Page 44 - 《广西植物》2026年第6期
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６ 期      郭正虎等: 内生真菌 Ｓｕｂｓｅｓｓｉｌａ ｔｕｒｂｉｎａｔａ ＲＧ１７０ 对肉桂幼苗生理特性及次生代谢的影响                            ９ ５ ９

            ＮＳ６、ＮＳ３１、ＮＳ３２ 和 ＮＳ３３ 具有多种促生潜力且能                        肉桂新鲜种子于 ２０２４ 年 ４ 月采自广西壮族自
            改善雷公藤组培苗生长ꎬ并促进根和茎中雷公藤                              治区平南县(１１０°２５′２７″Ｅ、２３°４２′５９″Ｎ)ꎬ并于当
            红素积累ꎻ谢泽碧等(２０２３) 发现ꎬ接种真菌 Ｙ１１８                       天带回实验室ꎮ 由广西中医药大学药学院黄荣韶
            可显著或极显著增加两面针的鲜重、株高、茎基宽                             教授鉴定为樟科植物肉桂( Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ ｃａｓｓｉａ) 种
            和茎中宽ꎬ有利于促进两面针幼苗生长发育ꎬ具有                             子ꎮ 供试 植 株 为 课 题 组 培 育 的 肉 桂 两 年 生 实
            提高两面针药材根、茎、叶鲜重和干重及品质的效                             生苗ꎮ
            应ꎮ 内生菌对宿主的诸多特殊作用ꎬ引起了越来                                 仪器与试剂:高效液相色谱仪( ＬＣ￣４０ꎬ日本岛
            越广泛的关注ꎬ同时也为药用植物品质的形成提                              津公司)ꎻ紫外分光光度计( ＵＶ￣２６００ꎬ日本岛津公

            供了新的思路ꎮ                                            司)ꎻ立式压力蒸汽灭菌锅(ＬＤＺＦ￣５０Ｌꎬ上海申安医
                 目前ꎬ肉桂内生真菌的研究大多聚焦于抗菌                           疗器械厂)ꎮ 肉桂醛标准品( ＬＯＴ:ＪＢ２５３１０８ꎬ上海
            活性(王洁等ꎬ２０２４ꎻ庞亚琪等ꎬ２０２５)ꎬ其在系统调                       源叶生物科 技 有 限 公 司)ꎻ肉 桂 醇 标 准 品 ( ＬＯＴ:
            控肉桂生理代谢与品质形成中的作用尚待深入探                              Ｙ０４Ｎ７Ｃ２３８５０ꎬ上海源叶生物科技有限公司)ꎻ肉
            究ꎮ 尽管组织培养是研究“ 菌－植” 互作的理想体                          桂酸标准品( ＬＯＴ:Ｊ２０ＩＡ２２００１８ꎬ上海源叶生物科
            系ꎬ但是ꎬ樟科植物外植体消毒困难且组培过程易                             技有限公司)ꎮ
            出现褐化(翁小婷等ꎬ２０２３)ꎬ导致肉桂组培技术近                          １.２ 菌株促生活性检测
            年未有突破ꎬ难以获得大量组培苗用于试验ꎮ 为                                 真菌活化后分别接种于溶磷培养基、解钾培
            此ꎬ本研究通过构建无菌种子萌发体系获取肉桂                              养基和 Ａｓｈｂｙ 培养基中ꎬ在 ２８ ℃ 避光条件下培养
            无菌苗ꎬ以解决试验材料获取受限的问题ꎮ 前期                             ７ ｄꎬ观察菌落周围是否产生透明圈ꎬ透明圈的出现
            研究中ꎬ课题组从健康肉桂组织中分离获得一株                              可作为菌株具备溶解无机磷和解离钾离子的指示
            内 生 真 菌 ＲＧ１７０ꎬ 经 鉴 定 为 Ｓｕｂｓｅｓｓｉｌａ ｔｕｒｂｉｎａｔａ        标志ꎻ而能够在 Ａｓｈｂｙ 培养基上生长是菌株具有固
            ( Ｂｅｌｔｒａｎｉａｃｅａｅ)ꎮ Ｓｕｂｓｅｓｓｉｌａ 是 Ｌｉｎ 等 ( ２０１７) 基 于   氮能力的标准ꎮ 具体培养基组成参考陈梦(２０２１)
            多基因系统发育分析及形态学特征建立的新属ꎬ                              的研究ꎮ
            目前仅报道有 Ｓ. ｔｕｒｂｉｎａｔａ 一种ꎬ其典型特征包括                     １.３ 内生真菌与肉桂苗共培养体系构建
            具有从辐射状裂片基部细胞产生的深色刚毛ꎬ以                                  取新鲜肉桂种子ꎬ依次经 ７５％ 乙醇(３０ ｓ) 及
            及独特的陀螺状分生孢子ꎮ 该物种最初作为腐生                             ２.５％次氯酸钠(１８ ｍｉｎ)进行表面灭菌ꎮ 无菌蒸馏
            真菌发现于热带植物凋落物中ꎬ而关于其作为内                              水漂洗 ３ 次ꎬ于超净工作台中将种子转移至水琼
            生真菌与宿主植物相互作用的研究尚未见报道ꎮ                              脂培养基ꎬ在 ２５ ℃ 、暗培养条件下萌发ꎮ ２５ ~ ３０ ｄ
            为此ꎬ本研究以前期分离出的内生真菌 ＲＧ１７０ 为                          后ꎬ待种子萌发ꎬ将其转移至含 １ / ２ ＭＳ 培养基的
            试验菌株ꎬ采用无菌共培养与盆栽试验方法ꎬ系统                             组培瓶中(每瓶中有 ８ 棵苗)ꎮ
            评估 ＲＧ１７０ 对肉桂生长、生理特性及次生代谢物                              选取长势一致且植株健壮的肉桂无菌苗( 叶
            积累 的 影 响ꎬ 拟 探 讨 以 下 问 题: ( １ ) 内 生 真 菌             ２ ~ ３ 片ꎬ侧根 ３ ~ ４ 条)ꎬ分组编号并称取鲜重ꎬ转
            ＲＧ１７０ 是否具备稳定的促生能力ꎻ( ２) 内生真菌                        移至 １ / ２ＭＳ(７.５ ｇＬ 蔗糖)的共生培养基中ꎮ 在
                                                                                   ￣１
            ＲＧ１７０ 与肉桂的共生互作是否能够协同促进宿主                           根部接种新鲜菌饼(直径 ６ ｍｍ)ꎮ 对照组(ＣＫ) 接
            生长并调控其次生代谢物积累ꎮ 本研究结果旨在                             种等量无菌空白琼脂块ꎮ 每个处理 １５ 棵苗ꎬ于 ２５

            为肉桂的绿色栽培和提质增效提供科学依据ꎮ                               ℃ 人工气候箱、１６ ｈ 光周期下共培养 ４５ ｄꎮ 之后
                                                               对种苗生长状况进行分析ꎬ包括株高、鲜重、侧根
            １  材料与方法                                           数及叶面积等生长指标(孟娉等ꎬ２０１７)ꎮ
                                                               １.４ 菌剂的制备与盆栽试验
            １.１ 试验材料                                               按照以下配方配制菌剂:８８％玉米芯＋１０％麦
                 供试菌株:课题组前期从健康肉桂叶组织中                           麸＋１％石膏＋１％石灰ꎮ 料水质量比为 １ ∶ １ꎬ将水
            分离 培 养 获 得 的 内 生 真 菌 ＲＧ１７０ꎬ 经 鉴 定 为                倒入干样ꎬ搅拌均匀ꎬ分装培养瓶中ꎬ灭菌后冷却
            Ｓｕｂｓｅｓｓｉｌａ ｔｕｒｂｉｎａｔａꎬ现保藏于广西中医药大学中药                 备用ꎮ 将已活化的直径为 ６ ｍｍ 的 ＲＧ１７０ 菌饼置
            资源研究团队微生物实验室ꎮ                                      于无菌培养瓶中央ꎬ密封ꎬ于 ２８ ℃ 下培养 ３０ ｄꎬ即
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