Page 130 - 《广西植物》2026年第1期
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１ ２ ６ 广 西 植 物 ４６ 卷
ＭＥＭＥ ５. ５. ４ ( ｈｔｔｐｓ: / / ｍｅｍｅ￣ｓｕｉｔｅ. ｏｒｇ / ｍｅｍｅ / ｔｏｏｌｓ/ 公司] 完成水母雪兔子根、茎、叶、花组织总 ＲＮＡ
ｍｅｍｅ) ( Ｎｙｓｔｒｏｍ ＆ Ｍｃｋａｙꎬ ２０２１) 在 线 工 具 预 测 提取ꎬｃＤＮＡ 合成用 ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ Ⅱ反转录试剂盒
ＴＭ
ＧＰＡＴ 蛋白序列的保守基序ꎮ 搜寻 ｍｏｔｉｆ 值设置为 (ＴａＫａＲａꎬ大连) 进行ꎮ 根据水母雪兔子不同组织
１５ꎬ结构域宽度的最小值为 ６ꎬ最大值为 １００ꎬ其余 (根、 茎、 叶 和 花) 转 录 组 ＦＰＫＭ ( Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ Ｐｅｒ
参数保持默认ꎮ 最后利用 ＴＢｔｏｏｌｓ 软件绘制保守基 Ｋｉｌｏｂａｓｅ Ｍｉｌｌｉｏｎ)表达量数据ꎬ利用 ＴＢｔｏｏｌｓ 软件作
序图ꎮ 组织表达量热图ꎮ 通过 Ｐｒｉｍｅｒ Ｐｒｅｍｉｅｒ ５ 软件设计
１.２.６ 水母雪兔子 ＧＰＡＴ 基因家族顺式作用调节元 基因特异性引物( 表 １)ꎬ采用文献报道的泛素连
件 分 析 在 ＰｌａｎｔＣＡＲＥ ( ｈｔｔｐ: / / ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ. 接酶 ＵＰＬ７(郭佳磊ꎬ２０２１)作为内参ꎬ使用 ＦａｓｔＲｅａｌ
ｐｓｂ.ｕｇｅｎｔ.ｂｅ / ｗｅｂｔｏｏｌｓ/ ｐｌａｎｔｃａｒｅ / ｈｔｍｌ/ ) 数据库鉴定 ｑＰＣＲ ＰｒｅＭｉｘ Ｐｌｕｓ( ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ) 荧光定量预混试
水母雪兔子 ＳｍＧＰＡＴ 基因家族成员启动子区域的 剂盒 [天根生化科技( 北京) 有限公司] 进行 ｑＲＴ￣
顺式作用调控元件(起始密码子上游 １ ５００ ｂｐ)ꎮ ＰＣＲꎬ每组试验设置 ３ 个生物学重复ꎮ 荧光定量
１.２.７ 水母雪兔子 ＧＰＡＴ 基因家族的 ＲＮＡ 提取、组 ＰＣＲ 数据 使 用 ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ 仪 器 系 统 专 属 软 件 查
织表达和 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 分析 采用植物总 ＲＮＡ 提取 看ꎬ按照 ２ －ΔΔＣｔ 计算茎、叶和花相对根的表达量ꎬ用
试剂盒 ＲＮＡｐｒｅｐ Ｐｕｒｅ [天根生化科技( 北京) 有限 ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ １０ 软件作图ꎮ
表 １ 内参及 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 引物序列
Ｔａｂｌｅ １ Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｆｏｒ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ａｎｄ ｑＲＴ￣ＰＣＲ
基因名称 正向引物(５′→３′) 反向引物(５′→３′)
Ｇｅｎｅ ｎａｍｅ Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ (５′→３′) Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ (５′→３′)
ＵＰＬ７ ＧＣＡＧＴＣＡＣＴＴＴＧＧＣＡＣＴＴＣＧ ＧＣＣＴＧＡＡＧＣＡＡＧＧＣＧＴＴＡＡＧ
ＳｍＧＰＡＴ１ ＣＴＴＣＡＴＴＧＣＣＧＣＡＴＴＴＣＴ ＴＴＴＣＴＧＴＣＣＡＴＴＣＧＣＴＴＣ
ＳｍＧＰＡＴ２ ＣＴＴＣＡＴＴＧＣＣＧＣＡＴＴＴＣＴ ＴＴＴＴＣＴＧＴＣＣＡＴＴＣＧＣＴＴＣ
ＳｍＧＰＡＴ３ ＣＣＣＣＡＡＴＣＴＣＣＣＡＣＴＴＣＴ ＡＡＴＣＣＴＣＣＴＧＣＣＣＡＴＣＴＴ
ＳｍＧＰＡＴ６ ＴＴＴＴＧＧＴＡＧＧＧＡＡＡＴＧＧＡＡ ＴＴＧＡＡＧＴＡＡＡＣＡＣＧＧＡＴＡＡＧＧ
ＳｍＧＰＡＴ７ ＧＧＡＡＣＴＴＧＴＴＧＴＧＣＧＴＡＴ ＣＡＣＡＧＴＡＴＧＧＣＴＡＡＡＧＧＡＴ
ＳｍＧＰＡＴ８ ＡＡＴＡＣＧＣＣＧＣＣＴＡＴＧＴＣＣ ＡＡＡＧＡＡＣＣＣＴＴＣＣＡＡＣＣＣ
ＳｍＧＰＡＴ９ ＡＡＣＧＧＧＡＧＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴ ＴＴＴＧＴＧＡＴＧＣＴＧＴＧＡＧＧＧ
ＳｍＧＰＡＴ１３ ＣＡＣＴＣＧＴＣＧＣＴＴＴＡＣＴＣＡＣ ＣＡＣＡＡＣＴＡＡＴＣＴＴＴＣＧＴＣＣＴ
ＳｍＧＰＡＴ１４ ＣＡＡＴＣＣＴＴＣＡＣＡＡＣＣＣＡＣ ＧＣＴＧＣＴＴＧＣＴＴＴＣＣＣＴＡ
ｋＤ(ＳｍＧＰＡＴ２) ~ ６３.８６ ｋＤ( ＳｍＧＰＡＴ９) 之间ꎬ平均
２ 结果与分析 分子量为 ５４.０９ ｋＤꎻ等电点在 ５.９３( ＳｍＧＰＡＴ７) ~
１０. ０２ ( ＳｍＧＰＡＴ２ ) 之 间ꎬ 其 中 ＳｍＧＰＡＴ３、
２.１ 水母雪兔子 ＧＰＡＴ 基因家族鉴定与理化性质 ＳｍＧＰＡＴ５、ＳｍＧＰＡＴ７、ＳｍＧＰＡＴ８ 和 ＳｍＧＰＡＴ９ 等电
分析 点分别为 ７.１７、６.８４、５.９３、５.９７ 和 ７.３２ꎬ属于酸性
经全基因组鉴定ꎬ本研究在水母雪兔子中共 蛋白ꎬ其余 １０ 个蛋白等电点均大于 ８ꎬ属于碱性蛋
发现 １５ 个 ＧＰＡＴ 家族成员ꎮ 根据染色体定位信 白ꎻ不 稳 定 系 数 为 ３２. ５６ ( ＳｍＧＰＡＴ４ ) ~ ５４. ６４
息ꎬ这些基因被系统命名为 ＳｍＧＰＡＴ１ －ＳｍＧＰＡＴ１５ ( ＳｍＧＰＡＴ３ )ꎬ 其 中 ＳｍＧＰＡＴ１、 ＳｍＧＰＡＴ２、
(图 １)ꎮ 对 １５ 个 ＳｍＧＰＡＴ 基因理化性质分析ꎬ分 ＳｍＧＰＡＴ４、ＳｍＧＰＡＴ６ 和 ＳｍＧＰＡＴ１０ 共 ５ 个成员为
析结果如表 ２ 所示ꎬＳｍＧＰＡＴ 基因家族成员编码氨 稳定蛋白ꎬ其余 １０ 个成员为不稳定蛋白ꎻＧＰＡＴ 家
基酸数量为 ３５７(ＳｍＧＰＡＴ２) ~ ５６６( ＳｍＧＰＡＴ９)ꎬ平 族成员的亲脂系数为 ７９.５６ ~ １０４.６０ꎻ其中 ７ 个蛋
均长度约为 ４８２ 个氨基酸残基ꎻ分子量在 ４０. １６ 白 ( ＳｍＧＰＡＴ２、 ＳｍＧＰＡＴ３、 ＳｍＧＰＡＴ５、 ＳｍＧＰＡＴ７、
