Page 145 - 《广西植物》2025年第8期

８ 期 牛景萍等: 哈茨木霉 Ｔ９１３１ 鉴定及其拮抗病原菌和诱导黄芪抗病的作用分析 １ ５ １ １

板上放在显微镜下进行计数ꎬ最终获得孢子悬浮 检测(Ｄ７９９５７５￣００５０)试剂盒完成ꎮ
８ ￣１ １.２.６ 数据处理 利用 ＷＰＳ Ｏｆｆｉｃｅ Ｅｘｃｅｌ 软件对实
液浓度为 １×１０ ＣＦＵｍＬ ꎮ
１.２.５ 生理指标测定 选取饱满完整的蒙古黄芪 验数据进行计算ꎮ 采用 ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ９ 软件绘
种子种植于外口径为 １４ ｃｍ 的花盆中( 营养土与 制柱状图ꎮ 使用 ＳＰＳＳ ２３ 软件对数据进行显著性
蛭石比例为 １ ∶ ２ꎬＶ / Ｖ)ꎬ每盆种植 ２０ 粒左右ꎮ 将 差异分析ꎬ设置 Ｐ<０.０５ 为显著性水平ꎮ
其放置于 ２５ ℃ 、１６ ｈ 光照 / ８ ｈ 黑暗的培养箱中生
２ 结果与分析
长ꎬ待植株生长到 ４ ~ ５ 叶期ꎬ处理组每盆用 １５０
ｍＬ 哈茨木霉 Ｔ９１３１( Ｔ) 孢子悬浮液进行灌根ꎬ以
灌根 １５０ ｍＬ 纯水为对照ꎮ 灌根处理 ４８ ｈ 后ꎬ利用 ２.１ 木霉形态学鉴定
下胚轴接种法( 牛景萍等ꎬ２０２３) 对所有植株接种 前期对黄芪病株进行病原菌分离纯化共获得
生长 ５ ｄ 的 ＨＹＦＳ￣１( Ｈ)ꎬ分别在接种 ＨＹＦＳ￣１ 后 ５ 个真菌分离物( 牛景萍等ꎬ２０２３)ꎬ其中 １ 个分离

０、２４、４８ ｈ 时取根进行生理指标 ＰＡＬ、ＰＯＤ、ＳＯＤ、 真菌在 ＰＤＡ 培养基上迅速生长ꎬ初期菌落和菌丝
ＣＡＴ 和 Ｐｒｏ 的测定ꎬ每个生理指标重复 ３ 次ꎮ 生理 均为白色ꎬ菌丝呈絮状(图 １:Ａ)ꎬ后期菌落变为绿
指标测定分别采用生工生物工程(上海) 股份有限 色(图 １:Ｂ)ꎮ 分生孢子形状为圆形或卵圆形ꎬ边
公司的 ＰＡＬ 活性检测( Ｄ７９９５９９￣００５０)、ＰＯＤ 活性 缘光滑ꎬ颜色为绿色(图 １:Ｃ)ꎬ大小为(３.６ ~ ５.４)
检测( Ｄ７９９５９１￣００５０)、 ＳＯＤ 活 性 检 测 ( Ｄ７９９５９３￣ μｍ × (３.２ ~ ５.１) μｍꎮ 该木霉形态特征与哈茨木
００５０)、ＣＡＴ 含量检测( Ｄ７９９５９７￣００５０)、Ｐｒｏ 含量 霉形态特征基本一致ꎮ

Ａ. ＰＤＡ 培养基上生长 ３ ｄ 的菌落形态ꎻ Ｂ. ＰＤＡ 培养基上生长 ７ ｄ 的菌落形态ꎻ Ｃ. 分生孢子ꎮ
Ａ. Ｃｏｌｏｎｙ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｎ ＰＤＡ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ３ ｄꎻ Ｂ. Ｃｏｌｏｎｙ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｎ ＰＤＡ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ７ ｄꎻ Ｃ. Ｃｏｎｉｄｉａ.
图 １ 分离菌株的形态学特征
Ｆｉｇ. １ Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｓｔｒａｉｎ

２.２ 木霉分子鉴定 茨木霉ꎬ命名为 Ｔ９１３１ꎮ
利 用 真 菌 鉴 定 引 物 进 行 木 霉 ＩＴＳ 序 列 ２.３ 哈茨木霉对腐皮镰刀菌的拮抗作用
( ＧｅｎＢａｎｋ: ＰＱ４６５５８９ ) 和 ｔｅｆ１ 序 列 ( ＧｅｎＢａｎｋ: 为了 研 究 哈 茨 木 霉 Ｔ９１３１ 对 腐 皮 镰 刀 菌
ＰＱ４９０４１９)ＰＣＲ 扩增ꎬＩＴＳ１ 和 ＩＴＳ４ 扩增测序结果 ＨＹＦＳ￣１ 的抑制ꎬ对二者进行对峙试验ꎬ结果表明
表明 ＩＴＳ 序列片段大小为 ５９５ ｂｐ( 图 ２:Ａ)ꎬＥＦ１￣ Ｔ９１３１ 生长迅速ꎬ培养 １ ｄ 后二者相遇( 图 ４:Ａ)ꎻ
７２８Ｆ 和 ｔｅｆ１ｒｅｖ 扩增测序片段大小为 ６２６ ｂｐ(图 ３: 培养 ２ ｄ 后 Ｔ９１３１ 产生绿色孢子ꎬ开始向 ＨＹＦＳ￣１
Ａ)ꎮ 对两条序列分别构建系统发育进化树ꎬ以暹 蔓延ꎬ同时发现 ＨＹＦＳ￣１ 产生了橘黄色的色素( 图
罗芽孢杆菌( Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｉａｍｅｎｓｉｓ) 为外类群ꎬ结果表 ４:Ｂ)ꎻ３ ｄ 后 Ｔ９１３１ 覆盖整个 ＨＹＦＳ￣１ꎬＨＹＦＳ￣１ 停
明两条扩增序列与哈茨木霉的同源性最高( 图 ２: 止生长ꎬ３ ｄ 的抑制率为 ４７％±１％ꎻ６ ｄ 的抑制率为
Ｂꎻ图 ３:Ｂ)ꎬ结合形态特征ꎬ鉴定该分离菌株为哈 ７２％±１％(图 ４:Ｃ)ꎮ