Page 24 - 《广西植物》2020年第1期
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２ ０ 广 西 植 物 ４０ 卷
图 １ 单条小麦染色体的分离过程
Ｆｉｇ. １ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｉｎｇｌｅ ｗｈｅａｔ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ
ＭＤＡ 技术扩增的样品使用引物 Ｐ１７ 和引物 Ｐ２１
时ꎬ包含全部染色体的单个细胞(３ 号) 和单条染
色体(５ 号)却有两个样品出现了较明显的扩增条
带ꎬ说明这两个样品可能是真实外源基因的扩增ꎮ
２.５ 使用 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 印迹对扩增结果进行验证
为了进一步验证上述 ３ 号和 ５ 号样品是否为
小麦染色体的真实扩增还是外源物种基因的扩
增ꎬ我们对其进行了 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交验证ꎬ使用小麦
基因组 ＤＮＡ 标记的探针对这两个样品的 ＭＤＡ 扩
增产物进行杂交ꎬ结果显示除基因组阳性对照外ꎬ
这两个样品及阴性对照均没有杂交信号出现( 图
５)ꎮ 因此ꎬ证明该扩增产物可能是外源物种 ＤＮＡ
Ａ. 使用 ＭＡＬＢＡＣ 技术对分离的染色体进行扩增( 循环数
２１)ꎻ Ｂ. 使用 ＭＤＡ 技术对分离的染色体进行扩增ꎮ １. 一 污染造成ꎮ
个完整细胞的全部染色体ꎻ ２. 单条染色体ꎻ ３. 无菌水阴性 ２.６ 高通量测序和序列比对验证污染类型及可能来源
对照ꎻ ４. ＰＢＳ 阴性对照ꎻ Ｍ. ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ￣Ｑꎬ 分子量大小分 为了进一步证明该污染源的可能来源及其类
别为 ２００、４００、６００、８００、１ ０００、１ ５００、２ ０００、２ ５００、３ ０００、
型ꎬ我们对 ３ 号和 ５ 号样品的扩增产物进行了全基
４ ０００、５ ０００、６ ０００、８ ０００、１０ ０００ (ｂｐ)ꎮ
因组测序ꎬ并随机挑选委托安诺优达基因科技有
Ａ. Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＭＡＬＢＡＣ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ (２１ ｃｙｃｌｅｓ)ꎻ Ｂ. Ａｍ￣
ｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＭＤＡ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ. １. Ｗｈｏｌｅ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ ｏｆ ａ ｓｉｎｇｌｅ 限公司扩增的 ２ 个样品( ＭＤＡ０１ 和 ＭＤＡ０２) 进行
ｗｈｅａｔ ｃｅｌｌꎻ ２. Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ｏｆ ｗｈｅａｔꎻ ３. Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ 建库测序ꎮ 将以上 ４ 个样品的测序结果进行比对
(ｓｔｅｒｉｌｅ ｗａｔｅｒ)ꎻ ４. Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ (ＰＢＳ ｓｏｌｕｔｉｏｎ)ꎻ Ｍ. ＤＮＡ
后显示ꎬ其均未比对到小麦基因组上ꎬ而比对到了
Ｍａｒｋｅｒ￣Ｑꎬ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｗｅｉｇｈｔ ａｒｅ ２００ꎬ ４００ꎬ ６００ꎬ ８００ꎬ １ ０００ꎬ
１ ５００ꎬ ２ ０００ꎬ ２ ５００ꎬ ３ ０００ꎬ ４ ０００ꎬ ５ ０００ꎬ ６ ０００ꎬ ８ ０００ꎬ １０ ０００ 人(Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ)、微生物(Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ、
(ｂｐ)ꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｃｕｔｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ)、黑猩猩( Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ) 等物
图 ２ 小麦染色体的体外扩增 种上(表 ３)ꎮ 其中ꎬＣｕｔｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ (Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃ￣
Ｆｉｇ. ２ Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｗｈｅａｔ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ ｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ) 和 Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｈａｇｅ 两种微生物
均可以栖息在人的皮肤上( Ｌｏｏｄ ＆ Ｃｏｌｌｉｎꎬ ２０１１ꎻ
阳性现象呢? 其可能形成的原因是什么? 为此ꎬ Ｂｒｉｇｉｔｔｅ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１８)ꎮ
我们使用 ＳＣｏＴ 分子标记来检测外源污染是来自
其他外源物种基因还是由于引物多聚体形成ꎮ 扩 ３ 讨论
增结果显示( 图 ４)ꎬ阴性对照和 ＭＡＬＢＡＣ 技术扩
增的样品均没有明显的多态性条带出现ꎬ而使用 首先分离单条染色体ꎬ然后再进行体外扩增ꎬ
