Page 69 - 《广西植物》2020年第10期
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１ ４ ５ ２ 广 西 植 物 ４０ 卷
华大基因进行测序ꎮ
２ 标本来源鉴定ꎬ 确证模式产地 ３.２.３ 测序结果 Ｐｅｔｒｏｃｏｄｏｎ ｓｃｏｐｕｌｏｒｕｍ １￣平坝的
ＩＴＳ 序列:ＴＴＣＣＧＴＡＧＧＴＧＡＡＣＣＴＧＣＧＧＡＡＧＧＡＴＣＡ
２０１８ 年 ７ 月 ２４ 日ꎬ作者前往平坝高峰山进行了 ＴＴＧＴＣＧＡＡＡＣＣＴＧＣＡＡＡＴＣＴＧＡＣＣＣＧＴＧＡＡＣＡＴＧＴ
标本采集ꎬ编号为 ２０１８０７２４０２(图 ２)ꎮ 高峰山世纬苣 ＴＣＡＡＡＣＧＴＴＣＴＴＧＣＧＴＴＣＧＣＧＡＴＧＧＴＧＧＡＴＧＣＴＴＣ
苔标本与模式标本特征十分吻合ꎬ 植株和花都纤小ꎮ ＴＴＧＣＧＴＣＣＡＡＣＡＴＣＡＣＧＡＣＣＴＣＧＡＣＣＣＣＡＡＧＣＧＧＣ
世纬苣苔野外形态与花的解剖如下(图 ３)ꎬ花 ＧＣＡＡＧＴＣＴＣＴＴＧＧＧＣＧＴＡＣＣＡＡＣＣＴＣＴＣＧＧＣＧＣＧＧ
冠裂片 ５ 裂至花朵的 １ / ３ 左右ꎬ雄蕊 ５ꎬ花药横状 ＡＡＡＧＣＧＣＣＡＡＧＧＡＡＡＡＧＣＡＴＡＣＣＧＡＡＣＧＣＣＴＣＴＣ
纵裂ꎮ 花期 ７ 月—８ 月ꎮ ＣＡＴＣＣＴＧＧＴＧＣＴＧＴＴＣＧＣＧＧＴＡＣＣＣＡＧＧＡＣＧＴＧＡＣ
通过标本和形态的比对鉴定ꎬ我们所考证的 ＧＡＧＧＡＧＣＧＴＣＴＡＴＴＧＡＧＴＡＴＡＧＡＴＡＴＡＡＣＧＡＣＴＣＴ
地址———安顺市平坝所分布的世纬苣苔与世纬苣 ＣＧＧＣＡＡＣＧＧＡＴＡＴＣＴＣＧＧＣＴＣＴＣＧＣＡＴＣＧＡＴＧＡＡＧ
苔模式标本上所呈现的所有特征都相符ꎬ从植物 ＡＡＣＧＴＡＧＣＧＡＡＡＴＧＣＧＡＴＡＣＴＴＧＧＴＧＴＧＡＡＴＴＧＣＡ
经典分类学和形态学的角度看ꎬ可以确定安顺市 ＧＡＡＴＣＣＣＧＴＧＡＡＣＣＡＴＣＧＡＧＴＣＴＴＴＧＡＡＣＧＣＡＡＧＴ
平坝区高峰山是世纬苣苔模式标本产地无疑ꎮ ＴＧＣＧＴＣＣＧＡＡＧＣＣＡＴＣＡＧＧＣＴＧＡＧＧＧＣＡＣＧＴＣＴＧＴ
ＣＴＧＧＧＣＧＴＣＡＣＧＣＧＴＣＴＣＧＴＣＧＣＣＣＣＣＴＣＣＣＡＣＡＴ
３ 分子证据调取ꎬ 确定模式产地 ＣＴＴＣＴＴＣＣＣＣＣＡＣＴＣＧＡＧＧＧＴＧＣＣＧＧＧＡＧＡＴＧＡＴＧ
ＧＣＧＣＡＣＧＡＡＧＧＡＧＧＧＧＣＧＧＡＴＡＴＴＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴ
世纬苣苔的系统位置
ＴＧＴＣＣＴＴＧＴＧＴＡＧＣＧＧＣＴＧＧＣＡＣＡＡＡＴＡＡＣＡＴＡＣＣ
ＧＴＧＴＣＧＡＡＧＧＡＡＧＴＣＡＣＡＣＧＡＴＡＣＧＴＧＧＴＧＧＴＴＧ
调取目前经考证认定的模式产地———安顺平 ＧＡＴＴＣＣＴＣＡＡＣＴＴＧＣＧＡＧＣＴＧＴＣＧＴＧＴＡＧＧＡＣＴＧＣ
坝所分 布 的 世 纬 苣 苔 ｒＤＮＡ 的 ＩＴＳ 序 列 ( 引 物 ＡＴＣＧＡＧＣＣＡＣＧＧＧＣＡＣＧＡＣＣＣＡＡＴＧＧＣＧＡＡＡＧＧＴ
ＩＴＳ１: ５′￣ＴＣＣＧＴＡＧＧＴＧＡＡＣＣＴＧＣＧＧ￣３′ꎬ ＩＴＳ４: ＣＧＣＣＣＴＣＧＡＴＣＧＣＧＡＣＣＣＣＡＧＧＴＣＡＧＧＣＧＧＧＡＴＣ
５′￣ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＧＣ￣３′)ꎬ 并 利 用 ＮＣＢＩ ＡＣＣＣＧＣＴＧＡＧＴＴＴＡＡＧＣＡＴＡＴＣＡＡＴꎮ
上现有的石山苣苔属 ＩＴＳ 序列构建系统发育树ꎬ确 Ｐｅｔｒｏｃｏｄｏｎ ｓｃｏｐｕｌｏｒｕｍ ２￣平坝的 ＩＴＳ 序列:
定模式产地世纬苣苔的系统位置ꎮ ＧＴＡＧＧＴＧＡＡＣＣＴＧＣＧＧＡＡＧＧＡＴＣＡＴＴＧＴＣＧＡ
３.１ 材料 ＡＡＣＣＴＧＣＡＡＡＴＣＴＧＡＣＣＣＧＴＧＡＡＣＡＴＧＴＴＣＡＡＡＣＧ
采集安顺平坝世纬苣苔当年生、近成熟、健康 ＴＴＣＴＴＧＣＧＴＴＣＧＣＧＡＴＧＧＴＧＧＡＴＧＣＴＴＣＴＴＧＣＧＴＣＣ
的新鲜叶片ꎬ用硅胶干燥封存(高连明等ꎬ２０１２)ꎮ ＡＡＣＡＴＣＡＣＧＡＣＣＴＣＧＡＣＣＣＣＡＡＧＣＧＧＣＧＣＡＡＧＴＣＴ
３.２ ＩＴＳ 序列获取 ＣＴＴＧＧＧＣＧＴＡＣＣＡＡＣＣＴＣＴＣＧＧＣＧＣＧＧＡＡＡＧＣＧＣＣ
３.２.１ 总 ＤＮＡ 提取 取安顺平坝世纬苣苔硅胶干 ＡＡＧＧＡＡＡＡＧＣＡＴＡＣＣＧＡＡＣＧＣＣＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＧＧＴ
燥的叶片 ２ 组ꎬ采用改良后的 ＣＴＡＢ 法分别提取基 ＧＣＴＧＴＴＣＧＣＧＧＴＡＣＣＣＡＧＧＡＣＧＴＧＡＣＧＡＧＧＡＧＣＧ
因组总 ＤＮＡꎮ ＴＣＴＡＴＴＧＡＧＴＡＴＡＧＡＴＡＴＡＡＣＧＡＣＴＣＴＣＧＧＣＡＡＣＧ
３.２.２ ＰＣＲ 扩增和测序 ＰＣＲ 反应体系(２０ μＬ): ＧＡＴＡＴＣＴＣＧＧＣＴＣＴＣＧＣＡＴＣＧＡＴＧＡＡＧＡＡＣＧＴＡＧＣ
￣１
１０ × Ｂｕｆｆｅｒ ２ μＬꎻｄＮＴＰ(２.５ ｍｍｏｌＬ )ꎬ１.６ μＬꎻ ＧＡＡＡＴＧＣＧＡＴＡＣＴＴＧＧＴＧＴＧＡＡＴＴＧＣＡＧＡＡＴＣＣＣＧ
ＤＤＨ Ｏ １１.３ μＬꎻＴａｑ 酶 ０.１ μＬꎻＤＮＡ 模板 １ μＬꎻ ＴＧＡＡＣＣＡＴＣＧＡＧＴＣＴＴＴＧＡＡＣＧＣＡＡＧＴＴＧＣＧＴＣＣＧ
２
正 向 引 物 ( ２ ｍｍｏｌ Ｌ ) ２ μＬꎻ 反 向 引 物 ＡＡＧＣＣＡＴＣＡＧＧＣＴＧＡＧＧＧＣＡＣＧＴＣＴＧＴＣＴＧＧＧＣＧＴ
￣１
￣１
(２ ｍｍｏｌＬ ) ２ μＬꎮ ＣＡＣＧＣＧＴＣＴＣＧＴＣＧＣＣＣＣＣＴＣＣＣＡＣＡＴＣＴＴＣＴＴＣＣＣ
ＰＣＲ 反应程序: ９４ ℃ ꎬ４ ｍｉｎꎻ ( ９４ ℃ ꎬ４５ ｓꎻ ＣＣＡＣＴＣＧＡＧＧＧＴＧＣＣＧＧＧＡＧＡＴＧＡＴＧＧＣＧＣＡＣＧＡ
５４ ℃ ꎬ４５ ｓꎻ７２ ℃ ꎬ４５ ｓ) ３２ 个循环ꎻ７２ ℃ ꎬ１０ ｍｉｎꎮ ＡＧＧＡＧＧＧＧＣＧＧＡＴＡＴＴＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＴＧＴＣＣＴＴＧＴ
ＰＣＲ 产物用 １％琼脂糖的凝胶电泳检测后ꎬ送 ＧＴＡＧＣＧＧＣＴＧＧＣＡＣＡＡＡＴＡＡＣＡＴＡＣＣＧＴＧＴＣＧＡＡＧ
