－Ｊ)出现 ＲＯＳ(Ｏ ) 信号消失的现象ꎬ推测根尖
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的冬小麦幼苗进行 ＮＢＴ 染色(８ ｈ)ꎬ采用正置荧光 顶端组织细胞 ＲＯＳ(Ｏ )信号的减少ꎬ对根尖顶端组
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织细胞分裂及根系生长发育起到抑制作用ꎮ 为进
显微镜(ＮＥＸＣＯＰＥꎬ南京江南永新光学有限公司)
观察 ＲＯＳ (Ｏ ) 信号在冬小麦根系组织细胞中的 一步验证这一结果ꎬ本研究对生长 １ ｄ 的幼苗ꎬ分别
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分布 规 律ꎬ 并 使 用 ＣａｓｅＶｉｗｅｒ 和 ＩｍａｇｅＪ ( ＩｍａｇｅＪ. 在正常(２５ ℃)和冷胁迫(４ ℃)环境下处理 ２ ｄ (图
Ｕ. Ｓ. Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈꎬ Ｂｅｔｈｅｓｄａꎬ ２:Ａ)ꎮ 结果表明ꎬ根系生长呈现极显著性差异(Ｐ<
Ｍａｒｙｌａｎｄꎬ ＵＳＡ) 软件进行图形 ２Ｄ 和 ３Ｄ 图 像 处 ０.０１)ꎬ根长分别为 ５.７８ ｃｍ 和 １.８６ ｃｍ (图 ２:Ｂ)ꎬ这
理ꎬ试验重复 ３ 次ꎮ ３Ｄ 图形处理步骤如下:先启动 进一步说明冷胁迫处理不利于根系生长发育ꎬ可能
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ＩｍａｇｅＪ 软件 后ꎬ 将 图 像 直 接 将 图 像 文 件 拖 放 到 与根尖顶端组织 ＲＯＳ(Ｏ )信号的消失有关ꎮ
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