Page 53 - 《广西植物》2020年第12期
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ϟ Ꭾ ሕ ऐ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗ԡ 卷
ዛጶᓂ᧧୩ዶ 检测 ̀ዹ۪ϟԡ 抗血清效价ᤥ ଧ 重组蛋白的 ۼᔀ༁ᡷᔀʢႿ ାᆍᡷᡷᔽႿ੫ 鉴定জ ᤹ 蛋白 ᥘᑕʢҴᔀʢଫ ϓ 重组蛋白 ̀ᔽ༁᥋̀ዹ۪ϟԡᤥ ࣷ 转
̵ዞۗቴϟԡ 拟南芥总蛋白 ۼᔀ༁ᡷᔀʢႿ ାᆍᡷᡷᔽႿ੫ 鉴定জ ᤹ 蛋白 ᥘᑕʢҴᔀʢଫ ԣ 野生型拟南芥ଫ ᇺ 转 ̵ዞۗቴϟԡ 拟南芥 ᨃጶϟଫ 转 ̵ዞۗቴϟԡ 拟南
芥 ᨃጶँᤥ
ዛ ጶᓂ᧧୩ዶ ᡷᆍ ʛᔀᡷᔀዹᡷ ᑕႿᡷᔽ༁ᔀʢࣼቝ ᡷᔽᡷᔀʢ ᆍʢ ̀ዹ۪ϟԡ ଧ ۼᔀ༁ᡷᔀʢႿ ାᆍᡷᡷᔽႿ੫ ᆍʢ ʢᔀዹᆍቝᤦᔽႿᑕႿᡷ ᡱʢᆍᡷᔀᔽႿ ̀ᔽ༁᥋̀ዹ۪ϟԡজ ᤹ ۪ʢᆍᡷᔀᔽႿ ᥘᑕʢҴᔀʢଫ ϓ ᔀዹᆍቝᤦᔽႿᑕႿᡷ
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图 ጢজ ̀ዹ۪ϟԡ 抗血清效价及特异性检测
èᔽ੫ ጢজ ᧕ᔀᡷᔀዹᡷᔽᆍႿ ᆍ ᑕႿᡷᔽ༁ᔀʢࣼቝ ᡷᔽᡷᔀʢ ᤦᢃ ጶᓂ᧧୩ዶ ᑕႿʛ ༁ᡱᔀዹᔽᑕᔽझᑕᡷᔽᆍႿ ᤦᢃ ۼᔀ༁ᡷᔀʢႿ ାᆍᡷᡷᔽႿ੫ ᆍʢ ̀ዹ۪ϟԡ
计可减少试验次数和缩短试验周期ᖔ并能明确各 层析获得纯化的目的蛋白ᖔ免疫小鼠获得 ̀ዹ۪ϟԡ
因素对试验结果的影响是否显著以及各因素的交 抗血清ᖔጶᓂ᧧୩ዶ 检测结果显示制备的 ̀ዹ۪ϟԡ 抗血
互作用ᖔ常被用于多因素多水平的最优搭配探索 清效价达 ϟ ᨒ ࿗ሕ ԡԡԡᤥ 抗体对抗原蛋白的专一性
ྉ温耀安等ᖔԡϟ࿗ɯᤥ 本试验采用正交设计对原核 是抗体应用的关键ᖔ 本研究提取了野生型和转
诱导表达条件进行优化ᖔ最终确定在温度 Ꭾ ቩ ܦ ̵ዞۗቴϟԡ 基 因 拟 南 芥中的总蛋白ᖔ 通过 ۼᔀ༁ᡷᔀʢႿ
᥋ϟ ᥋ϟ ାᆍᡷᡷᔽႿ੫ 鉴定 ̀ዹ۪ϟԡ 抗血清的特异性ᖔ结果两个
᧧۪ఋ᥈ ԡᎮ ቝቝᆍኼᓂ ܦ时间 ᤃၤܦ转速 ԡԡ ʢኼቝᔽႿ
时ᖔ融合蛋白 ̀ዹ۪ϟԡ 在大肠杆菌内的可溶性含量 转基因株系 ᨃጶϟܦᨃጶँ 在 ϟऐ Ҵ᧕ᑕ 附近均出现一条
最高ᖔ从而增加了 ̀ዹ۪ϟԡ 重组蛋白的数量和纯化 特异条带ᖔ而野生型拟南芥总蛋白没有出现杂交
效率ᖔ有助于蛋白纯化及多克隆抗体的制备ᤥ 赵 条带ᖔ因此ᖔ制备的 ̀ዹ۪ϟԡ 抗血清具有高特异性ᤥ
乐等ྉԡϟጢɯ选择 ᡱጶఋሕᑕ 作为表达载体ᖔ采用控制 以上结果为利用该抗血清进一步研究 ̀ዹ۪ϟԡ 蛋
变量法对诱导温度ܦ诱导时间ܦ᧧۪ఋ᥈ 浓度及诱导起 白的组织和细胞定位及生物学功能奠定了基础ᤥ
始宿主菌密度这 ࿗ 个因素对蛋白表达的影响研究 综上所述ᖔ本研究成功构建了盐穗木病程相
᥋ϟ
发现ᖔ诱导温度 ሕԡ ቩ ܦ᧧۪ఋ᥈ 浓度 ԡ࿗ ቝቝᆍኼᓂ ܦ 关蛋白 ̀ዹ۪ϟԡ 的原核表达载体 ᡱጶఋऐᑕ᥋̵ዞۗቴϟԡᤥ
起始宿主菌密度 ዶ 为 ԡऐܦ诱导时间 ऐၤ 为蛋白 通过 ࿗ 因素 ሕ 水平正交试验获得了可 溶 性 ̀ᔽ༁᥋
ᤃԡԡ
可溶 性表达的最佳条件ᤥ 张玉等 ྉ ԡϟऐɯ 选择 ̀ዹ۪ϟԡ 重组蛋白表达的最优诱导条件᧥温度 Ꭾ
ᡱऊᆍʛ ֒低温表达载体对目的蛋白表达条件研究 ቩ ܦ᧧۪ఋ᥈ ԡ Ꭾ ቝቝᆍኼ ᓂ ܦ时间 ᤃၤܦ转速 ԡԡ ʢኼ
᥋ϟ
显示ᖔ与 ሕᎮ ቩ 相比ᖔϟጢ ቩ 条件下融合蛋白表达量 ቝᔽႿ ᖔ并纯化获得 ጢԡԡ ဂ੫ኼቝᓂ 的重组蛋白ᤥ 制
᥋ϟ
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更大ᖔ可溶性更高ᤥ 因此ᖔ推测蛋白诱导表达的最 备的 多克隆抗体 效 价 达 ϟ ᨒ ࿗ሕ ԡԡԡᖔ ۼᔀ༁ᡷᔀʢႿ
佳培养条件与所选择的表达载体和目的蛋白自身 ାᆍᡷᡷᔽႿ੫ 检测该血清能与转基因植物中异源表达的
的性质密切相关ᤥ ̀ዹ۪ϟԡ 特异性结合ᖔ可用于 ̀ዹ۪ϟԡ 的亚细胞定
շ
在最佳条件下诱导表达重组蛋白ᖔ用 શᔽ 亲和 位研究ᤥ
