Page 121 - 《广西植物》2020年第4期

４ 期 李润田等: 培养条件对西洋参不定根诱导的影响 ５ ５ ９

加不同浓度的蔗糖(１５、２５、３０、４０ ｇＬ )ꎬｐＨ 值 在接种培养 ７ ｄ 后ꎬ外植体的切口端( 伤口) 出现
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６.０ꎬ接种后培养ꎬ其余同 １.２.１ꎮ 膨胀等愈伤化现象ꎻ随着时间延长ꎬ愈伤组织表面
１.２.４ 氮源对西洋参不定根诱导的影响 以 ＭＳ＋３０ 逐渐呈现颗粒状ꎻ在培养 ２０ ｄ 后ꎬ愈伤组织表面陆
ｇＬ 蔗糖＋２ ｍｇＬ ＩＢＡ ＋０.５％琼脂粉等作为基 续分化出不定根ꎮ 从诱导培养 ２８ ｄ 后的不定根诱
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－ 导率统计结果( 图 １) 可以看出ꎬＭＳ 更适合不定根
本培养基配方ꎬ按照表 １ 添加不同比例的 ＮＯ ∶
３
ＮＨ ꎬ培养基中总氮量固定为 ３０ ｍｍｏｌＬ ꎬ培养基 诱导ꎬＢ 的效果较差ꎮ 这可能与不定根发生过程
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＋
４ ５
ｐＨ６.０ꎬ外植体接种后培养ꎬ其余同 １.２.１ꎮ 中涉及愈伤组织中细胞脱分化、分裂、生长等有
关ꎬ因为这些细胞变化需要活跃的生物物质代谢、
表 １ 硝态氮和铵态氮配比 能量代谢以及细胞的重构等ꎬ必须提供充足的营
Ｔａｂｌｅ １ Ｒａｔｉｏ ｏｆ ｎｉｔｒａｔｅ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ａｎｄ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｎｉｔｒｏｇｅｎ
养元素才能满足上述细胞活动ꎮ ＭＳ 培养基的最
ＮＯ ３ 浓度 ＮＨ ４ 浓度 主要特点就是矿质元素和其他营养成分含量高ꎬ
－
＋
序号 － ＋
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＮＯ ３ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＮＨ ４
Ｎｏ. 与不定根诱导过程对营养成分的需求相一致ꎬ本
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(ｍｍｏｌＬ ) (ｍｍｏｌＬ )
结果也证明了这个推测ꎮ
１ ０ ３０.０
２.２ 吲哚丁酸( ＩＢＡ) 浓度对西洋参不定根的诱导
２ ４.０ ２６.０
效果
３ ８.０ ２２.０
培养基中 ＩＢＡ 浓度对西洋参不定根的诱导情
４ １２.０ １８.０
５ １５.０ １５.０ 况及诱导率统计结果分别如图版Ⅱ和图 ２ 所示ꎮ
通过比较发现ꎬ当浓度较低时ꎬ外植体上发生较多
６ ２０.０ １０.０
７ ２４.０ ６.０
愈伤组织ꎬ表面上不定根数量少且短( 图版Ⅱ:Ａꎬ
８ ２８.０ ２.０
ＢꎬＣ)ꎻ当 ＩＢＡ 浓度较高时ꎬ不定根诱导发生的效
９ ３０.０ ０
果较好ꎬ不定根分布密度大且不定根较长( 图版
Ⅱ:Ｄꎬ ＥꎬＦ)ꎻ当 ＩＢＡ 浓度高于 １ ｍｇＬ 时ꎬ外植
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３－
１.２.５ ＰＯ 对西洋参不定根诱导的影响 以 ＭＳ ￣１
４ 体上不定根诱导率达到(８２±３)％以上ꎬ２ ｍｇＬ
－ ＋ ￣１
(ＮＯ ∶ ＮＨ 为 ２０ ∶ １０) ＋３０ ｇＬ 蔗糖＋２ ｍｇ 时不定根诱导率达到(９６±３.５)％ꎮ 综合考虑诱导
３ ４
Ｌ ＩＢＡ＋０.５％琼脂粉为培养基组成配方ꎬ添加不同 率和培养基成本ꎬ在后续的试验中选择 ２ ｍｇＬ ￣１
￣１
３－ ￣１
浓度的 ＰＯ (５、１０、１５、２０、２５、３０ ｍｍｏｌＬ )ꎬ培 ＩＢＡ 作为添加浓度ꎮ
４
养基 ｐＨ６.０ꎬ外植体接种后培养ꎬ其余同 １.２.１ꎮ ２.３ 碳源浓度对西洋参不定根的诱导效果
１.２.６ 数据统计与分析 上述所有试验均随机分 在离体条件下ꎬ培养基中添加碳源除了为不
组ꎬ设置 ３ 组重复ꎬ每组总接种数量为 ５０ 个外植 定根诱导提供能量外ꎬ还对培养基渗透势有很大
体ꎻ从接种第 ４ 天开始ꎬ每天观察外植体变化及不 影响ꎬ因此其添加浓度是非常重要的参数ꎮ 根据
定根发生情况ꎬ并以培养 ２８ ｄ 的不定根诱导结果 前面结果ꎬ在 ＭＳ＋２ ｍｇＬ ＩＢＡ＋０.５％琼脂基本配
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计算诱导率ꎬ实验数据采用 Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ ２０１０ 和 方中添加不同浓度的蔗糖ꎬ２８ ｄ 后观察统计外植
Ｏｒｉｇｉｎ ２０１７ 进行分析ꎬＰ<０.０５ 差异显著ꎮ 不定根诱 体上不定根的发生和诱导率( 图版Ⅲ和图 ３)ꎮ 结

导率＝(发生不定根的外植体数/ 外植体总数)×１００％ 果表明ꎬ尽管在所有蔗糖浓度的培养基中ꎬ外植体
上都能发生愈伤组织ꎬ但是不定根发生情况差异
２ 结果与分析 很大ꎮ 当糖量为 ３０ ｇＬ 时ꎬ西洋参不定根诱导
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率较大ꎻ当糖量较低时(１５ ｇＬ )ꎬ西洋参不定根
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２.１ 基本培养基的选择 诱导率较低ꎻ当蔗糖浓度达到 ４０ ｇＬ 时ꎬ虽然不
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通过观察不定根发生情况确定适合西洋参不 定根发生率相对较高ꎬ但不定根较短ꎬ说明高浓度
定根诱导的基本培养基类型ꎬ结果如图版Ⅰ所示ꎮ 蔗糖具有抑制生长的作用ꎬ 这可能与糖量过高引