Page 104 - 《广西植物》2024年第12期

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Ａ. ＺｍＳＰＹ 基因克隆ꎻ Ｂ. 阳性菌落 ＰＣＲ 验证ꎻ Ｃ. 双酶切验证ꎮ
Ａ. ＺｍＳＰＹ ｇｅｎｅ ｃｌｏｎｉｎｇꎻ Ｂ. Ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｌｏｎｙ ＰＣＲ ｖａｌｉｄａｔｉｏｎꎻ Ｃ. Ｄｏｕｂｌｅ ｅｎｚｙｍｅ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ.
图 ５ ＺｍＳＰＹ 基因克隆和亚细胞定位载体构建
Ｆｉｇ. ５ Ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ＺｍＳＰＹ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ

Ａ、Ｅ. 细胞核经 ＤＡＰＩ 染色后蓝色荧光信号ꎻ Ｂ、Ｆ. 绿色荧光场ꎻ Ｃ、Ｇ. 明场ꎻ Ｄ、Ｈ. 叠加场ꎮ ｐＢＩＧＤ￣ＧＦＰ 为空载体ꎬ ｐＢＩＧＤ￣
ＺｍＳＰＹ￣ＧＦＰ 为包含 ＺｍＳＰＹ 的融合蛋白载体ꎮ
Ａꎬ Ｅ. Ｂｌｕｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｓｉｇｎａｌ ｓｔａｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ＤＡＰＩ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ ｎｕｃｌｅｕｓ ｏｆ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｃｅｌｌｓꎻ Ｂꎬ Ｆ. Ｇｒｅｅｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｆｉｅｌｄꎻ Ｃꎬ Ｇ. Ｂｒｉｇｈｔ ｆｉｅｌｄꎻ Ｄꎬ
Ｈ. Ｍｅｒｇｅｄ ｉｍａｇｅｓ. ｐＢＩＧＤ￣ＧＦＰ ｉｓ ａｎ ｅｍｐｔｙ ｃａｒｒｉｅｒꎬ ｐＢＩＧＤ￣ＺｍＳＰＹ￣ＧＦＰ ｉｓ ａ ｆｕｓｔｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃａｒｒｉｅｒ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ＺｍＳＰＹ.
图 ６ ＺｍＳＰＹ 蛋白在本氏烟草叶片中的亚细胞定位
Ｆｉｇ. ６ Ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＺｍＳＰＹ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｌｅａｆ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｃｅｌｌｓ ｏｆ Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ

果显示ꎬ植物 Ｏ￣岩藻糖基化修饰的蛋白主要包括转 于提高产物稳定性(Ｚｈａｎｇ ＆ Ｆｅｒｎｉｅꎬ ２０２１)、降低酶
录因子、核蛋白、激酶ꎬ以及涉及信号转导、新陈代 抑制效应(Ａｌａｍ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１７)ꎬ并防止不必要的催化

谢等生理过程的关键蛋白(Ｍｕｔａｎｗａｄ ＆ Ｌｕｃｙｓｈｙｎꎬ 串扰(Ｋｎｕｄｓｅｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１８) 具有重要意义ꎮ 因此ꎬ
２０２２)ꎬ这些蛋白大部分为核内蛋白ꎬ暗示 ＳＰＹ 介导 我们推测 ＳＰＹ 的核内定位可能有助于其识别且糖
Ｏ￣岩藻糖基化修饰的区室化倾向ꎮ 胞内生理生化 基化底物ꎬ从而稳定有效地调控植物体 Ｏ￣岩藻糖基
过程的区室化现象在植物体中广泛存在ꎬ其可能对 化修饰水平稳定ꎮ