Page 144 - 《广西植物》2025年第8期
P. 144
１ ５ １ ０ 广 西 植 物 ４５ 卷
见报道ꎮ 此外ꎬ生物防治剂诱导植物对病原体的 自山 西 大 同 浑 源 县ꎻ 黄 芪 致 病 菌 腐 皮 镰 刀 菌
防御机制是实现植物保护的新途径( Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ.ꎬ ＨＹＦＳ￣１ 由实验室分离保存备用ꎻ用于生理指标检
２０１４ꎻＮｉｕ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２４)ꎮ 哈茨木霉 Ｔ９１３１ 已被报 测的感病黄芪材料为蒙古黄芪ꎮ
道通过初期诱导黄芪 Ｈ Ｏ 含量的增加和后期降 １.２ 方法
２ ２
低 Ｈ Ｏ 含 量 来 抵 制 ＨＹＦＳ￣１ 侵 染 ( Ｎｉｕ ｅｔ ａｌ.ꎬ １.２.１ 木霉形态学鉴定 木霉分离及纯化与牛景
２ ２
２０２４)ꎮ Ｈ Ｏ 是 一 种 重 要 的 活 性 氧 ( ｒｅａｃｔｉｖｅ 萍等(２０２３)方法一致ꎬ将木霉在 ＰＤＡ 培养基上培
２ ２
ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓꎬ ＲＯＳ)ꎬＲＯＳ 的积累会促进细胞程 养 ６ ~ ７ ｄꎬ观察其菌落特征和分生孢子ꎬ分生孢子
序性死亡( ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈꎬ ＰＣＤ) 进而限制 的观察用荧光显微镜( Ｌｅｉｃａ ＤＭ６Ｂ) 进 行ꎮ 参 考
病原菌的侵染( Ｓｅｈｒｉｓｈ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２０)ꎬ但 ＲＯＳ 的过 Ｃｈａｖｅｒｒｉ 等(２０１５)和杨合同(２００９) 的方法进行木
度积累会对植物造成损伤( Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２３)ꎬ所 霉形态学鉴定ꎮ
以必须严格调控 ＲＯＳ 的产生与清除ꎮ 超氧化物歧 １.２.２ 木霉分子鉴定 取生长 ４ ~ ５ ｄ 的木霉菌丝ꎬ
化酶 ( ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅꎬ ＳＯＤ)、 过 氧 化 物 酶 利用真菌基因组 ＤＮＡ 抽提试剂盒[ 生工生物工程
(ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅꎬ ＰＯＤ) 和过氧化氢酶( ｃａｔａｌａｓｅꎬ ＣＡＴ) (上海)股份有限公司] 进行 ＤＮＡ 提取ꎬ分别利用
能调控 Ｈ Ｏ 含量的变化( Ｓｈａｒｍａ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１２)ꎮ 真菌鉴定引物 ＩＴＳ１ / ＩＴＳ４ 和 ＥＦ１－７２８Ｆ / ｔｅｆ１ｒｅｖ (表
２ ２
脯氨酸 ( ｐｒｏｌｉｎｅꎬ Ｐｒｏ) 也可以作为抗氧化剂调控 １)进行 ＰＣＲ 扩增(牛景萍等ꎬ２０２３)ꎮ 扩增产物经
ＲＯＳ 的 平 衡 ( Ｇｒａｔａｏ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１２ꎻ Ｓａｒｋｅｒ ＆ Ｏｂａꎬ １％琼脂糖凝胶电泳验证后送生工生物工程( 上
２０１８)ꎬ并能被木霉诱导积累( Ｂａｔｏｏｌ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２０ꎻ 海)股份有限公司进行测序ꎬ测序结果结合刘青等
张林等ꎬ２０２３ꎻ廉华等ꎬ２０２３)ꎮ 哈茨木霉 Ｔ９１３１ 是 (２０１９)和 Ｓａｄｆｉ￣Ｚｏｕａｏｕｉ 等(２００９)的序列信息并利
否通过 ＳＯＤ、ＰＯＤ、ＣＡＴ 和 Ｐｒｏ 来调控 Ｈ Ｏ 含量 用 ＭＥＧＡ ７. ０ 软 件 的 邻 接 法 ( ｎｅｉｇｈｂｏｒ￣ｊｏｉｎｉｎｇ)
２ ２
有待研究ꎮ 前期研究还发现从黄芪中提取的总黄 (ｂｏｏｔｓｔｒａｐ 设为 １ ０００)构建系统发育树ꎮ
酮对腐皮镰刀菌 ＨＹＦＳ￣１ 有显著抑制作用( 牛景萍
等ꎬ ２０２３ )ꎮ 苯 丙 氨 酸 解 氨 酶 ( ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ 表 １ ＩＴＳ 序列扩增引物
ａｍｍｏｎｉａ￣ｌｙａｓｅꎬ ＰＡＬ) 为 黄 酮 类 物 质 合 成 的 关 键 Ｔａｂｌｅ １ Ｐｒｉｍｅｒｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＩＴＳ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
酶ꎬ在植物抵御各种非生物胁迫和生物胁迫中起 引物名称 引物序列(５′－３′)
Ｐｒｉｍｅｒ ｎａｍｅ Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ (５′－３′)
重要作用( Ｍａｃｄｏｎａｌｄ ＆ Ｄｃｕｎｈａꎬ ２００７)ꎮ ＰＡＬ 是
ＩＴＳ１ ＴＣＣＧＴＡＧＧＴＧＡＡＣＣＴＧＣＧＧ
否参与哈茨木霉 Ｔ９１３１ 诱导黄芪抗病有待研究ꎮ
ＩＴＳ４ ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＧＣ
生物防治真菌主要通过抑制病原菌生长和促进植
ＥＦ１￣７２８Ｆ ＣＡＴＣＧＡＧＡＡＧＴＴＣＧＡＧＡＡＧＧ
物的抗性来防治植物病害( Ｓｈｏｒｅｓｈ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１０)ꎮ
ｔｅｆ１ｒｅｖ ＧＣＣＡＴＣＣＴＴＧＧＡＧＡＣＣＡＧＣ
尽管前期研究表明 Ｔ９１３１ 能诱导黄芪对 ＨＹＦＳ￣１
的抗性ꎬ但在大同浑源县根腐病防治中生防真菌
鉴定及其抑菌能力和诱导植物抗病酶活等生理指 １.２.３ 哈茨木霉与腐皮镰刀菌的对峙培养 在含
标未见相关报道ꎮ 本研究以鉴定大同浑源县黄芪 有 ＰＤＡ 培养基的 ９０ ｍｍ 培养皿中ꎬ分别在距离培
根腐病生防真菌为目标ꎬ采用形态学观察、分子鉴 养皿两端约 ２０ ｍｍ 处分别放置 ６ ｍｍ 哈茨 木 霉
定、平板对峙及黄芪生理指标测定等方法ꎬ拟探讨 Ｔ９１３１ 和 腐 皮 镰 刀 菌 ＨＹＦＳ￣１ 菌 饼ꎬ 以 只 接 种
以下问题:(１) 确定生防真菌类型ꎻ(２) 明确生防 ＨＹＦＳ￣１ 为对照ꎬ每组 ３ 个重复ꎬ均放置于 ２７ ℃ 培
真菌对黄芪根腐病的防治作用ꎻ(３) 解析生防真菌 养 ６ ｄꎬ每天测量 ＨＹＦＳ￣１ 生长半径并计算抑菌率
诱导黄芪抗病生理生化机制ꎮ 本研究以期为大同 (马文旭等ꎬ２０２１)ꎬ抑菌率(％) ＝ ( 对照处理菌落
浑源县黄芪根腐病的防治提供理论基础ꎮ 半径－处理组菌落半径) / 对照处理菌落半径×１００ꎮ
１.２.４ 哈 茨 木 霉 孢 子 悬 浮 液 的 培 养 哈 茨 木 霉
１ 材料与方法 Ｔ９１３１ 在平板上生长 ７ ｄ 后ꎬ每个平板加入 ５ ｍＬ
蒸馏水ꎬ用移液枪反复吹打ꎬ将获得的孢子悬浮液
１.１ 材料 收集在离心管中ꎬ将孢子悬浮液稀释 １００ 倍ꎬ充分
木霉分离使用的黄芪根腐病病株于 ２０２１ 年取 摇匀ꎬ吸 ６ μＬ 加到 Ｗａｔｓｏｎ １７７－２１２Ｃ 型血球计数
