Page 56 - 《广西植物》2020年第3期

３ ３ ６ 广 西 植 物 ４０ 卷
( １. Ｇｕａｎｇｘｉ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｍａｉｎｅ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ Ｇｕａｎｇｘｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｎａｎｎｉｎｇ ５３０００７ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２. Ｇｕａｎｇｘｉ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ
Ｍａｒｉｎｅ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａｎｄ Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ Ｂｉｏｓｙｎｅｔｈｅｓｉｓ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ Ｇｕａｎｇｘｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｎａｎｎｉｎｇ ５３０００７ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ３. Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｎｏｎ￣Ｆｏｏｄ Ｂｉｏｒｅｆｉｎｅｒｙꎬ Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｎｏｎ￣Ｆｏｏｄ Ｂｉｏｍａｓｓ ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ Ｇｕａｎｇｘｉ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ
Ｂｉｏ￣ｒｅｆｉｎｅｒｙꎬ Ｇｕａｎｇｘｉ Ｂｉｏｍａｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒꎬ Ｇｕａｎｇｘｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｎａｎｎｉｎｇ ５３０００７ꎬ Ｃｈｉｎａ )

Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｍａｎｇｒｏｖｅ ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ ｐｌａｙ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｔｅｒｉａｌ ｃｙｃｌｅꎬ ｅｎｅｒｇｙ ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ ｈｅａｌｔｈ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ
ｍａｎｇｒｏｖｅ ｐｌａｎｔｓ. Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｅｎｒｉｃｈ ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｆｏｒ ｆｕｒｔｈｅｒ ｒｅｖｅａｌｉｎｇ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｄｏ￣
ｐｈｙｔｅｓ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ ｉｎ ｍａｎｇｒｏｖｅ ｐｌａｎｔｓꎬ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙꎬ ｗｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｔｈｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ａｎｄ
ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｏｆ Ａｅｇｉｃｅｒａｓ ｃｏｒｎｉｃｕｌａｔｕｍ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｂｅｉｈａｉ Ｃｉｔｙꎬ ａｎｄ ｓｔｕｄｉｅｄ ｔｈｅ ａｎｔｉ￣ｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ
ｔｈｏｓｅ ｓｔｒａｉｎｓ. Ｔｈｅ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ａｎｄ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ Ａ. ｃｏｒｎｉｃｕｌａｔｕｍ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｓｉｘ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ
ｍｅｄｉａ. Ｔｈｅ ａｎｔｉ￣ｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ａｌｌ ｓｐｅｃｉｅｓ ｗｅｒｅ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ｏｕｔ ｂｙ ｔｈｒｏｍｂｏｌｙｓｉｓ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｉｎ ｖｉｔｒｏ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ
ｗｅｒｅ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ: (１) Ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ １６Ｓ ｒＲＮＡ ｇｅｎｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅꎬ ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ １２５ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｏｂ￣
ｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ｓｏｉｌ ｏｆ Ａ. ｃｏｒｎｉｃｕｌａｔｕｍ. Ｔｈｅｙ ｗｅｒｅ ｃｌａｓｓｉｆｉｅｄ ｉｎｔｏ ７４ ｓｐｅｃｉｅｓꎬ ３９ ｇｅｎｅｒａꎬ ２７ ｆａｍｉ￣
ｌｉｅｓ ａｎｄ ３ ｐｈｙｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａꎬ Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ ａｎｄ Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ. Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ. ｗａｓ ｔｈｅ ｄｏｍｉｎａｎｔ ｇｅｎｕｓꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ
ｒａｔｅ ｗａｓ １３.５％. (２) Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ａｎｔｉ￣ｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｔｅｓｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ １８ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｉｔｈ ａｎｔｉ￣ｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗｅｒｅ
ｓｃｒｅｅｎｅｄ ｏｕｔꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｒｅａｃｈｅｄ ｔｏ ２４.３２％. Ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｗａｓ ｆｕｒｔｈｅｒ ｖｅｒｉｆｉｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｒｅ￣
ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｎｄ ｒｅ￣ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｔｅｓｔ. Ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｂ１８５０ꎬ Ｂ１９８９ ａｎｄ Ｂ２６３２ ｗｉｔｈ ｓｔｒｏｎｇ ａｎｔｉ￣ｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗｅｒｅ ｏｂ￣
ｔａｉｎｅｄ. Ｔｏ ｓｕｍ ｕｐꎬ ｔｈｅｒｅ ａｒｅ ａｂｕｎｄａｎｔ ｃｕｌｔｕｒａｂｌｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｉｎ Ａｅｇｉｃｅｒａｓ ｃｏｒｎｉｃｕｌａｔｕｍ ｉｎ Ｂｅｉｈａｉ ｏｆ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ
ｗｈｉｃｈ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｓｏｕｒｃｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｎｅｗ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｎｄ ｔｈｒｏｍｂｏｌｙｔｉｃ ｄｒｕｇｓ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ａｅｇｉｃｅｒａｓ ｃｏｒｎｉｃｕｌａｔｕｍꎬ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａꎬ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａꎬ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ ａｎｔｉ￣ｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ

血栓性疾病是一类严重威胁人类健康的常见 酶ꎮ 刘晨光等(２００１) 分离到一株海洋假单胞菌
病、多发病ꎬ常表现为心绞痛、心肌梗死、脑栓塞和 (Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ.)可产生较强的直接溶解纤维蛋
脑梗死等ꎬ多以中老年人为主要发病群体ꎬ现发病 白和具有抗血栓活性的碱性蛋白酶 ＭＰＡＰꎮ 这些
人群逐渐趋于年轻化ꎬ且发病率与死亡率在不断 为从海洋微生物来源寻找抗血栓的药物提供了很
上升(乔德水等ꎬ２００９ꎻＪäｒｅｍｏ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１３)ꎮ 血栓 好的依据ꎮ 桐花树系红树林中广布种之一ꎬ广泛
性疾病的起因主要是血管腔中形成血栓使其变得 分布于亚洲至大洋洲热带海岸ꎬ在我国的广东、广
狭窄或闭塞ꎬ导致主要器官缺血或梗死ꎮ 而血栓 西、福建 和 海 南 等 省 ( 区) 均 有 分 布 ( 缪 绅 裕 等ꎬ
是人体内血液组成成分在血管或心脏内形成的凝 ２００７)ꎮ 我国的桐花树由于受到常年全日潮水的
块ꎬ可脱落凝块随血液流至远端ꎬ从而堵塞血管腔 浸淹ꎬ使之生长状况、营养发育、生物量分配、激素
(Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００８)ꎮ 目前临床上主要有三大类治 水平和相关酶系等方面的生理生态性质表现出梯
疗血栓性疾病的药物ꎬ即抗血小板类、抗凝血类和 度性反应(何斌源等ꎬ２００７)ꎬ其内生菌长期生活于
溶血栓药物ꎮ 传统的溶血栓药物在临床上虽具有 植物体内的特殊环境中并与之协同进化ꎮ 植物体
确切的疗效和良好的安全性ꎬ但其存在的半衰期 为其提供生长所必需的能量和营养的同时ꎬ内生
短、纤维蛋白特异性低和价格贵等缺点也不容忽 菌又会通过自身的代谢、信号传导对植物体产生响
视(翁郁华等ꎬ２０１０)ꎮ 因此ꎬ寻找能解决上述问题 应(文才艺等ꎬ２００４)ꎮ 本研究以广西北海滩涂的桐
的溶血栓药物具有广泛的应用前景ꎮ 花树中分离、培养和鉴定出的植物内生和根际细菌
近年来ꎬ海洋微生物是新型纤溶酶的重要来 为样本ꎬ旨在筛选出具有高效抗血栓活性的菌株ꎮ

源之一ꎮ Ｌａｋｓｈｍｉ ｅｔ ａｌ.(２０１３) 从海洋沙雷菌( Ｓｅｒ￣
ｒａｔｉａ ｓｐ. ＲＳＰＢ１１) 分离到一种具有纤维蛋白水解 １ 材料与方法
活性和高热稳定的碱性金属蛋白酶ꎮ 李占强等
(２００９)从南海沉积物中分离到的短小芽孢杆菌 １.１ 材料
(Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｉｌｕｓ Ｂ５８１５)ꎬ其纤溶酶活性好且产酶 １.１.１ 样本来源 桐花树于 ２０１８ 年 ８ 月在广西北
量高ꎮ Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ. ( ２０１３) 从海洋枯 草 芽 孢 杆 菌 海滩涂(１０８°５０′４２″ Ｅ、 ２１°５５′２５″ Ｎ) 采集ꎮ 样品
(Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＨＡＳ￣３)分离到一种纤维蛋白水解 装于密封袋ꎬ４ ℃ 低温保藏带回实验室ꎬ尽快完成