Page 119 - 《广西植物》2021年第4期

࿗ 期 关淑文等᧥ 竹叶花椒 Ԯᐹᤩᤩۗۗ୒ 基因克隆与表达分析 ᤃ ԡ ϟ
化曲线程序ྉᤃԡ ቩ至 ँጢ ቩᖔ 加热速度 ԡ঎ϟ ቩᖔ 连续 基因的开放阅读框ᖔ۪ʢᆍ۪ᑕʢᑕቝ 预测其蛋白的理化

荧光测量ɯᖔ最后冷却至 ࿗ԡ ቩᤥ 以延伸因子 ϟ᥋ᑕ᤟ᡱၤᑕ 性质ᤥ 结果显示᧥该蛋白由 ሕᤃϟ 个氨基酸残基组
ྉጶèϟᑕɯ基因作为基因正常表达的内部调控因子ᖔ通 成ᖔ其分子量为 ሕँ ԡᎮँ঎ϟ࿗ ᧕ᑕᖔ理论等电点 ᡱ᧧ 为
过 ी۪ऊ኏ 分析每个样品的至少两个独立的生物学重 ᤃ঎ሕऐଫ将 Իᑕ᥈᥈۪۪୩ 蛋白序列放在美国国家生物技

复和每个生物学重复的三个技术重复ᖔ以确保再现 术信息中心ྉશऊା᧧ɯ 上进行比对ᖔ发现推断得到的
性和可靠性ᤥ 用比较 ऊ 值法计算相对基因表达量 ሕᤃϟ 个氨基酸序列与已知功能的甜橙ྉ༁औᔀᔀᡷ ᆍʢᑕႿ੫ᔀᖔ
ᡷ
ͱσσऊ ᡷ ᖔσσऊ ᢉྉ试验目标基因组的 ऊ 值
஦ᖔ其中 ஦ ᢉ ԰ ࣷᔠᡙʗࣩ໧ ໧ᔠႥᓣႥ໧ᔠ໧ɯܦ 克里曼丁 桔 ྉ ዹ᤟ᔀቝᔀႿᡷᔽႿᔀ ቝᑕႿʛᑕʢᔽႿᖔ
ᡷ ᡷ
ͱ试验组参考基因的 ऊ 值ɯ ͱྉ对照组目标基因的 ऊ ࣷॹ ዞᤀᓣቂᓣႥᡙᔠႥᐹɯܦ柚子ྉᡱᆍቝᔀ᤟ᆍᖔ ࣷॹ ቂᐹଝᔠቂᐹɯ和白梨ྉऔၤᔽᡷᔀ
ᡷ ᡷ
值ͱ对照组参考基因的 ऊ 值ɯᤥ ᡱᔀᑕʢᖔ ۗᡥʗࣩ໧ ᤇʗᓣᡙ໧ዞ၊Ⴅᓣᔠʐᓣʗᔠɯ的 ᥈᥈۪۪୩ 蛋白序列相似性
ᡷ
较高ᖔ 结果为 Իᑕ᥈᥈۪۪୩ 蛋 白 序 列与甜橙的
԰জ 结果与分析 ऊ༁᥈᥈۪۪୩ 蛋白序列相似性为 ऐ԰঎ሕ԰ᠮᖔ与克里曼丁
桔的 ऊዹ᥈᥈۪۪୩ 蛋白序列相似性为 ऐ԰঎ԡ࿗ᠮᖔ与柚子

ԣॹϓ ቴટዛ 提取和 Ԯᐹᤩᤩۗۗ୒ 基因克隆 的 ऊቝ᥈᥈۪۪୩ 蛋白序列相似性为 ऐ԰঎ԡ࿗ᠮᖔ与白梨
利用植物总 ኏શዶ 提取试剂盒成功提取竹叶花 的 ۪ᤦ᥈᥈۪۪୩ 蛋白序列相似性为 Ꭾሕ঎ጢሕᠮᤥ 对竹叶
椒嫁接树和实生树嫩梢的总 ኏શዶ 后ᖔ反转录得到 花椒 Իᑕ᥈᥈۪۪୩ 蛋白序 列 分 析 发 现ᖔ 其含有 ԰ 个
ዹ᧕શዶᤥ 以 Իᑕ᥈᥈۪۪୩ϟè 和 Իᑕ᥈᥈۪۪୩ϟ኏ 作为特异 ᥈᥈۪۪୩ 蛋白特有的保守区ᖔ即天冬氨酸富集基序
引物ᖔ 成功克隆得到竹叶花椒 Ԯᐹᤩᤩۗۗ୒ 基因 ᥥ᧕᧕ᣮᣮᣮᣮ᧕ɼ和ᥥ᧕᧕ᣮᣮ᧕ɼ ྉ ᣮ 为任意氨基酸ɯᖔ并
且发现其含有聚异戊二烯合成酶的 ጢ 个特征性功
ྉશऊା᧧ 登录号᧥ ᥘ᣽ँጢሕᎮሕϟɯᤥ 在 શऊା᧧ ᨃ኏è èᔽႿʛᔀʢ
软件上对测序结果分析显示ᖔԮᐹᤩᤩۗۗ୒ 基因具有 能结构域ྉሙͱιɯ ྉ图 ԰ɯᤥ
完 整的全长 ϟ ԡऐᤃ ᤦᡱ 的 ዹ᧕શዶ 开放阅读框 将推导出来的 Իᑕ᥈᥈۪۪୩ 蛋白序列放在 શऊା᧧ 上
进行比对后ᖔ可得到其他植物的 ᥈᥈۪۪୩ 蛋白序列ᖔ用
ྉᨃ኏èɯᖔ编码 ሕᤃϟ 个氨基酸 ྉ图 ϟɯᤥ
ᥘጶ᥈ዶ Ꭾ঎ԡ 中自带的 ऊ᤟ࣼ༁ᡷᔀʢ ۼ 进行蛋白序列多重比
对ᖔ用 શᔀᔽ੫ၤᤦᆍʢ᥋ᢼᆍᔽႿᔽႿ੫ 算法ྉ自检举ϟԡԡԡ次ɯᖔ绘制出

竹叶花椒 ᥈᥈۪۪୩ 与其他植物 ᥈᥈۪۪୩ 的进化树ྉ图
ሕɯᤥ 结果显示竹叶花椒 Իᑕ᥈᥈۪۪୩ 蛋白与甜橙ܦ克里
曼丁桔ܦ柚子的 ᥈᥈۪۪୩ 蛋白聚为一类ྉ图 ԰ɯᤥ
ԣॹᇺ 竹叶花椒 Ԯᐹᤩᤩۗۗ୒ 基因的转录模式分析
采集竹叶花椒嫁接树和实生树的嫩梢ᖔ用液氮
保存带回实验室ᖔ用植物总 ኏શዶ 提取试剂盒提取竹
叶花椒嫁接树茎ܦ嫁接树叶ܦ实生树茎和实生树叶
的总 ኏શዶ 并反转录成 ዹ᧕શዶᤥ 用特异引 物

ఋԻᑕ᥈᥈۪۪୩è 和 ఋԻᑕ᥈᥈۪۪୩኏ 检测在嫁接树叶ܦ嫁接
树茎ܦ实生树叶和实生树茎中 Ԯᐹᤩᤩۗۗ୒ 基因的具体
表达情况ྉ图 ࿗ɯᖔ结果显示ᖔԮᐹᤩᤩۗۗ୒ 基因在竹叶
图 ϟজ 竹叶花椒 Ԯᐹᤩᤩۗۗ୒ 基因克隆 花椒实生树的叶中表达量最高ᖔ其次是嫁接树的
èᔽ੫঎ ϟজ ऊ᤟ᆍႿᔽႿ੫ ᆍ஦ Ԯᐹᤩᤩۗۗ୒ ੫ᔀႿᔀ ஦ʢᆍቝ
叶ᖔ再到实生树的茎ᖔ在嫁接树的茎中表达量最低ᤥ
ԮᐹႥᡙ၊ᅳଝᡥᤀࣩቂ ᐹʗቂᐹᡙࣩቂ
ሕজ 讨论与结论
ԣॹԣ 竹叶花椒 Ԯᐹᤩᤩۗۗ୒ 基因蛋白序列分析
用在线程序 શऊା᧧ ᨃ኏è èᔽႿʛᔀʢ 预测 Ԯᐹᤩᤩۗۗ୒ 研究表明ᖔ尽管 ᤩᤩۗۗ୒ 基因是个大家族ᖔ且各