Page 138 - 《广西植物》2021年第7期

Ꭾ 期 周 丽 霞 等 ᧥ 椰子脂肪酸积累及与 Þᐹᡙଧ 基因表达关系研究 ϟ ϟ ᤃ Ꭾ
椰子果肉发育不同阶段的表达变化情况ᖔ可为将 ቝᔽႿᖔ再加入 ϟᤃ ቝᓂ 蒸馏水ᖔ充分振荡后放置至溶
来研究椰子脂肪酸合成的分子机理及脂肪酸成分 液清晰分层ᖔ吸取上清液ᖔ旋转蒸发仪将其减压蒸
的分子改良奠定基础ᤥ 本文以海南本地高种绿椰 干ᖔ得甲酯化脂肪酸ᖔ加入 ԡ঎ጢ ቝᓂ 正己烷使其溶解
为研究材料ᖔ应用 ी኏ఋ᥋۪ऊ኏ 和 ᥈ऊ᥋ᥘ୩ 检测技术ᖔ 并转移至 ϟ঎ ጢ ቝᓂ 气相色 谱上样瓶中ᖔ作 ᥈ऊ᥋ᥘ୩
分析 椰子果实不同生长时期 Þᐹᡙଧϟܦ Þᐹᡙଧ԰ 及 分析ᤥ
Þᐹᡙଧሕ 基因的表达量变化ᖔ结合椰子果肉在不同时 ϓॹ྽ ᤩࣷ᤬᤹୒ 条件
期各脂肪酸成分的相对含量ᖔ明确 ÞᐹᡙଧϟܦÞᐹᡙଧ԰ ᥈ऊ 条件᧥色谱 柱 ዶ੫ᔽ᤟ᔀႿᡷ ᧕ା᥋԰ሕ ྉ ሕԡ ቝ ġ ԰ጢԡ
及 Þᐹᡙଧሕ 的表达变化与各脂肪酸含量之间的变化 ဂቝ ġ ԡ঎԰ጢ ဂቝɯᖔ载气为氮气ᖔ柱初温 ϟऐԡ ቩ ᖔ以 ϟԡ
趋势ᖔ以期为将来深入掌握控制椰子果实中低碳 ቩኼቝᔽႿ 速率加热至 ԰԰ԡ ቩ ᖔ维持 ሕቝᔽႿᖔ平衡时
᥋ϟ
链脂肪酸合成的关键 Þᐹᡙଧ 基因及脂肪酸成分的 间 ϟቝᔽႿᖔ进样量 ϟဂᓂᖔ色谱柱流速 ϟቝᓂኼቝᔽႿ ᖔ
᥋ϟ
分子改良提供理论基础ᤥ 分流比 ϟᨒ ࿗ԡᤥ
ᥘ୩ 条件᧥ጶ᧧ 离子源ᖔ电子能量 ऐԡ ᔀ჆ᖔ电子倍
ϟজ 材料与方法 增器电压 ϟҴ჆ᖔ质量扫描范围 ԰ጢ ጲ ࿗ጢԡ ቝኼझ ᖔ离
᥋ϟ
子源温度 ԰ԡԡ ቩ ᖔ᥈ऊ᥋ᥘ୩ 接口温度 ԰ሕԡ ቩ ᖔ质谱检
ϓॹϓ 试验材料 测时间 ሕቝᔽႿᤥ
供试材料为中国热带农业科学院椰子研究所 ϓॹጇ 椰子果肉 ቴટዛ 提取
椰子大观园内本地高种绿椰ᤥ 将本地高种绿椰在 分别取第 ᤃܦᎮܦऐܦँ 个月的椰子果肉约 ϟ੫ᖔ用
花授粉后起记为第 ϟ 天ᖔ此后的第 ϟऐԡ 天ྉ 第 ᤃ 个 液氮研磨至粉末状ᖔ加入 ϟቝᓂ 提取液ᖔ剧烈震荡

月ɯܦ第 ԰ϟԡ 天ྉ 第 Ꭾ 个月ɯܦ第 ԰࿗ԡ 天ྉ 第 ऐ 个月ɯ 并在室温下静置 ጢቝᔽႿ 后ᖔ于 ࿗ቩ 超高速离心机
᥋ϟ
和第 ԰Ꭾԡ 天ྉ第 ँ 个月ɯ分别摘取同株的椰果和椰 中ϟԡ ԡԡԡ ʢኼቝᔽႿ 离心 ϟԡ ቝᔽႿᖔ取上清ᖔ加入 ᤃԡԡ
子嫩叶ᖔ每次取 ሕ 份重复ᤥ 椰子嫩叶迅速放于液 ဂᓂ 氯仿ᖔ混匀后在室温下静置 ᎮቝᔽႿᖔ于 ࿗ቩ 超高
᥋ϟ
氮冷却ᖔ带到实验室放在ͱऐԡ ቩ 保存ᖔ果肉于 ࿗ቩ 速离心机中ϟԡ ԡԡԡ ʢኼቝᔽႿ 离心 ϟԡ ቝᔽႿᖔ取上清ᖔ
冰箱中保存备用ᤥ 加入等体积异丙醇ᖔ混匀并在室温下静置 ϟԡ ቝᔽႿᖔ
石油醚ྉᤃԡ ጲ ँԡ ቩ ɯܦ氢氧化钾ܦ甲醇ܦ苯及和 于 ࿗ቩ 超高速离心机中 ϟԡ ԡԡԡ ʢኼቝᔽႿ 离心 ϟԡ
᥋ϟ
正己烷均购自海口琼山莱客科技服务中心ᖔ罗氏 ቝᔽႿᖔ弃上清ᖔ加入 ϟቝᓂ Ꭾጢᠮ乙醇ᖔ于 ࿗ቩ 超高速离
୩ɟା኏ ᥈ʢᔀᔀႿ ۪ऊ኏ ᥘᑕ༁ᡷᔀʢ ᥘᔽ଴ 购自 ୩ᔽ੫ቝᑕ 公司ᤥ 主 心机中Ꭾ ጢԡԡ ʢኼቝᔽႿ 离心 ጢቝᔽႿᖔ弃上清液ᖔ开盖
᥋ϟ
要仪器设备᧥ዶ੫ᔽ᤟ᔀႿᡷ Ꭾऐँԡዶ շ ጢँᎮጢऊ 气相色谱 ͱ质 干燥 ሕቝᔽႿᖔ加入 ԰ԡ ဂᓂ ኏શᑕ༁ᔀ᥋஦ʢᔀᔀ ̀ ᨃ 溶解ᤥ
԰
谱联用仪ྉ ዶ੫ᔽ᤟ᔀႿᡷɯᖔ上海亚荣 ኏ጶጢ԰ 旋转蒸发仪 ϓॹᣤ ቴટዛ 逆转录及检测
ྉ上海亚荣生化仪器厂ɯᖔ上海熙扬索氏提取器ྉ 上 逆转录 分 为两个步骤᧥ 步骤 ϟ 总体系为 ϟ԰
海熙扬仪器有限公司ɯᖔ实时荧光定量 ۪ऊ኏ 仪ྉ 美 ဂᓂᖔ其中 Ⴟࣼዹ᤟ᔀᑕ༁ᔀ᥋஦ʢᔀᔀ ۼᑕᡷᔀʢ ᤃ ဂᓂᖔ ᨃ᤟ᔽ੫ᆍ ྉ ʛఋɯ ϟऐ
国安捷伦 ᥘ଴ሕԡԡԡ۪ 型ɯᤥ ۪ʢᔽቝᔀʢ ϟ ဂᓂᖔቝ኏શዶ ጢ ဂᓂᖔᤃጢ ቩ ጢ ቝᔽႿ 后ᖔ迅速置
ϓॹԣ 脂肪酸的提取 于冰 水中冷却ଫ 步骤 ԰ 体系为 ऐဂᓂᖔ 其中ᖔጢ ġ
参考国家标准 ᥈ା ᣰ ఋ ԰ँԡᤃ᥋ϟँऐ԰ 谷类ܦ油料作 ኏ᔀᑕዹᡷᔽᆍႿ ାࣼ஦஦ᔀʢ ࿗ ဂᓂᖔ ኏ᔽᤦᆍ᤟ᆍዹҴ ኏શᑕ༁ᔀ ᧧Ⴟၤᔽᤦᔽᡷᆍʢ ྉ ԰ԡ
物种子粗脂肪测定方法ᖔ称取 ጢ੫ 椰子果肉ᖔ用研 ࣼኼ ဂᓂ ɯ ϟ ဂᓂᖔϟԡ ቝᥘ ʛશఋ۪ ᥘᔽ଴ ԰ ဂᓂᖔ ኏ᔀ׹ᔀʢ༁ᔀ
᥋ϟ
钵研磨至粉状后ᖔ用滤纸包裹并置于提取器中ᖔ向 ఋʢᑕႿ༁ዹʢᔽᡱᡷᑕ༁ᔀྉ԰ԡԡ ࣼኼဂᓂ ɯϟ ဂᓂᖔ将步骤 ԰ 中的 ऐ
᥋ϟ
提取瓶内加入 ԰ԡԡ ቝᓂ 石油醚ᖔऐԡ ቩ 恒温水浴回流 ဂᓂ 体系加入步骤 ϟ 的 ϟ԰ ဂᓂ 体系中ᖔ࿗԰ ቩ ᤃԡ ቝᔽႿ
提取约 ϟጢ ၤᖔ得无色透明萃取液ᖔ应用旋转蒸发仪 后 Ꭾԡ ቩ ጢ ቝᔽႿᤥ
将其减压浓缩得到 样 品 溶 液ᖔ 用石油醚定容至 采用 Вାऊϟԡ 内参基因ྉ ᣮᔽᑕ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ ԰ԡϟሕɯ 引物
ϟԡ ቝᓂᤥ ྉጢࣕ᥋ఋऊ᥈ዶऊ᥈ዶఋ᥈ዶऊዶఋऊዶዶऊ᥈ዶዶ᥈ఋ᥋ሕࣕᖔጢࣕ᥋ఋऊఋዶ
ϓॹᇺ 脂肪酸甲酯化处理 ఋ᥈ዶዶఋऊऊዶऊऊዶዶऊఋऊዶ᥈ऊ᥋ሕࣕɯ 进行 ۪ऊ኏ 扩增检

吸取上述样品提取液 ϟቝᓂᖔ 加入 ԰ቝᓂ ԡ঎ ࿗ 测ᖔ检测体系为 ϟԡ ဂᓂ᧥ዹ᧕શዶ ϟ ဂᓂᖔВାऊϟԡ è ᣰ ኏ 引
᥋ϟ
ቝᆍ᤟ኼᓂ 氢氧化钾的甲醇溶液ྉ 色谱级ɯ 和 ऐቝᓂ 物各 ԡ঎ ጢ ဂᓂᖔ ఋᑕी ᧕શዶ ۪ᆍ᤟ᢃቝᔀʢᑕ༁ᔀ ԡ঎ ԰ ဂᓂᖔ ʛશఋ۪
԰շ
苯ͱ石油醚ྉ 体积比 ϟᨒ ϟɯᖔ充分振荡后 静 置 ϟጢ ᥘᔽ଴ᡷࣼʢᔀ ԡ঎԰ ဂᓂᖔϟԡ ġఋᑕी ାࣼ஦஦ᔀʢྉ ᡱ᤟ࣼᔀ ᥘ੫ ɯϟ ဂᓂᖔ