Page 93 - 《广西植物》2020年第5期

５ 期 郁晶晶等: 香雪兰花瓣的花色苷组成 ６ ８ ９

不同单株上采集五个花朵完全开放的整支花序ꎬ 释倍数ꎻＶ 为体积(ｍＬ)ꎻＷ 为样品重量( ｇ)ꎻＬ 为光
装入塑料自封袋内ꎮ 分别留取 １５ ~ ２０ 朵来自不同 程(１ ｃｍ)ꎮ
花序的小花进行花色描述和色素定性ꎬ其余小花 １.４.２ 花瓣花色苷种类和含量的检测 花色苷组
分为 ３ 份ꎬ每份鲜重 ０.２ ｇ 左右ꎬ用铝箔纸包好立 分分析采用超高效液相色谱－四极杆飞行时间质
即用液氮速冻ꎬ放置于－８０ ℃ 冰箱储存ꎬ用于花色 谱联用仪( ＵＰＬＣ￣Ｑ￣ＴＯＦ￣ＭＳ)ꎬ仪器为上海沃特世

苷定性和定量研究ꎮ 科技有限公司生产ꎮ 花色苷混合标准品 Ｅｕｒｏｐｅａｎ
由于香雪兰花朵主要观赏部位为中上部ꎬ花 Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｔａｎｄａｒｄꎬ 购 自 法 国 的
瓣主要颜色表现也由中上部决定ꎬ因此ꎬ本实验仅 ＥＤＱＭ 公司ꎬ包括矢车菊素 ３￣Ｏ 葡萄糖苷、矮牵牛
素 ３￣Ｏ 葡萄糖苷、飞燕草素 ３￣Ｏ 葡萄糖苷、锦葵色
对其花瓣中上部进行测定ꎮ
１.２ 香雪兰花色表型的检测 素 ３￣Ｏ 葡萄糖苷、芍药素 ３￣Ｏ 葡萄糖苷等 ２０ 种花
在室内稳定光源条件下ꎬ用英国皇家园艺学 色苷标准品ꎮ ＵＰＬＣ 分析条件:柱温 ４５ ℃ ꎬ流速
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会比色卡(ＲＨＳＣＣ)与香雪兰花瓣中上部花色进行 ０.４ ｍＬ ｍｉｎ ꎬ 进 样 体 积 ３ μＬꎻ 流 动 相: Ａ 液 为
对比ꎬ描述花色(记录对应的编号)ꎬ每个品种重复 ０.１％的甲酸溶液(Ｖ 甲酸 ∶ Ｖ ＝ ０.１ ∶ ９９.９)ꎻＢ 液为
水
含 ０.１％甲酸乙腈( Ｖ ∶ Ｖ ＝ ０.１ ∶ ９９.９)ꎮ 梯
测定 １０ 次ꎬ取出现频率最高的结果ꎮ 甲酸 乙腈
用 ３ｎｈ 通用色差仪 ＳＣ￣１０(深圳市三恩时科技 度洗 脱 程 序:０ ｍｉｎꎬ９５％ Ａꎬ５％ Ｂꎻ３ ｍｉｎꎬ８０％ Ａꎬ
∗ ∗ ２０％Ｂꎻ１０ ｍｉｎꎬ０％ Ａꎬ１００％ Ｂꎻ１２ ｍｉｎꎬ０％ Ａꎬ１００％
有限公司ꎬ中国) 测定花色的明度 Ｌ 值、色相 ａ 、
Ｂꎻ１５ ｍｉｎꎬ５％Ａꎬ９５％Ｂꎻ１９ ｍｉｎꎬ５％Ａꎬ９５％Ｂꎮ 质谱
∗
∗
ｂ 值ꎬ 并 计 算 彩 度 Ｃ 和 色 相 角 度 值 ｈ°ꎮ Ｃ ∗ ＝
分析条件:电喷雾电离ꎬ正离子检测模式ꎬ扫描范
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ａ ∗２ ＋ｂ ∗２ ꎻｈ° ＝ ｔａｎ ( ｂ / ａ ) ∗ １８０° / πꎮ 其 中ꎬ
∗
∗
围为 ５０ 到１ ０００ ｍｚ ꎬ扫描速度 ０.２ ｓꎻ毛细管电
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Ｃ 值表示到 Ｌ 轴的垂直距离ꎬ距离越大ꎬ彩度越
∗
∗
压２ ０００ Ｖꎬ锥孔电压 ４０ Ｖꎬ雾化气温度 ４５０ ℃ ꎬ雾
大(Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ２００４)ꎬ每个品种设 ６ 个生物学重
化气流量 ９００ Ｌｈ ꎬ锥孔反吹气 ５０ Ｌｈ ꎬ离子
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复ꎬ取平均值ꎮ
源温度 １１５ ℃ ꎮ 花色苷各组分的相对含量分析采
１.３ 香雪兰花瓣花色苷的初步鉴定
用超高效液相色谱－四级杆飞行时间质谱联用仪
取 １１ 个品种盛花期花瓣 ０.２ ｇꎬ分别放入研钵
(ＵＰＬＣ￣Ｑ￣ＴＯＦ￣ＭＳ)进行ꎬ通过标准曲线法对花瓣
中ꎬ向研钵中分别加入石油醚、１０％盐酸、３０％氨水
各个组分进行相对定量ꎮ
各 １０ ｍＬꎬ研磨ꎬ观察反应液的颜色并记录( 陈建 １.５ 数据分析
等ꎬ２００９)ꎮ 使用软件 Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｏｆｆｉｃｅ Ｅｘｃｅｌ ２００３、Ｏｒｉｇｉｎ 对
１.４ 香雪兰花瓣花色苷种类与含量的检测 数据进行整理、分析、制图ꎬ数值为 ３ 次生物学重
１.４.１ 花瓣总花色苷含量的测定 提取液的配制 复的平均值±标准误差ꎮ 使用 ＳＰＳＳ￣ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ １７.０
参考孙卫(２０１０) 的方法略微改动ꎮ 每个品种设 ３ 对花色表型和总花色苷含量进行相关性分析ꎬ利
个生物学重复ꎬ取平均值作为该品种的总花色苷 用 ＥＸＣＥＬ２０１３ 对不同花色香雪兰品种之间花色
含量ꎮ 苷总含量的差异进行方差分析ꎮ
采用 ｐＨ 示 差 法 进 行 测 定 总 花 色 苷 含 量
(Ｆｕｌｅｋｉ ＆ Ｆｒａｎｃｉｓ.ꎬ２０１０)ꎬ计算公式如下: ２ 结果与分析
Ａ Ｖ
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Ｃ(ｍｇｇ )＝ ×Ｍ×ＤＦ× ꎻ
εＬ Ｗ ２.１ 香雪兰花瓣色素的表型特征
Ａ ＝ (Ａ －Ａ ) ｐＨ１.０－( Ａ －Ａ ) ｐＨ４.５ꎮ 利用色差仪对 １１ 个香雪兰品种的花瓣进行测
５２０ ７００ ５２０ ７００
式中ꎬ Ｃ 为花色苷含量( ｍｇｇ )ꎻＡ 为吸光 定ꎬ结果如表 １ 所示ꎮ １１ 个香雪兰品种花色在 ＣＩＥ
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值ꎻε 为 矢 车 菊 素￣３￣葡 萄 糖 苷 的 摩 尔 消 光 系 数 表色系统坐标系上分布广泛ꎬ亮度 Ｌ 值的分布介于
∗
(２６ ９００)ꎻＭ 为花色苷分子质量(４４９.２)ꎻＤＦ 为稀 －８８.４２ 到 ３５.４６ 之间ꎮ 红绿属性 ａ 值的分布介于
∗