Page 77 - 《广西植物》2020年第1期

１ 期 李依容等: 基于叶绿体基因证据的民族药滇白珠复合群系统发育关系 ７ ３

滇白珠 ( Ｇ. ｌｅｕｃｏｃａｒｐａ ｖａｒ. ｃｒｅｎｕｌａｔａ) 和 秃 果 白 珠 ｒｐｌ３３￣ｐｓａＪ 和 ｔｒｎＬ￣ｒｐｌ３２ꎬ首次开展滇白珠复合群的
(Ｇ. ｌｅｕｃｏｃａｒｐａ ｖａｒ. ｐｓｉｌｏｃａｒｐａ)(分布于中国台湾)２ 遗传分化和种下系统发育关系研究ꎬ进而为滇白
个变种( Ｆａｎｇ ＆ Ｓｔｅｖｅｎｓꎬ２００５)ꎮ 这 ３ 个国产变种 珠基原界定和之后化学活性成分的地域性研究提
果实均为黑紫色ꎬ构成了滇白珠复合群ꎬ均可入 供遗传学理论框架ꎮ
药ꎬ且均为民族药滇白珠的基原ꎮ 滇白珠复合群
的叶型、毛被、花部结构和果实形态有一定程度变 １ 材料与方法
异但 不 显 著ꎬ 其 分 类 处 理 一 直 以 来 倍 受 争 议
(Ｃｏｐｅｌａｎｄꎬ １９３２ꎻ Ｓｌｅｕｍｅｒꎬ １９６７ꎻ Ｙｉｎｇꎬ １９７６ꎻ 徐 廷 １.１ 材料
志ꎬ １９９１ꎻ Ｆａｎｇ ＆ Ｓｔｅｖｅｎｓꎬ ２００５ꎻ Ｆｒｉｔｓｃｈ ｅｔ ａｌ.ꎬ 本研究共收集了滇白珠复合群 ８１ 个居群和 １
２００８)ꎮ 除了毛滇白珠明显被毛以外ꎬ其余 ２ 个国 个芳香白珠居群(作为外类群)的分子材料ꎬ分别采
产变种即滇白珠和秃果白珠还在形态上较难相互 自中国云南(１７ꎬ其中 ＷＤ 居群为毛滇白珠)、中国
辨别ꎬ仅依靠蒴果是否被毛所区别ꎮ 同时ꎬ滇白珠 贵州(２０ꎬ其中 ＹＨＡ 居群为毛滇白珠)、中国四川
变种内形态变异有时大于变种间变异ꎬ为其分类 (３)、中国重庆(２)、中国湖北(３)、中国湖南(１１)、

学处理增加了难度ꎮ 中国江西(４)、中国福建(４)、中国广东(９)、中国广
滇白珠复合群具有明显的遗传分化ꎬ广域分 西(５)、中国台湾(１ꎬ秃果白珠)、菲律宾南达沃(１ꎬ

布的 滇 白 珠 和 Ｆｌｏｒａ ｏｆ Ｃｈｉｎａ ( Ｆａｎｇ ＆ Ｓｔｅｖｅｎｓꎬ 秃果白珠)、马来西亚鼓亨(１ꎬ白果白珠原变种)ꎬ其
２００５)中作为滇白珠异名处理的屏边白珠( Ｇ. ｌｅｕ￣ 中有 ７６ 个滇白珠居群ꎻ芳香白珠(ＦＸ) 采自中国云
ｃｏｃａｒｐａ ｖａｒ. ｐｉｎｇｂｉｅｎｅｎｓｉｓ)(狭域分布于云南省屏边 南大理ꎮ 每个居群随机挑选 ３ 个个体[ 注:峨眉山
县)形态相近ꎮ 近年来ꎬ利用分子手段对滇白珠复 (ＥＭＳ) 仅发现 １ 个个体]ꎬ包括外类群共计 ２４４ 个
合群展开的研究揭示了复合群内部分变种的系统 个体(表 １)ꎮ 采集材料时ꎬ居群内每个个体至少相
关系:叶绿体基因 ｔｒｎＬ￣ｔｒｎＦ 和 ｒｐｌ１６ 序列中的一些 隔 １０ ｍꎮ 新鲜叶片立即用变色硅胶干燥ꎬ凭证标本
插入 / 缺失对谱系界定起到了重要作用ꎬ联合分析 储存于昆明医科大学药学院标本储藏室中ꎮ
高度支持了变种屏边白珠与白果白珠原变种构成 １.２ 引物的筛选
一支ꎬ而变种滇白珠却与形态有别的变种毛滇白 在引物筛选阶段ꎬ我们从白果白珠变种已有
珠聚成另一支ꎬ这两个分支构成姐妹群关系( 陆 各居群中根据地理相对距离较远原则挑选出中国
露ꎬ２００９)ꎮ 这些结果显示出滇白珠复合群形态和 云南腾冲( 滇白珠)、中国云南武定( 毛滇白珠)、
遗传的不一致ꎬ基于传统的形态分类无法明晰滇 中国贵州平塘( 滇白珠)、中国广西大瑶山( 滇白
白珠复合群的种内分类问题ꎮ 经野外调查发现ꎬ 珠)、中国 台 湾 玉 山 ( 秃 果 白 珠)、马 来 西 亚 鼓 亨
滇白珠和毛滇白珠虽然在形态上以毛被区分ꎬ但 (白果白珠原变种) 共 ６ 个居群ꎬ每个居群随机选
两者分布范围和生长环境却相似ꎬ常常混生ꎬ且一 取 ２ 个个体ꎬ共 １２ 个个体ꎮ 从杜鹃花科近缘的山
些滇白珠的幼株茎叶也常常被毛ꎮ 因此ꎬ了解滇 茶科(Ｔｈｅａｃｅａｅ) 中ꎬ选取了进化速率较快的 １０ 个
白珠复合群的遗传分化格局对重新认识基于形态 叶绿体基因片段(Ｐ３７、Ｐ４５、Ｐ５７、Ｐ５８、Ｐ６０、Ｐ６１、Ｐ６４、
划分的变种具有重要意义ꎬ亟需对该类群开展遗 Ｐ６９、Ｐ７０ 即 ｒｐｌ３３￣ｐｓａＪ、Ｐ７２)(Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１３)进行
传分化格局与地域、形态的相关性研究ꎮ 本研究 分析ꎬ最终选出 ｒｐｌ３３￣ｐｓａＪ(Ｆ: ５′￣ＴＣＣＧＧＡＴＧＣＧＴＴＡ￣
首次对滇白珠复合群在中国境内进行了大范围取 ＡＣＡＴＴＣＣＣＣＴＴ￣３′ꎬ Ｒ: ５′￣ＣＣＴＴＧＧＡＡＧＧＧＴＡＡＣＡＣＡ￣
样ꎬ几乎涵盖了中国境内滇白珠复合群的分布区 ＣＡＧＧＴＧＣ￣３′)和在杜鹃花科中拥有较高分辨率的
域ꎬ同时包括东南半岛的菲律宾和马来西亚各 １ ｔｒｎＬ￣ｒｐｌ３２ ( ｔｒｎＬ: ５′￣ＣＴＧＣＴＴＣＣＴＡＡＧＡＧＣＡＧＣＧＴ￣３′ꎬ
个居群ꎬ共计 ８１ 个居群 ( 表 １ꎬ图 １)ꎮ 其中ꎬ在中 ｒｐＬ３２: ５′￣ＣＡＧＴＴＣＣＡＡＡＡＡＡＡＣＧＴＡＣＴＴＣ￣３′)(Ｓｈａｗ ｅｔ
国的云南武定( ＷＤ) 和贵州印江( ＹＨＡ) 分别采集 ａｌ.ꎬ ２００７)作为开展系统发育研究的分子片段ꎮ
１ 个毛滇白珠居群ꎬ中国台湾( ＨＸＱ) 和菲律宾南 １.３ ＤＮＡ 提取与 ＰＣＲ 扩增
达沃(Ｆ)分别采集 １ 个秃果白珠居群ꎬ以及马来西 植物总 ＤＮＡ 的提取使用改进的 ４×ＣＴＡＢ 法ꎬ
亚鼓亨(ＷＨ) 的 １ 个白果白珠原变种居群ꎮ 选用 用 １％的琼脂糖凝胶电泳检测ꎬ根据 ＤＮＡ 主带的
进化速 率 相 对 快 的 叶 绿 体 ＤＮＡ 非 编 码 区 序 列 整齐度和亮度判断 ＤＮＡ 的质量ꎬ 用紫外分光光度