Page 32 - 《广西植物》2022年第11期
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ϟ ऐ ࿗ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗ 卷
᧣᤹ଧÞϟዞ᥋ྉ表 ϟɯᤥ 以水稻 ዹ᧕શዶ 为模板ᖔ使用擎 શ۪୩ዶ ᣰ Ⴟᡱ༁ᑕᡸ༁ᆍᡱቝᑕၤᡷቝɯ对蛋白质二级结构进行预
科生物科技有限公司的金牌 ᥘᔽ 酶对 ᧣᤹ଧÞϟዞ 基 测ଫ利用水稻 ᧣᤹ଧÞϟዞ 基因编号 在 ᔽዹᔀ ᥈ᔀႿᆍቝᔀ
因的 ऊ᧕୩ 序列进行 ۪ऊ 扩增ᤥ 利用胶回收试剂 ዶႿႿᆍᡷᑕᡷᔽᆍႿ ۪ʢᆍᢼᔀዹᡷ 网站 ྉ ၤᡷᡷᡱ᧥ ᣰ ᣰ ʢᔽዹᔀ ᡱᑕႿᡷᤦᔽᆍᆍ੫ᢃ
盒对 ۪ऊ 产物进行胶回收后ᖔ利用 ᑕझᢃቝᔀ 公司的 ቝ༁ࣼᔀʛࣼ ᣰ ᔽႿʛᔀ ༁ၤᡷቝɯ 获得启动子序列ଫ通过 ఋၤᔀ
ऊᆍႿጶᡱʢᔀ༁༁ ֒ ᨃႿᔀ ୩ᡷᔀᡱ ऊᆍႿᔽႿ੫ ᔽᡷ 试剂盒连入 ۪ᑕႿᡷऊዶጶ 网站 ྉ ၤᡷᡷᡱ᧥ ᣰ ᣰ ᤦᔽᆍᔽႿᆍʢቝᑕᡷᔽዹ༁ ᡱ༁ᤦ ࣼ੫ᔀႿᡷ
ᡓᤩዛᦵ௴Ꭾ 载体ᖔ并转化至大肠杆菌 ᦵ̵ጢሂ 菌株ᤥ 挑 ᤦᔀ ᣰ औᔀᤦᡷᆍᆍ༁ᣰ ᡱᑕႿᡷዹᑕʢᔀ ᣰ ၤᡷቝᣰ ɯ分析启动子顺式作用
取阳性克隆培养后ᖔ使用天根生化科技公司的质 元件ᖔ采用 ఋାᡷᆍᆍ༁ 软件制图ᤥ
粒小提试剂盒提取重组质粒并进行酶切验证ᖔ送 利用 在 线 ᥘࣼᡷᑕᔽႿ 软件 ྉ ၤᡷᡷᡱ᧥ᣰ ᣰ ቝࣼᡷᑕᔽႿ
往擎科生物科技有限公司ྉ成都ɯ进行测序ᤥ ᡷᆍࣼᆍࣼ༁ᔀᔽႿʢᑕʢᣰ ቝࣼᡷᑕᔽႿ ᣰ ɯ对其编码的氨基酸序列进
行比对ଫ利用 ᥘጶ᥈ዶ Ꭾԡ 软件中 શᔀᔽ੫ၤᤦᆍʢ᥋ᢼᆍᔽႿᔽႿ੫ 法
表 ϓই 基因克隆和表达检测引物 构建 系 统 进 化 树ଫ 通过 ఋၤᔀ ᥘጶᥘጶ ୩ࣼᔽᡷᔀ 网站
ఋᑕᤦᔀ ϟজ ۪ʢᔽቝᔀʢ༁ ࣼ༁ᔀʛ ᆍʢ ੫ᔀႿᔀ ዹᆍႿᔽႿ੫ ᑕႿʛ ྉၤᡷᡷᡱ༁᧥ᣰ ᣰ ቝᔀቝᔀ᥋༁ࣼᔽᡷᔀᆍʢ੫ᣰ ቝᔀቝᔀᣰ ᔽႿʛᔀၤᡷቝɯ对其同源
ᔀᡱʢᔀ༁༁ᔽᆍႿ ᑕႿᑕᢃ༁ᔽ༁ 蛋白进行 ቝᆍᡷᔽ 分析ᖔ利用 ఋାᡷᆍᆍ༁ 中的 ᔽ༁ࣼᑕᔽझᔀ ᥘᆍᡷᔽ
长度 ۪ᑕᡷᡷᔀʢႿ 功能对多序列的 ቝᆍᡷᔽ 元件进行分析与美化ᤥ
引物 引物序列 ྉጢࣕ܀ ሕࣕɯ
ᓂᔀႿ੫ᡷၤ
۪ʢᔽቝᔀʢ ۪ʢᔽቝᔀʢ ༁ᔀीࣼᔀႿዹᔀ ྉጢࣕ܀ ሕࣕɯ 用 ୩ఋ᧧શ᥈ 数据库 ྉ ၤᡷᡷᡱ༁᧥ᣰ ᣰ ༁ᡷʢᔽႿ੫᥋ʛᤦ ᆍʢ੫ᣰ ዹ੫ᔽᣰ ᔽႿᡱࣼᡷ
ྉᤦᡱɯ
ᡱɯᖔ对水稻 ᨃ༁ᥘାèϟዹ 蛋白的相互作用进行预测ᤥ
᧣᤹ଧÞϟዞ᥋è ऊዶఋዶऊዶዶఋऊዶዶऊఋऊऊዶዶ᥈ऊఋఋዶఋ ࿗ሕ
᥈ऊऊ᥈ዶऊ᥈᥈᥈᥈ዶ᥈᥈ఋఋ᥈ዶ᥈ऊ᥈ ϓॹ ᧣᤹ଧÞϓዞ 基因表达分析
᧣᤹ଧÞϟዞ᥋ ఋ᥈᥈ऊ᥈ዶዶ᥈ዶዶ᥈ఋऊऊዶዶዶ᥈ऊఋఋఋ ࿗ሕ
以稀释 ԡ 倍的 ऊʛ 处理水稻的 ዹ᧕શዶ 为模板ᤥ
ऊዶऊఋఋ᥈᥈ऊ᥈ऊऊ᥈᥈ऊ᥈᥈᥈ऊ᥈ऊ᥈
᧣᤹ଧÞϟዞ᥋ीè ዶऊዶఋऊዶऊ᥈ऊዶ᥈᥈ዶऊఋ᥈᥈᥈ዶ᥈ ԡ 采用德国耶拿分析仪器 股 份 公 司 ྉ ዶႿᑕᢃᡷᔽҴᢼᔀႿᑕɯ
ीఋᨃۼጶ ᥈ 实时荧光定量基因扩增 仪 检 测
᧣᤹ଧÞϟዞ᥋ी ఋऊऊ᥈ఋऊ᥈ዶऊఋऊ᥈ఋऊऊዶ᥈ऊఋఋ ԡ ሕ
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᧣᤹ଧÞϟዞܦ᧣᤹ଧÞϟᐹ 基因的表达量ᤥ 反应试剂采用
᧣᤹ଧÞϟᐹ᥋ी ऊऊఋఋ᥈ఋఋఋ᥈ఋఋऊऊዶ᥈᥈ऊ᥈ఋఋ ԡ
ዶᔽʛᑕᤦ 的 ġ ୩ᢃᤦʢ ᥈ʢᔀᔀႿ ी۪ऊ ᥘᔽᤥ 扩增体系为 ዹ᧕શዶ
ІᤇᔠफࣩᔠᡙᔠႥ᥋è ዶఋऊዶऊ᥈ऊఋ᥈᥈ዶ᥈᥈ఋ᥈᥈ዶ᥈ఋ ϟँ
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ဂᓂᤥ 反应程序᧥ँጢ ቩ预变性 ቝᔽႿଫ ँጢቩ变性 ϟጢ ༁ᖔ
ጢጢ ቩ复性 ϟጢ ༁ᖔ Ꭾ ቩ延伸 ԡ ༁ᖔ Ꭾ ቩ后延伸 ሕቝᔽႿᖔ
ϓॹᇺ 生物信息学分析 ࿗ԡ 个循环ᤥ 以水稻 ІᤇᔠफࣩᔠᡙᔠႥ 作为内参基因ᤥ 每个
从 ጶႿ༁ᔀቝᤦ۪ᑕႿᡷ༁ 数据 库 ྉ ၤᡷᡷᡱ᧥ᣰ ᣰ ᡱᑕႿᡷ༁ 样品均设置 ሕ 次重复ᖔ以 ͱ᪵᪵ऊᡷ 方法分析定量数据ᤥ
ᔀႿ༁ᔀቝᤦᆍʢ੫ᣰ ᔽႿᆍᣰ ʛᑕᡷᑕᣰ ᡷᡱᣰ ᔽႿʛᔀၤᡷቝɯ获得水稻ܦ大麦 ϓॹጇ 数据统计分析
ྉ̵ᅳʗʐᓣࣩቂ צࣩᤀᐹʗᓣ ɯܦ二粒小麦ྉ௴ʗᔠᡙᔠዞࣩቂ ʐᔠዞᅳዞᅳᔠʐᓣɯܦ 使用 ᥈ʢᑕᡱၤᡱᑕʛ 软件对不同处理 ऊʛ 浓度ܦ不同
高粱ྉᅳʗ၊ࣩቂ ᤇᔠዞᅳᤀᅳʗ ɯܦ玉米ྉԮᓣᐹ ቂᐹᡥɯ的整个基因 处理时间ܦ不同组织的数据进行差异显著性分析ᤥ
组以及 ੫ሕ 注释文件ᖔ使用 ఋାᡷᆍᆍ༁ 软件将整个基因
组序列翻译为蛋白序列ᤥ 利用 ᧣᤹ଧÞϟዞ 的氨基酸 জ 结果与分析
序列在 ۪ᑕቝྉၤᡷᡷᡱ᧥ᣰ ᣰ ᡱᑕቝᑕቝᆍʢ੫ ᣰ ɯ网站中对其编
码蛋白的结构域进行分析ᖔ目的基因编码蛋白中含 ԣॹϓ 水稻 ᧣᤹ଧÞϓዞ 基因结构分析及 ࣷᦵ 全长克隆
有与非生物胁迫相关的 ᥘାèϟ 结构域ᖔ先通过 ۪ᑕቝ 利用 ᔽዹᔀ ᥈ᔀႿᆍቝᔀ ዶႿႿᆍᡷᑕᡷᔽᆍႿ ۪ʢᆍᢼᔀዹᡷ ྉ ၤᡷᡷᡱ᧥ᣰ ᣰ
网站得到其 ̀ᥘᥘ 结构模型ᖔ再通过 ఋାᡷᆍᆍ༁ 软件的 ʢᔽዹᔀᡱᑕႿᡷᤦᔽᆍᆍ੫ᢃቝ༁ࣼᔀʛࣼ ᣰ ɯ查询得知ᖔ基因 ᧣᤹ଧÞϟዞ
୩ᔽቝᡱᔀ ̀ᥘᥘ ୩ᔀᑕʢዹၤ 功能对水稻ܦ二粒小麦ܦ大麦ܦ高 位于水稻全基因组的第六号染色体上ᖔ᧣᤹ଧÞϟዞ 基
粱和玉米的蛋白序列进行分析ᖔ筛选确定所选物种 因 ऊ᧕୩ 长度为 ࿗ᤃऐ ᤦᡱྉ图 ϟ᧥ዶɯᤥ 基于水稻 ዹ᧕શዶ
中的 ᤹ଧÞϟ 基因家族成员ᤥ 文库ᖔ 使用 ᧣᤹ଧÞϟዞ᥋èᣰ ᧣᤹ଧÞϟዞ᥋ 引物扩增
利用 在 线 ۪ʢᆍᡷ۪ᑕʢᑕቝ 工具 ྉ ၤᡷᡷᡱ༁᧥ ᣰ ᣰ औᔀᤦ ᧣᤹ଧÞϟዞ 基因 ऊ᧕୩ 片段ᖔ 获得大小约为 ࿗ᤃऐ ᤦᡱ 的
ᔀᡱᑕ༁ᢃᆍʢ੫ ᣰ ᡱʢᆍᡷ༁ዹᑕᔀ ᣰ ɯ 对 ᧣᤹ଧÞϟዞ 的基本理化性 目的基因ᖔ其共编码 ϟጢጢ 个氨基酸ᤥ 用 ϟጢᠮ琼脂糖
质进行预测和分析ଫ利用 ୩ऊᨃ۪ᥘዶ 工具ྉ ၤᡷᡷᡱ༁᧥ ᣰ ᣰ 凝胶电泳检测获得的 ۪ऊ 产物ᖔ条带大小ྉ图 ϟ᧥ାɯ
Ⴟᡱ༁ᑕ᥋ᡱʢᑕᤦᔽᔽᤦዹᡱʢ ᣰ ዹ੫ᔽ᥋ᤦᔽႿ ᣰ Ⴟᡱ༁ᑕᡸᑕࣼᡷᆍቝᑕᡷᡱᥳ ᡱᑕ੫ᔀ ᢉ ᣰ 与基因组数据库结果一致ᤥ
