Page 133 - 《广西植物》2026年第3期

３ 期 龙艳艳等: 广西莪术不同组织内生真菌多样性、环境适应性与药用成分积累的关系 ５ ０ ９

强抗逆性(龚记熠等ꎬ２０１８ꎻＨａｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２０ꎻＨｅ ｅｔ [ 如 醇 溶 浸 出 物 含 量 ( ａｌｃｏｈｏｌ￣ｓｏｌｕｂｌｅ ｅｘｔｒａｃｔ
ａｌ.ꎬ ２０２１ꎻＷａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２４)及调控药用植物活性 ｃｏｎｔｅｎｔꎬ ＡＳＥＣ)等] 显著关联的功能类群ꎬ建立菌
成分的合成与积累( 熊玉萍ꎬ２０１６ꎻ潘峰等ꎬ２０１８) 群－药材品质的实证关联ꎻ(３) 解析土壤因子[ 如
等多重生物学功能ꎮ 特别值得注意的是ꎬ药用植 ｐＨ、有机质( ｏｒｇａｎｉｃ ｍａｔｔｅｒꎬＯＭ)、速效钾( ａｖａｉｌａｂｌｅ

物蕴藏着丰富而独特的内生真菌资源( 李盼盼等ꎬ ｐｏｔａｓｓｉｕｍꎬＡＫ)等] 驱动内生真菌群落结构的关键
２０１８ꎻ刘 军 等ꎬ２０１８ꎻ杨 志 军 等ꎬ２０１８ꎻＭａｎｇａｎｙｉ ｅｔ 路径ꎮ 本研究将系统阐明环境－菌群－药材品质的
ａｌ.ꎬ ２０１９)ꎬ这些菌群与药材道地性的关系受到广 互作网络ꎬ不仅为莪术道地性形成的微生物机制

泛关注( 江 曙 等ꎬ２００８ꎻ梁 雪 娟ꎬ２０１４ꎻ周 冬 宇 等ꎬ 提供理论支撑ꎬ而且还可为定向调控有益菌群、优
２０２２ꎻ孙思胜等ꎬ２０２４)ꎮ 例如ꎬ杨娟等( ２０１９) 发 化栽培策略提供科学依据ꎮ
现杜仲内生真菌群落的组成与其活性成分含量显
著相关ꎬ沈湛云等(２０２１) 则揭示了玄参内生真菌 １ 材料与方法
菌群结构与哈巴苷和哈巴俄苷含量的相关性ꎮ 这
些研究结果表明ꎬ内生真菌的群落结构和功能可 １.１ 材料
能是道地药材品质形成的关键因素之一ꎮ １.１.１ 研究采样点 以广西钦州市灵山县(Ｌｉｎｇｓｈａｎ
现有研究已初步阐明内生真菌影响药材品质 Ｃｏｕｎｔｙꎬ ＬＳꎬ 海 拔 ３７. ５ ~ ７３. ９ ｍꎬ １０８°５３′３８″—
的 ５ 种主要途径:(１) 通过产生生长激素或促进养 １０８°５４′０７″Ｅ、 ２２° １７′ １８″—２２° １８′ ２５″ Ｎ )、 浦 北 县
分吸收直接或间接促进植物生长发育( Ｂａｏ ｅｔ ａｌ.ꎬ (Ｐｕｂｅｉ ＣｏｕｎｔｙꎬＰＢꎬ海拔 ６４.０~６５.４ ｍꎬ１０９°１９′２３″—
２０２１ꎻ盛可心ꎬ２０２３)ꎻ(２) 增强植物抗胁迫能力ꎬ通 １０９°２０′０５″Ｅ、 ２２° ０１′ ５０″—２２°０６′０２″Ｎ ) 和 钦 南 区
过调节宿主抗氧化系统(如提升活性氧清除效率) (Ｑｉｎｎａｎ ＤｉｓｔｒｉｃｔꎬＱＮꎬ海拔 ２５.９~２９.９ ｍꎬ１０８°４４′０４″—
和维持代谢稳态来保障药用成分的稳定积累(王英 １０８°４４′０６″Ｅ、２１°５８′０７″—２１°５８′０８″Ｎ)为 ３ 个采样点ꎮ
男等ꎬ２０１８ꎻＪｉａ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２５)ꎻ(３) 直接合成药用成 １.１.２ 样品采集 于 ２０２３ 年 ３ 月下旬进行采样ꎬ每
分ꎬ如 Ｙａｎｇ 等(２０１４) 报道的能独立合成紫杉醇的 个采样点设计 ３ 个样方(２５ ｍ × ２５ ｍ)ꎬ每个样方
青霉 ＮＲＲＬ ６２４３１ 内生真菌ꎻ(４)激活宿主代谢通路 间距在 ５０ ｍ 以上ꎬ每个样方内采用五点取样法采
关键酶ꎬ如 Ｃｈｅｎ 等(２０２１)发现毛霉 ＤＦ２０ 可上调丹 集 １０ 株完整健康的广西莪术植株ꎬ将每个采样点
参酮生物合成途径的关键酶基因表达ꎻ(５) 通过介 采集到的 ３０ 株广西莪术按根( Ｇ)、根茎( ＧＪ)、茎
导信号分子调控植物次级代谢(Ｚｈｕ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２２ꎻ梁 (Ｊ)、叶(Ｙ) 和花( Ｈ) ５ 个 组织分别混匀后ꎬ均分
静茹和丁常宏ꎬ２０２３)ꎮ 然而ꎬ传统分离方法受培养 为 ３ 等份即 ３ 个重复ꎬ再将其中的每份根茎样品分
依赖性限制(仅可获取 １％ ~１０％可培养菌株)ꎬ极大 成 ２ 份ꎬ其中 １ 份和根、茎、叶和花 ４ 种组织ꎬ３ 个
制约了互作机制研究(李春艳ꎬ２０２３)ꎬ亟须结合现 采样点共计 ４５ 份样品用于广西莪术内生真菌高
代分子生态学技术突破此瓶颈ꎮ 通量测序ꎬ另 １ 份用于主要药材品质成分分析(３
尽管莪术的药理作用已有较深入研究( 杜泽 个采样点共计 ９ 份根茎样品)ꎻ采集莪术植株样品
锋等ꎬ２０２１)ꎬ但是其内生真菌与药材品质的关联 时ꎬ收集好轻轻从根系上抖落的泥土ꎬ每个取样点

机制尚不清楚:(１) 组织水平真菌分布规律不清ꎻ 的根际土壤混匀后均分为 ３ 等份ꎬ共计采集到 ９ 份
(２)菌群－药材品质关联缺乏实证ꎻ(３) 环境驱动 根际土壤样品用于土壤理化性质的检测ꎮ 所有样
机制不明ꎮ 上述局限阻碍了莪术道地性形成机制 品放入自封袋中ꎬ编号记录ꎬ带回实验室后保存于
的系统性解析ꎮ 近年来ꎬ高通量测序技术的发展 ４ ℃ ꎬ并及时送检ꎮ
为破解这一难题提供了新路径ꎬ通过免培养技术 １.２ 试验方法

可全面揭示不可培养真菌的功能潜力( 金辉等ꎬ １.２.１ ＤＮＡ 提取及高通量测序 采集的 ４５ 份广西
２０２１)ꎮ 基于此ꎬ本研究以钦州主产区的道地广西 莪术样本经流水冲洗后ꎬ先分别用 ７５％乙醇浸泡 １
莪术为研究对象ꎬ整合 Ｉｌｌｕｍｉｎａ 高通量测序、多元 ｍｉｎꎬ再用 ２％次氯酸钠溶液浸泡 ８ ｍｉｎꎬ最后用无
统计和化学计量学方法ꎬ拟探讨以下问题:(１) 揭 菌水漂洗 ５ 次ꎬ用无菌滤纸吸干表层水分后备用ꎻ
示广西莪术不同组织(根、根茎、茎、叶、花) 内生真 同时ꎬ取最后一次的漂洗液涂布于 ＰＤＡ 固体培养
菌群落的分布规律ꎻ(２) 鉴定与药材品质标记物 基上ꎬ于 ２８ ℃ 培养 ７ ｄꎬ检测表面消毒效果ꎮ 采用