Page 122 - 《广西植物》2020年第5期
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７ １ ８ 广 西 植 物 ４０ 卷
落直径) / 对照菌落直径] ×１００％ꎮ 设 ３ 个重复ꎬ按下述公式计算孢子萌发率ꎮ
１.２.４ ８ 种化合物对植物病原菌菌丝生长抑制活性 孢子萌发率＝(孢子萌发数 / 孢子总数)×１００％ꎻ
测试 分别称取 １.１.２ 的 ８ 种化合物各 ５ ｍｇ 溶于 孢子萌发相对抑制率 ＝ [( 空白孢子萌发率 －
０.１ ｍＬ ＮꎬＮ￣二甲基甲酰胺中ꎬ用 ０.２２ μｍ 针头过 处理孢子萌发率) / 空白孢子萌发率] ×１００％ꎮ
滤器过滤ꎬ然后在超净工作台中ꎬ与 ４９.９ ｍＬ 融化 １.２.８ 离体法测定山芝麻根石油醚相和乙酸乙酯
ＰＤＡ 培养基混合ꎬ配置成化合物浓度为 １００ μｇ 相萃取物对香蕉果实炭疽病的防治效果 将山芝
￣１ 麻根石油醚相和乙酸乙酯相萃取物溶于一定量的
ｍＬ 培养基ꎬ其余操作方法同 １.２.３ꎮ
１.２.５ 山芝麻各相萃取物对植物病原真菌菌丝生长 ＮꎬＮ￣二甲基甲酰胺中ꎬ用 ０.５％吐温－８０ 水溶液稀
的 ＥＣ 测定 选取对供试植物病原真菌菌丝生长 释成 １０ ｍｇｍＬ 的溶液ꎮ 挑选成熟且形状、大小
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抑制活性在 ７０％以上的萃取物进行 ＥＣ 测定ꎮ 将 比较一致、没有破损和病斑的香蕉ꎬ清洗表面ꎬ晾
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待测萃取物用一定量 ＮꎬＮ￣二甲基甲酰胺溶解ꎬ用 干备用ꎮ 用喷壶将溶解好的山芝麻根石油醚相和
０.５％吐温－８０ 水溶液稀释成 １ ０００、５００、２５０、１２５、 乙酸乙酯相萃取物溶液喷施到香蕉表面ꎬ每个香
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６２.５ ｍｇｍＬ 一系列浓度梯度的母液ꎬ用 ０.２２ μｍ 蕉喷施 １０ ｍＬꎬ用 ０.２ ｍｇｍＬ 的多菌灵作为阳性
针头过滤器过滤ꎮ 然后在超净工作台中ꎬ将 ０.１ ｍＬ 对照ꎬ无菌水作为空白对照ꎮ ２４ ｈ 后ꎬ在香蕉表面
母液分别与 ４９.９ ｍＬ 融化 ＰＤＡ 培养基混合ꎬ配置成 喷洒等体积的 １×１０ ｃｆｕｍＬ 香蕉炭疽病菌分生
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山芝麻萃取物浓度分别为 ２、１、０.５、０.２５、０.１２５ ｍｇ 孢子悬浮液ꎬ将处理后的香蕉放入塑料盒中ꎬ用保
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ｍＬ 的培养基ꎬ其余操作方法同 １.２.３ꎮ 鲜膜封好ꎬ２８ ℃ 培养ꎮ ７ ｄ 后ꎬ观察发病情况并分
１.２.６ ８ 种化合物对植物病原真菌菌丝生长的 ＥＣ 级ꎬ实验进行 ２ 次ꎬ每次实验 ９ 个重复ꎮ
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测定 将待测化合物用一定量 ＮꎬＮ￣二甲基甲酰胺 按照以下标准进行分级ꎬ即 ０ 级:无病ꎻ１ 级:
溶解ꎬ用 ０.５％吐温－８０ 水溶液稀释成 ７.５、５、２.５、 病斑面积占果实面积的 ５％以下ꎻ３ 级:病斑面积占
１.２５ 和 ０.６２５ ｍｇｍＬ 一系列浓度梯度的母液ꎬ并 果实面积的 ６％ ~ １０％ꎻ５ 级:病斑面积占果实面积
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用 ０.２２ μｍ 针头过滤器过滤ꎮ 然后在超净工作台 的 １１％ ~ ２５％ꎻ ７ 级: 病 斑 面 积 占 果 实 面 积 的
中ꎬ将 ０.１ ｍＬ 母液分别与 ４９.９ ｍＬ 融化 ＰＤＡ 培养 ２６％ ~ ５０％ꎻ９ 级:病斑面积占果实面积在 ５０％ 以
基混合ꎬ配置成浓度分别为 １５０、１００、５０、２５、１２.５ 上ꎮ 计算公式如下:
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μｇｍＬ 的培养基ꎬ其余操作步骤同 １.２.３ꎮ (各级发病数×该级代表值)
病情指数＝ ×１００ꎻ
１.２.７ 山芝麻根石油醚相和乙酸乙酯相萃取物对 调查总果实数×最高级数值
香蕉炭疽病菌分生孢子萌发相对抑制率测定 参 对照病情指数－处理病情指数
防治效果＝ ×１００％ꎮ
考琼脂平板表面萌发法( 方中达ꎬ２００７)ꎮ 取培养 对照病情指数
５ ｄ 的香蕉炭疽病菌ꎬ加入 １０ ｍＬ 无菌水到培养皿 １.２.９ 数据分析 应用统计软件 Ｅｘｃｅｌ、ＳＰＳＳ( Ｓｔａ￣
中ꎬ用涂布棒将分生孢子和菌丝体刮下ꎬ３ 层纱布 ｔｉｓｔｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔ ａｎｄ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ) １９. ０ 计 算 出
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过滤掉菌丝体ꎬ最后配置成 １×１０ ｃｆｕｍＬ 的孢子 Ｒ 、ＥＣ 和毒力回归方程等数据ꎮ
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悬浮液ꎮ 用一定量的 ＮꎬＮ￣二甲基甲酰胺溶解萃取
２ 结果与分析
物ꎬ并用 ０.２２ μｍ 针头过滤器过滤ꎬ然后与 １ ｍＬ
ＰＤＡ 充分混合ꎬ配置成山芝麻根提取物浓度分别
为 ８、４、２、１、０.５、０.２５ ｍｇｍＬ 的培养基ꎬ将含有 ２.１ 山芝麻各相萃取物抑菌活性初筛
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山芝麻提取物的培养基滴于载玻片上ꎬ待凝固后ꎬ 山芝麻各部分萃取物在 １.５ ｍｇｍＬ 浓度下
将 ２０ μＬ 孢子悬浮液滴于培养基表面ꎬ用涂布棒 对 １０ 种常见的农业植物病原真菌菌丝生长抑制
涂匀ꎬ涂布完成后ꎬ将载玻片放置在微生物培养箱 效果见表 １ꎮ 各相萃取物均表现出不同程度的菌
中ꎬ２８ ℃ 黑暗条件下培养 ６ ｈꎬ含有等比例的 ＮꎬＮ￣ 丝生长抑制活性ꎮ 其中ꎬ山芝麻叶石油醚相萃取
二甲基甲酰胺的无菌水作为空白对照ꎬ每个处理 物对火龙果溃疡病菌、苹果轮纹病菌、香蕉炭疽病
