Page 43 - 《广西植物》2020年第3期

３ 期 候师师等: 海南西海岸四种真红树根系土壤放线菌物种多样性及其延缓衰老活性初筛 ３ ２ ３

(Ｌａｋｏｗｓｋｉ ＆ Ｈｅｋｉｍｉꎬ１９９８)ꎬ所有数据采用 ＳＰＳＳ Ｓｔａ￣
表 ２ 从根系土壤分离的 ２２ 株可培养放线菌
ｔｉｓｔｉｃｓ １７.０ 进行统计分析ꎬ并用 Ｅｘｃｅｌ ２０１３ 软件做
Ｔａｂｌｅ ２ Ｔｈｅ ２２ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒａｂｌｅ ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ
表、绘图ꎬ评价放线菌发酵产物延缓衰老的生物活性ꎮ
ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ｓｏｉｌ
用 Ｍ９ 缓冲液将虫体洗净ꎬ离心弃去上清液ꎻ
￣１
以 １ ∶ ３ 的比例将裂解液(１ ｍＬ ５ ｍｏｌＬ 的 ＮａＯＨ １６Ｓ ｒＲＮＡ
基因序列
和 ０.５ ｍＬ ５％的 ＮａＣｌＯ 混匀使用) 加入虫体中ꎬ震 相似性 来源
菌株编号 相近种
１６Ｓ ｒＲＮＡ Ｓｏｕｒｃｅ
荡离心后ꎮ 分别将 ２０ μＬ 大肠杆菌发酵液、３０ μＬ Ｓｔｒａｉｎ ｃｏｄｅ Ｏｒｉｇｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ
线虫 ｐｅｌｌｅｔ、１５０ μＬ Ｍ９ Ｂｕｆｆｅｒ 加入 ９６ 孔板的各个 ｉｄｅｎｔｉｔｙ
(％)
孔中ꎬ设置阴性对照ꎮ 置于 ２０ ℃ 生化培养箱中培
ＩＭＤＧＸ ６０１２ Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ ｌｅｘｉｎｇｔｏｎｅｎｓｉｓ ９７.７５ １－１４
养 ４８ ｈ 后可得 Ｌ４ 期线虫ꎮ
粗提物样品用 １％ 的 ＤＭＳＯ 溶液超声溶解成 ＩＭＤＧＸ ６０２８ Ａ. ｎｉｉｇａｔｅｎｓｉｓ ９８.１５ １－１４
浓度为 ５００ μｇｍＬ 药液ꎬ将培养好的 Ｌ４ 期线虫 ＩＭＤＧＸ ６１１８ Ｃｕｒｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｌｂｉｄｕｍ ９８.３２ １－１４
￣１
ＩＭＤＧＸ ６３２６ Ｃ. ｃｉｔｒｅｕｍ ９８.４４ １－１４
挑至 加 有 ５０ μＬ 药 液 的 ＮＧＭ 培 养 基 ( Ｂｒｅｎｎｅｒꎬ
１９７４)ꎬ置于 ２０ ℃ 生化培养箱中进行培养ꎬ每组 ２ ＩＭＤＧＸ ６１１９ Ｄｅｍｅｑｕｉｎａ ｓａｌｓｉｎｅｍｏｒｉｓ ９８.４５ ２－２
个平板ꎬ每个平板 ２０ 条 Ｌ４ 期线虫ꎬ此时培养天数 ＩＭＤＧＸ ６１３１ Ｉｓｏｐｔｅｒｉｃｏｌａ ｊｉａｎｇｓｕｅｎｓｉｓ ９９.８７ １－１４
记为 ０ ｄꎮ 此后ꎬ隔天对培养的线虫进行计数ꎬ观 ＩＭＤＧＸ ６１７３ Ｌｙｓｉｎｉｍｉｃｒｏｂｉｕｍ ｐｅｌｏｐｈｉｌｕｍ ９９.７４ ２－２
察并记录线虫生存、死亡及剔除的数量ꎬ将线虫转 ＩＭＤＧＸ ６４２８ Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｕｒａｎｔｉａｃｕｍ ９８.８０ １－４

移至新的培养皿ꎬ直至线虫全部死亡ꎮ
ＩＭＤＧＸ ６１３７ Ｍ. ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｕｍ ９９.３３ ２－３
ＩＭＤＧＸ ６１０１ Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ ９９.４９ １－３
２ 结果与分析
ＩＭＤＧＸ ６０１７ Ｓｉｎｏｍｏｎａｓ ｆｌａｖａ ９９.１０ １－１４
ＩＭＤＧＸ ６０８６ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃｏｅｌｉｃｏｆｌａｖｕｓ ９９.４９ ２－２
２.１ 红树植物根系放线菌多样性分析
ＩＭＤＧＸ ６２１５ Ｓ. ｃｏｒｃｈｏｒｕｓｉｉ ９９.０９ ７－７
根据菌落形态特征及 １６Ｓ ｒＲＮＡ 基因序列分
ＩＭＤＧＸ ６１８４ Ｓ. ｄｒｏｚｄｏｗｉｃｚｉｉ ９９.４８ １－１４
析结果ꎬ本研究从 ７ 份红树林根系土壤中共分离
鉴定得到 ２２ 株放线菌ꎬ由 ９ 个属组成ꎬ隶属于 ４ 目 ＩＭＤＧＸ ６０１４ Ｓ. ｆｕｓｃｉｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ ９９.８７ １－１４
７ 科ꎬ链霉菌属( Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ) 分离出 １１ 株菌为优 ＩＭＤＧＸ ６０３０ Ｓ. ｌｏｎｇｗｏｏｄｅｎｓｉｓ ９９.４９ １－１４
势菌群ꎬ详细物种信息如表 ２ 所示ꎮ 菌株 ＩＭＤＧＸ ＩＭＤＧＸ ６２２０ Ｓ. ｎｏｇａｌａｔｅｒ ９８.９５ ７－７
６０１２、ＩＭＤＧＸ ６０２８、 ＩＭＤＧＸ ６１１８、 ＩＭＤＧＸ ６３２６、 ＩＭＤＧＸ ６０９３ Ｓ. ｒｏｓｅｏｌｕｓ ９９.３４ ７－７
ＩＭＤＧＸ ６１１９ 分 别 与 有 效 发 表 菌 株 Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ ＩＭＤＧＸ ６０３７ Ｓ. ｓｕｎｄａｒｂａｎｓｅｎｓｉｓ ９８.９３ １－４
ｌｅｘｉｎｇｔｏｎｅｎｓｉｓ、Ａ. ｎｉｉｇａｔｅｎｓｉｓ、Ｃｕｒｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｌｂｉｄｕｍ、 ＩＭＤＧＸ ６０４０ Ｓ. ｔｕｎｉｓｉｅｎｓｉｓ ９９.３４ ２－２
Ｃ. ｃｉｔｒｅｕｍ、Ｄｅｍｅｑｕｉｎａ ｓａｌｓｉｎｅｍｏｒｉｓ 的最高相似率为 ＩＭＤＧＸ ６０１３ Ｓ. ｖｉｒｉｄｏｂｒｕｎｎｅｕｓ ９９.０９ １－１４
９７.７５％、９８.１５％、９８.３２％、９８.４４％、９８.４５％ꎮ 根据
ＩＭＤＧＸ ６１８２ Ｓ. ｘａｎｔｈｏｌｉｔｉｃｕｓ １００.００ １－４
放线菌 １６Ｓ ｒＲＮＡ 基因序列相似性小于 ９８.６５％的
菌株 属 于 潜 在 新 物 种 的 归 类 原 则 ( Ｋｉｍ ｅｔ ａｌꎬ
２０１４)ꎬ以上五株根系放线菌可能为潜在的新物 短小杆菌属( Ｃｕｒｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ)、Ｓｉｎｏｍｏｎａ、链霉菌属
(Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ)ꎬ分离菌株数量最多且菌属最为丰
种ꎮ ＩＭＤＧＸ ６１１９ 分离于白骨壤根系土壤(２－２)ꎬ
其余四株潜在新菌株均来自于红海榄根系土壤 富ꎮ 其次是从 ２－２ 土壤样品分离得到 ４ 株菌株隶
属于 ３ 个属ꎬ包括 Ｄｅｍｅｑｕｉｎａ、Ｌｙｓｉｎｉｍｉｃｒｏｂｉｕｍ 和链
(１－１４)ꎮ
２.２ ２２ 株放线菌在不同红树土壤样品、培养基中的 霉菌属(Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ)ꎮ 而 ２－１ 土壤样品未分离得
分布 到放线菌ꎮ
２２ 株根系细菌在 ７ 份不同植物根系土壤样品分 ７ 种分离培养基对红树根系土壤放线菌分离
布情况如图 １ꎮ 从 １－１４ 土壤样品分离获得 １０ 株菌株 效果见图 ２ꎮ 研究结果表明 Ｍ１１ 和 Ｐ３ 培养基更

隶属于 ４ 个属ꎬ 包括拟无枝酸菌属(Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ)、 适合于海洋放线菌分选ꎬ其中从 Ｍ１１ 培养基共分