Page 162 - 《广西植物》2023年第11期

２ １ ２ ２ 广 西 植 物 ４３ 卷
昆明种小鼠ꎬ体重 １８ ~ ２２ ｇꎬＳＰＦ 级ꎬ购自四川达硕 ( Ｂ － Ｂ )
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抑制率(％)＝ １－ ×１００ꎮ
科技有限公司ꎬ生产许可证号为 ＳＣＸＫ( 川)２０２０－ ( Ｂ － Ｂ )
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０３０ꎻ乙醇、氯仿、正 丁 醇、ＰＢＳ 缓 冲 液、抗 坏 血 酸 式中:Ｂ 为样品溶液＋酶溶液的吸光度值ꎻＢ 为
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(ｖｉｔａｍｉｎ Ｃꎬ ＶＣꎬ购自国药集团化学 试 剂 有 限 公 样品溶液＋ＰＢＳ 缓冲溶液的吸光度值ꎻＢ 为 ＰＢＳ 缓
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司ꎻＡＢ￣８ 大孔树脂ꎬ购自苏州凯胜仪器有限公司ꎮ 冲溶液＋酶溶液的吸光度值ꎻＢ 为 ＰＢＳ 缓冲溶液吸
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１.２ 实验方法 光度值ꎮ
１.２.１ 刺梨多糖的制备 采用传统水提法ꎮ 料液 １.２.４ 糖尿病小鼠的体内实验 ４０ 只昆明种小鼠
比为 １ ∶ ３０ (ｇ ∶ ｍＬ)ꎬ提取温度为 ９５ ℃ ꎬ搅拌提取 (全为雄性)ꎬ随机取 １０ 只作为正常组ꎬ剩余 ３０ 只
２ ｈꎬ 重 复 提 取 １ 次ꎬ 得 到 刺 梨 粗 多 糖 液ꎮ 采 用 作为模型组( 通过高脂饮食和腹腔注射 ＳＴＺ 诱导
Ｓｅｖａｇｅ 试剂脱蛋白 １０ 次后ꎬ通过 ＡＢ￣８ 大孔树脂 糖尿病糖代紊乱模型ꎬ诱导 ６ 周)ꎮ 测得小鼠空腹
对多糖液进行脱色ꎬ抽滤ꎬ收集滤液ꎮ 加入无水乙 血 糖 水 平 持 续 高 于 正 常 血 糖 范 围 ( ３. ９ ~ ６. １
醇至乙醇体积分数为 ４０％ꎬ过夜醇沉(４ ℃ ) 后离 ｍｍｏｌＬ ) 且出现明显糖脂代谢紊乱症状( 如活
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心得到 ４０％多糖组分ꎻ继续向上清液中添加无水 动减 少、 多 食、 多 尿 等) 则 建 模 成 功 ( 潘 秋 等ꎬ
乙醇至体积分数为 ６０％ꎬ过夜醇沉离心得到 ６０％ ２０１０)ꎬ将模型小鼠分为 ３ 组ꎬ每组 １０ 只ꎮ Ａ 组按
多糖组分ꎬ冷冻干燥后即得到两种组分多糖ꎬ分别 ６００ ｍｇｋｇ 的剂量灌胃 ＲＴＩＤＦ 颗粒混悬液、Ｂ 组
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命名为多糖￣Ａ(ＲＳＰｓ￣６０)、多糖￣Ｂ(ＲＳＰｓ￣４０)ꎮ 按 ６００ ｍｇｋｇ 的剂量灌胃 ＲＲＴＰ￣ＲＴＩＤＦ 复合液
１.２.２ 刺梨不溶性膳食纤维的制备 采用酶提取 (ＲＲＴＰ ∶ ＲＴＩＤＦ ＝ １ ∶ ２ꎬＶ / Ｖ) 作为干预组ꎬＣＫ 组
法( 王 曦 璠 等ꎬ２０１９)ꎮ 向 刺 梨 样 品 粉 末 中 加 入 (模型小鼠) 灌胃等剂量的生理盐水作为对照组ꎬ
８５％乙醇 ５００ ｍＬꎬ进行脱糖处理ꎬ冷冻干燥后备 连续灌胃 ３０ ｄꎮ 记录建模过程中的小鼠日摄食量
用ꎮ 取刺梨样品粉末ꎬ加入 ＭＥＳ￣ＴＲＩＳ 缓冲液[ 料 及体重体征变化ꎻ观测给药前后各组小鼠血糖、血
液比为１ ∶ ４０( ｇ ∶ ｍＬ)ꎬｐＨ ８.２]ꎬ加入 α￣淀粉酶、 清中 ＣＡＴ 酶活力水平情况ꎻ之后解剖取出各组小
蛋白酶、淀粉葡萄糖苷酶去除刺梨中的非膳食纤 鼠肝脏、盲肠进行组织病理学观察和肠道菌群结
维物质ꎮ 用石油醚进行脱脂处理后ꎬ多次离心得 构测定ꎮ
到 残 渣ꎬ 干 燥 即 得 到 刺 梨 不 溶 性 膳 食 纤 维 １.２.５ 其他指标测定
(ＲＴＩＤＦ)ꎮ １.２.５.１ ＤＰＰＨ 自由基清除率的测定 两种不同浓
１.２.３ α￣淀粉酶、α￣葡萄糖苷酶抑制活性测定 取制 度梯度的多糖样液ꎬ分别取 ０.１ ｍＬ 于试管中ꎬ加入
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得的 ＲＲＴＰ 和 ＲＴＩＤＦ 样品ꎬ用 ＰＢＳ 缓冲液进行稀释ꎬ ３.９ ｍＬ ３.０ × １０ ｍｇｍＬ 的 ＤＰＰＨ￣甲醇液ꎬ混匀
分别配置系列浓度的多糖样品溶液(屠洁ꎬ２０１５)ꎮ 后避光静置 ２０ ｍｉｎꎬ于 ５１７ ｎｍ 处测定其吸光值
α￣淀粉酶抑制活性测定:样品管( 样品 ＋α￣淀 (Ａ )ꎻ以甲醇为空白对照组( Ａ )ꎻ以 ＶＣ 作为参照
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粉酶溶液)、样品对照管(样品＋ＰＢＳ 缓冲液)、空白 组(冯燕茹等ꎬ２０１９)ꎮ 计算公式如下:
对照管( ＰＢＳ 缓冲液＋α￣淀粉酶溶液)ꎮ 取上述各 (Ａ － Ａ )
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ＤＰＰＨ 自由基清除率(％)＝ ×１００ꎮ
样品 １５０ μＬ 加入试管中ꎬ先后加入 １５０ μＬ 的 α￣ Ａ
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淀粉酶溶液、１５０ μＬ １％淀粉溶液充分反应(３７ ℃ 式中:Ａ 为多糖样液吸光值ꎻＡ 为空白对照液
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恒温水浴 ３０ ｍｉｎ)ꎬ反应完全后加入蒸馏水进行稀 吸光值ꎮ
３＋
释ꎬ于 ５２０ ｎｍ 处测定吸光度ꎮ 样品对照管用 ＰＢＳ １.２.５.２ Ｆｅ 还原力的测定 两种不同浓度梯度的
缓冲液代替酶溶液ꎬ空白对照管用 ＰＢＳ 缓冲液代 多糖样液ꎬ分别加入 ２.５ ｍＬ ０.２ ｍｏｌＬ ＰＢＳ 缓冲
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替多糖溶液ꎬ空白管为 ＰＢＳ 缓冲溶液ꎮ 液(ｐＨ ６.６)、２.５ ｍＬ 铁氰化钾溶液(１％) 混合均
α￣葡萄糖苷酶抑制活性测定:与上述实验相 匀ꎬ５０ ℃ 水浴 ２０ ｍｉｎꎮ 加入三氯乙酸溶液(１０％)
同ꎬ取不同质量浓度的样品 １５０ μＬ 加入试管中ꎬ 终止反应ꎮ 加入蒸馏水和氯化铁(０.１％) 混合均
先后分别加入 １５０ μＬ 的 α￣葡萄糖苷酶溶液、１００ 匀ꎬ在 ７００ ｎｍ 下测吸光值ꎬ并以 ＶＣ 作为参照组
μＬ ｐＮＰＧ 溶液充分反应(３７ ℃ 恒温水浴 ３０ ｍｉｎ) (宋珅等ꎬ２０１４)ꎮ
后于 ４００ ｎｍ 处测定吸光度ꎮ 以上两者的抑制率 １.２.５.３ 血糖、血清中的 ＣＡＴ 酶活力测定 灌胃第
计算公式如下: ３０ 天ꎬ将各组小鼠禁食 １２ ｈꎬ剪尾取血ꎬ空腹血糖、