Page 121 - 《广西植物》2020年第5期

５ 期 梁财等: 山芝麻提取物对 １０ 种植物病原真菌的抑菌活性初探 ７ １ ７

９５％乙醇对山芝麻 根、茎、叶 三 部 分 进 行 浸 泡 提 １.２ 方法
取ꎬ再利用不同有机溶剂制备山芝麻不同相萃取 １.２.１ 山芝麻粗提物的制备 将刚采集的新鲜山
物ꎬ研究各相萃取物对 １０ 种植物病原真菌的抑菌 芝麻整理成根、茎、叶三部分ꎬ用蒸馏水冲洗干净ꎬ
活性ꎬ然后用离体果实法测试了山芝麻根石油醚 自然晾干ꎬ然后放于烘箱 ５０ ℃ 烘干ꎬ切成 ３ ｃｍ 长
相和乙酸乙酯相萃取物对香蕉炭疽病的防治效 的小段ꎬ用粉碎机粉碎均匀ꎮ 称取山芝麻根、茎、

果ꎬ最后通过气相与质谱连用技术(Ｇａｓ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ￣ 叶粉末各 １.５ ｋｇꎬ置于 １５ Ｌ ９５％乙醇中浸泡 ２４、
ｒａｐｈｙ￣Ｍａｓｓ ＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒꎬＧＣ￣ＭＳ) 对山芝麻根石油 ４８、７２ ｈꎬ分别提取有机相ꎬ合并有机相并用旋转蒸

醚相和乙酸乙酯相萃取物进行了初步分析ꎮ 发仪将其浓缩至膏状ꎬ得到的浸膏加适量的水稀
释ꎬ分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取ꎬ三
１ 材料与方法 种溶剂萃取过后余下的液体即为水相ꎬ最后将各

相浓缩至膏状ꎬ真空干燥ꎬ分别得到山芝麻石油醚
１.１ 材料、试剂及仪器 相萃取物、乙酸乙酯相萃取物、正丁醇相萃取物和
１.１.１ 山芝麻 山芝麻采自广东省云浮市郁南县 水相萃取物ꎬ置于冰箱 ４ ℃ 保存ꎬ备用ꎮ

宋桂镇ꎬ选取生长状况良好的植株ꎬ整株采回ꎮ １.２.２ 气相与质谱联用技术分析条件 气相条件:
１.１.２ 供试植物病原菌菌株 供试植物病原菌菌 ＨＰ￣５ＭＳＣ 弹性石英毛细管柱( ３０ ｍ × ２５０ μｍ ×

株为火龙果溃疡病菌(Ｎｅｏｓｃｙｔａｌｉｄｉｕｍ ｄｉｍｉｄｉａｔｕｍ)、 ０.２５ μｍ)ꎻ色谱柱初始温度 ６０ ℃ 保持 １ ｍｉｎꎬ以 ６
苹果轮纹病菌( Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａ ｄｏｔｈｉｄｅａ)、香蕉炭疽 ℃ ｍｉｎ 升温至 ３００ ℃ 保持 １７ ｍｉｎꎻ进样口温度
￣１
病菌(Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｍｕｓａｅ)、玉蜀黍赤霉病菌( Ｇｉｂ￣ 为 ２５０ ℃ ꎬ 载 气 为 氦 气ꎬ 载 气 流 量 为 １. ０ ｍＬ
￣１
ｂｅｒｅｌｌａ ｚｅａｅ)、山茶灰斑病菌( Ｐｅｓｔａｌｏｔｉｐｓｉｓ ｇｕｅｐｉｎｉｉ)、 ｍｉｎ ꎻ采用不分流模式ꎮ
水稻恶苗病菌(Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ)、葡萄灰霉病 质谱 条 件: 采 用 电 子 轰 击 离 子 源 ( ｅｌｅｃｔｒｏｎ
菌(Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ)、油菜菌核病菌( Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅ￣ ｉｍｐａｃｔ ｉｏｎ ｓｏｕｒｃｅ)ꎬ电子能量为 ７０ ｅＶꎬ离子源温度
ｒｏｔｉｏｒｕｍ)、番茄早疫病菌( Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｌａｎｉ) 和芒果 为 ２５０ ℃ ꎬＭＳ 四极杆温度为 １５０ ℃ ꎬ传输线温度
蒂腐病菌( Ｂｏｔｒｙｏｄｉｐｌｏｄｉａ ｔｈｅｏｂｒｏｍａｅ)ꎬ这些菌株均 为 ２８０ ℃ ꎬ质量扫描范围(ｍ / ｚ)为 ２０ ~ ４５０ꎮ

来源于中国农业微生物菌种保藏管理中心( Ａｇｒｉ￣ １.２.３ 山芝麻各相萃取物对植物病原真菌菌丝生
ｃｕｌｔｕｒａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎａ) 和海南大学植 长抑制活性测试 采用菌丝生长速率法( 吴文君ꎬ

物保护学院ꎬ菌种保存于 ４ ℃ 冰箱ꎬ活化后备用ꎮ １９８７)对 １０ 种植物病原真菌进行室内毒力测定ꎮ
１.１. ３ 供 试 培 养 基 马 铃 薯 葡 萄 糖 琼 脂 ( ｐｏｔａｔｏ 称取 ７５ ｍｇ 山芝麻各相萃取物溶解于 ０.１ ｍＬ ＮꎬＮ￣
ｄｅｘｔｒｏｓｅ ａｇａｒꎬＰＤＡ)培养基:马铃薯 ２００ ｇꎬ葡萄糖 ２０ 二甲基甲酰胺中ꎬ用 ０.２２ μｍ 针头过滤器过滤ꎬ然
ｇꎬ琼脂 ２０ ｇꎬ蒸馏水 １ Ｌꎬ用于植物病原真菌的培养ꎮ 后在超净工作台中ꎬ与 ４９.９ ｍＬ 融化 ＰＤＡ 培养基
１.１.４ 实验试剂及仪器 邻苯二甲酸二异丁酯、邻 混合ꎬ配置成山芝麻萃取物浓度为 １.５ ｍｇｍＬ 的
￣１
苯二甲酸二丁酯、棕榈酸乙酯、２ꎬ６￣二甲氧基苯酚、 培养基ꎬ倒入直径 ９ ｃｍ 的培养皿中冷却凝固ꎮ 在
亚油酸、亚油酸甲酯、亚油酸乙酯、丁香醛均购买 培养 ５ ｄ 的菌种上ꎬ用直径为 ６ ｍｍ 打孔器打取生

于阿拉丁ꎻ９５％ 乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、 长整齐一致菌饼ꎬ将菌饼移植到培养基中心(１ 皿
ＤＭＦ(Ｎꎬ Ｎ￣二甲基甲酰胺)、吐温－８０ 等采购于西 １ 个菌饼)ꎬ使菌丝面向下接触培养基ꎬ２８ ℃ 培养ꎬ

陇科学股份有限公司ꎻ０.２２ μｍ 针头过滤器由上海 加入等体积的 ＮꎬＮ￣二甲基甲酰胺为空白对照ꎬ每
楚定分析仪器有限公司生产ꎬＡｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ 个处理重复 ３ 次ꎬ倒置培养ꎮ 待菌落直径达到 ５
７０００ 型气相色谱－质谱联用仪由安捷伦科技( 中 ｃｍ 及以上后ꎬ用十字交叉法测量并记录菌 落 直
国)有限公司生产ꎬ旋转蒸发仪(ＲＶ ８)由德国 ＩＫＡ 径ꎬ按下述公式计算抑制率ꎮ
(中国)有限公司生产ꎬ超净工作台( ＳＷ￣ＣＪ￣１Ｄ) 由 菌落直径 (ｃｍ) ＝ 测量直径－菌饼直径ꎻ
苏州净化设备有限公司生产ꎮ 菌丝生长抑制率 ＝ [( 对照菌落直径－处理菌