Page 118 - 《广西植物》2021年第4期
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ᤃ ԡ ԡ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗ϟ 卷
萜类化合物的合成中扮演着重要角色ᤥ 李锋等 ϓॹᇺ Ԯᐹᤩᤩۗۗ 基因的克隆
ྉԡϟँɯ 发现在 ટᡙᤩᤩۗۗϟ 基因上调的烟草中ᖔ二 采用甜橙ྉ ࣷᔠᡙʗࣩ ᔠႥᓣႥᔠᖔશऊା᧧ 登录号᧥ᣮ۪ ᡸ
萜类化合物与质体色素的含量均有所增加ଫ魏攀 ԡԡᤃ࿗ᤃᤃᎮϟँϟɯ的 ᤩᤩۗۗ 基因为模板ᖔ本地 ାᓂዶ୩ఋ
等ྉԡϟᤃɯ发现 ટᡙᤩᤩۗۗϟ 基因被特异性沉默后的 搜索竹叶花椒的转录组数据ᖔ得到竹叶花椒的牻
普通烟草 ሕᤃ 表现出植株矮小ܦ生长缓慢ܦ质体 牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶基因ྉԮᐹᤩᤩۗۗɯ 序
色素含量低ܦ花期延迟 等 特 点 ྉ 魏攀等ᖔ ԡϟᤃɯᤥ 列ᖔ以该序列为依据ᖔ设计特异引物ྉԻᑕ᥈᥈۪۪୩ϟè᧥
目前人们已在芥蓝ྉ薛生玲等ᖔ ԡϟऐɯܦ烟草ྉ 魏攀 ጢࣕ᥋ዶఋ᥈ዶऊఋఋ᥈ఋ᥈ఋ᥈ዶዶఋዶఋऊ᥈᥈᥋ሕࣕଫ Իᑕ᥈᥈۪۪୩ϟ᧥
等ᖔ ԡϟᤃɯܦ茶树ྉ 姚雪倩等ᖔ ԡϟᎮɯܦ篦子三尖杉 ጢࣕ᥋ఋऊዶዶఋఋऊఋ᥈ऊऊఋዶఋዶዶ᥈ऊዶዶ᥋ሕࣕɯᤥ 用竹叶花椒
ྉ齐小琼等ᖔ ԡϟᤃɯܦ艾纳香ྉ 夏奇峰等ᖔ ԡϟᤃɯ 等 嫁接树和实生树嫩梢的 ዹ᧕શዶ 为模板ᖔԻᑕ᥈᥈۪۪୩ϟè
多种植物中克隆得到牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合 和 Իᑕ᥈᥈۪۪୩ϟ 为引物ᖔ以 ̀ᔽèᔽ᧕શዶ 聚合酶进行扩
成酶基因ᖔ但尚未见到有关竹叶花椒 Ԯᐹᤩᤩۗۗ 基 增得到 Ԯᐹᤩᤩۗۗ 全基因片段ᤥ 经过电泳检测后
将目的片段连接到 ᡱВᥘఋ 载体上ᖔ经 ۪ऊ 检测ᖔ送
因的报道ᤥ 本研究对竹叶花椒 Ԯᐹᤩᤩۗۗ 基因进
行克隆与分析ᖔ为后续深入研究竹叶花椒香气形 往生工基因进行测序ᤥ
ϓॹ Ԯᐹᤩᤩۗۗ 基因蛋白序列分析
成的分子机理及利用分子生物学手段选育优良品
使用 શऊା᧧ 上的 ᨃè èᔽႿʛᔀʢ 分析获得的竹叶
种提供理论依据ᤥ
花椒 牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成 酶 基 因
ϟজ 材料与方法 ྉԮᐹᤩᤩۗۗɯ的 ዹ᧕શዶ 序列ᖔ得到蛋白氨基酸序列ᖔ
并用 ۪ʢᆍ۪ᑕʢᑕቝ 预测其蛋白的理化性质ଫ用 ୩ᔽ੫Ⴟᑕ۪
࿗ϟ ༁ᔀʢᔀʢ 预测该蛋白有无信号肽ଫ先通过 શऊା᧧ 对
ϓॹϓ 材料ܓ试剂和仪器
牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶基因的蛋白氨基
材料᧥ 于云南省林业科学院树 木 园
酸序列进行序列搜索ᖔ然后选择与 Իᑕ᥈᥈۪۪୩ 蛋白
ྉϟԡ࿗࿗ࣕ࿗ጢᎮ× ጶᖔ ጢԡऐࣕጢԡᤃᎮ× શɯ采集竹叶花椒
序列同源性较高的植物牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸
嫁接树和实生树嫩梢上的叶和茎ᖔ用液氮保存带
合成酶蛋白序列ᖔ再利用 ᧕શዶᥘዶશ 将其与竹叶花
回实验室ᖔ放在ͱऐԡ ቩ 冰箱中ᤥ
椒 ᥈᥈۪۪୩ 蛋白序列 进行相似度比对ᖔ最后利用
试剂和仪器᧥̀ᔽèᔽ᧕શዶ 聚合酶ྉ 北京全式金ɯଫ
ᥘጶ᥈ዶ Ꭾԡ 构建系统进化树ᤥ
ᡱВᥘఋ 载体ܦఋ࿗ 连接酶ܦ感受态细胞 ᧕̀ጢም 订购于
ϓॹጇ 基因的转录模式分析
生工生物工程ྉ 上海ɯ 股份有限公司ଫશዶ 提取试
成功 合 成 ዹ᧕શዶ 第 一 条链后ᖔ 以 ఋԻᑕ᥈᥈۪۪୩è
剂盒 ྉ ͐ᔽᑕ੫ᔀႿɯଫ 质 粒 提取试剂盒 ྉ 康为世纪ɯଫ
ྉጢࣕ᥋ዶऊ᥈ऊऊዶዶዶዶऊఋఋዶዶዶऊ᥈ऊऊ᥈᥋ሕࣕɯ 和 ఋԻᑕ᥈᥈۪۪୩
୩ࣼᡱᔀʢ ఋ 试剂盒ྉఋᑕҴᑕʢᑕɯᤥ ۪ऊ 仪ྉାᔽᆍ᥋ᑕʛɯܦ实
ྉጢࣕ᥋᥈ዶ᥈ዶ᥈ఋఋఋऊఋఋऊఋఋఋ᥈᥈ఋዶዶ᥋ሕࣕɯ 作为特异引物ᖔ
时荧光定量 ۪ऊ 仪ྉዶା᧧ɯܦ离心机ྉାᑕዹҴቝᑕႿɯᤥ
且以 ࣼᤦᔽीࣼᔽᡷᔽႿ༁ྉશऊା᧧ 登录号᧥ ᥘँጢሕᎮँɯ作为内参
ϓॹԣ ቴટዛ 提取与 ዞᦵટዛ 合成 基因ᖔ经荧光定量 ۪ऊ 检测竹叶花椒 Ԯᐹᤩᤩۗۗ 基因
将竹叶花椒的实生树和嫁接树的叶ܦ茎放到 在嫁接树茎ܦ嫁接树叶ܦ实生树茎和实生树叶中的
液氮中研磨为粉末后ᖔ采用植物 શዶ 提取试剂盒 具体表达情况ᤥ 用 ୩ɟା ᥈ʢᔀᔀႿ ྉᔽႿᔽᡷʢᆍ੫ᔀႿɯ检测特
提取竹叶花椒叶和茎总 શዶᖔ其操作按照试剂盒 异引物的 ۪ऊ 产物ᤥጢ Pᓂ 反应体系的可选参数如
说明书进行ᖔશዶ 质量检测使用浓度为 ϟᠮ的琼脂 下᧥ġ୩ɟା 绿色主混合物 ϟጢ Pᓂᖔ上下游引物ྉϟԡ
糖 凝胶电泳完成ᖔ 检测 શዶ 浓度则使 用 Pቝኼᓂ ɯԡጢ Pᓂᖔ模板ྉዹ᧕શዶɯϟ Pᓂᖔʛʛ̀ ᨃϟԡጢ Pᓂᤥ
᥋ϟ
શᑕႿᆍ᧕ʢᆍᡱఋᥘ ԡԡԡᤥ 选择较完 整ᖔ 浓度适宜的 使用 ۪ऊ 热循环仪 ྉ ዶା᧧ Ꭾሕԡԡଫ 应用生物系统ᖔ
શዶᖔ根据制造商的说明ᖔ使用反转录试剂盒以 ϟ èᆍ༁ᡷᔀʢ ऊᔽᡷᢃᖔ ऊዶᖔ В୩ዶɯᤥ ۪ऊ 反应程序᧥变性程序
P੫ 总 શዶ 进行 ዹ᧕શዶ 合成ᖔ并置于ͱԡ ቩ 冰箱中 ྉँጢቩᖔ ϟԡቝᔽႿɯᖔ放大定量程序重复 ࿗ጢ 次ྉँጢ ቩᖔ
保存备用ᤥ 其余的 શዶ 置于ͱऐԡ ቩ 冰箱中ᤥ ϟጢ ༁ଫ ጢᎮ ቩᖔ ϟԡ ༁ଫ Ꭾ ቩᖔ ϟጢ ༁ଫ 单次荧光测量ɯᖔ熔
