Page 139 - 《广西植物》2021年第7期
P. 139
ϟ ϟ ᤃ ऐ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗ϟ 卷
ʛʛ̀ ᨃᤃᤃ ဂᓂᤥ ۪ऊ 检测程序᧥ँጢቩ ጢቝᔽႿᖔँጢ ቩ 个生物学重复和三个技术重复ᤥ 反应体系᧥ ġ
ሕԡ ༁ᖔጢጢ ቩ ሕԡ ༁ᖔᎮ ቩ ሕԡ ༁ 进行 ሕጢ 个循环ᖔᎮ ቩ èᑕ༁ᡷ୩ᡷᑕʢᡷ ВႿᔽᔀʢ༁ᑕ ୩ɟା ᥈ʢᔀᔀႿ ᥘᑕ༁ᡷᔀʢ 缓冲液 ጢ
ᎮቝᔽႿᤥ 琼脂糖凝胶电泳ᖔϟԡᠮ凝胶ᖔϟġఋዶጶ 缓冲 ဂᓂᖔ上下游引物ྉϟԡ ဂቝᆍኼᓂ ɯ 各 ԡጢ ဂᓂᖔᆍ ԡ
᥋ϟ
液ᖔϟԡ 电压电泳 ጢ ቝᔽႿᖔ置凝胶于凝胶成像分 ဂᓂᖔ᧕શዶ 模板 ϟ ဂᓂᖔʛʛ̀ ᨃऐ ဂᓂᖔ反应总体积 ϟԡ
析系统上检测ᤥ 逆转录成功的 ዹ᧕શዶ 母液用灭菌 ဂᓂᤥ 反应程序᧥ँጢ ቩ ϟԡ ቝᔽႿᖔँጢ ቩ ϟጢ ༁ᖔᤃԡ ቩ ሕԡ
ʛʛ̀ ᨃ 稀释 ϟԡ 倍ᖔ分装备用ᤥ ༁ᖔᎮ ቩ ሕԡ ༁ᖔ共 ࿗ԡ 个循环ᤥ 引物用 ۪ʢᔽቝᔀʢ ۪ʢᔀቝᔽᔀʢ
ϓॹ᎒ 荧光定量 ۗࣷቴ ጢԡ 进行设计ᖔ引物信息见表 ϟᖔ引物由生工生物工
采用罗氏的 ୩ɟା ᥈ʢᔀᔀႿ ۪ऊ ᥘᑕ༁ᡷᔀʢ ᥘᔽ 实时 程ྉ上海ɯ股份有限公司合成ᤥ
荧光定量试剂盒ᖔ在 ୩ᡷʢᑕᡷᑕ੫ᔀႿᔀ ᥘሕԡԡԡ۪ 实时荧光 ϓॹࣽ 方法
定量 ۪ऊ 系统上进行实验ᖔ每个目的基因进行三 应用 ୩̀᧧ᥘዶ᧕ԻВ ᥈ऊ ᣰ ᥘ୩ ༁ᆍࣼᡷᔽᆍႿ ᔀᔀᑕ༁ᔀ ϟԡ
表 ϓই 相关基因引物
ఋᑕᤦᔀ ϟজ ۪ʢᔽቝᔀʢ༁ ᆍ ʢᔀᑕᡷᔀʛ ੫ᔀႿᔀ༁
基因 命名 引物序列 基因序列号
᥈ᔀႿᔀ શᑕቝᔀ ۪ʢᔽቝᔀʢ ༁ᔀीࣼᔀႿዹᔀ ᥈ᔀႿାᑕႿҴ શᆍ
ᑕᡷᡷᢃ ᑕዹᢃ᥋ዶऊ۪ ᡷၤᔽᆍᔀ༁ᡷᔀʢᑕ༁ᔀ ାϟ Þᐹᡙଧϟ᥋è ጢࣕ᥋ఋ᥈ఋఋఋऊఋऊఋఋ᥈ఋऊఋఋऊऊऊ᥈ఋ᥋ሕࣕ ੫ᔽྍ ሕ࿗ሕँᤃሕԡᤃ ྍ
Þᐹᡙଧϟ᥋ ጢࣕ᥋ዶఋऊఋ᥈᥈ఋऊऊऊఋऊఋዶఋఋऊऊఋዶऊ᥋ሕࣕ
ᑕᡷᡷᢃ ᑕዹᢃ᥋ዶऊ۪ ᡷၤᔽᆍᔀ༁ᡷᔀʢᑕ༁ᔀ ା Þᐹᡙଧ᥋è ጢࣕ᥋ऊఋዶ᥈ዶዶ᥈᥈ዶዶ᥈᥈ऊऊዶ᥈ዶ᥈ዶዶ᥋ሕࣕ ੫ᔽྍ ሕ࿗ሕँᤃሕԡऐ ྍ
Þᐹᡙଧ᥋ ጢࣕ᥋᥈ዶዶዶዶऊऊऊऊዶዶऊዶዶዶऊዶఋዶዶ᥈ऊ᥋ሕࣕ
ᑕᡷᡷᢃ ᑕዹᢃ᥋ዶऊ۪ ᡷၤᔽᆍᔀ༁ᡷᔀʢᑕ༁ᔀ ାሕ Þᐹᡙଧሕ᥋è ጢࣕ᥋ऊఋఋ᥈ఋఋఋఋऊఋऊ᥈ऊఋఋఋ᥈ఋऊዶ᥋ሕࣕ ੫ᔽྍ ሕ࿗ሕँᤃሕϟԡ ྍ
Þᐹᡙଧሕ᥋ ጢࣕ᥋ऊఋఋऊዶఋఋఋዶऊఋऊఋऊዶ᥈ఋఋ᥈᥈᥈ఋ᥈᥋ሕࣕ
对 ᥈ऊ᥋ᥘ୩ 图谱进行鉴定和定量分析ᖔ根据 ᥈ऊ᥋ᥘ୩
联用测定得到的质谱信息ᖔ应用 શ᧧୩ఋ ϟϟ 数据库进
行检索ᖔ通过与标准谱图进行对照ᖔ确定每个成分
的化学结构ᤥ 引物设计采用 ۪ʢᔽቝᔀʢ ۪ʢᔀቝᔽᔀʢ ጢԡ 软
件ᖔ应用 ዶᡱᡱᔽᔀʛ ାᔽᆍ༁ᢃ༁ᡷᔀቝ༁ 实时荧光定量 ۪ऊ 仪进
行荧光定量 ۪ऊᖔጶዹᔀ ԡϟԡ 进行数据分析处理ᤥ
জ 结果与分析
ԣॹϓ 各生长时期椰子果肉脂肪酸含量分析
采用索氏提取法提取新鲜椰子果肉四个生长
图 ϟজ 四个生长时期椰子果肉脂肪酸的相对含量
时期的脂肪酸ᖔ如图 ϟ 所示ᖔ测得第 ᤃ 个月的椰子
èᔽ੫ ϟজ ᔀᑕᡷᔽᔀ ዹᆍႿᡷᔀႿᡷ༁ ᆍ ᑕᡷᡷᢃ ᑕዹᔽʛ༁
果肉脂肪酸相对含量为 ϟጢᠮᖔ第 Ꭾ 个月的椰子果
ᔽႿ ዹᆍዹᆍႿࣼᡷ ᔽႿ ᆍࣼʢ ੫ʢᆍऔᡷၤ ༁ᡷᑕ੫ᔀ༁
肉脂肪酸相对含量为 ሕᤃᠮᖔ第 ऐ 个月的椰子果肉
脂肪酸相对含量为 Ꭾԡᠮᖔ第 ँ 个月的椰子果肉脂 时期椰子果肉中含有的脂肪酸成分完全相同ᖔ都
肪酸相对含量为 ሕሕጢᠮᤥ 随着椰子果实的发育ᖔ 含有己酸ܦ辛酸ܦ癸酸ܦ月桂酸ܦ肉豆蔻酸ܦ棕榈酸ܦ
果肉中脂肪酸的含量不断增加ᤥ 本研究结果与段 硬脂酸饱和脂肪酸以及油酸ܦ亚油酸不饱和脂肪
岢君等ྉԡϟሕᤦɯ调查的结果基本相符ᤥ 酸ᖔ保留时间均在 ᤃጲऐ ቝᔽႿ 之间ᤥ 各时期脂肪酸
ԣॹԣ 椰子果肉脂肪酸的组成及相对含量 成分的相对含量变化较大ᖔ在椰子果实发育早期
应用 ᥈ऊ᥋ᥘ୩ 技术分别测定四个生长时期椰子 ྉ第 ᤃ 和第 Ꭾ 个月ɯᖔ棕榈酸ܦ硬脂酸ܦ油酸和亚油
果肉的脂肪酸成分及相对含量ᖔ结果如图 ͱጢ 所 酸的相对含量在 ϟԡԡᠮ ጲ ሕԡԡᠮ 之间ᖔ远大于己
示ᖔ由脂肪酸甲酯的总离子流色谱图可知ᖔ各生长 酸ܦ辛酸ܦ癸酸ܦ 月桂酸和肉豆蔻酸的相对含量ᤥ 在
