Page 48 - 《广西植物》2024年第12期
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２ ２ ０ ６ 广 西 植 物 ４４ 卷
２.４.３ ＶｖＣＢＦ 蛋白进化树构建 将获得的 ＶｖＣＢＦ
蛋白序列进行 ＢＬＡＳＴ 比对分析后ꎬ下载同源性最
高的 １０ 种植物 ＣＢＦ 蛋白序列及葡萄中同源性高
的 ２ 个 ＣＢＦ 蛋白序列ꎬ利用 ＭＥＧＡ￣Ｘ 构建系统进
化树ꎮ 经 过 比 对 发 现ꎬ 与 ＶｖＣＢＦ 同 源 性 最 高 的
ＣＢＦ 蛋 白 均 为 蔷 薇 科 植 物ꎬ 依 次 为 ＰｌＣＢＦ
(ＡＥＢ６９７８２. １ )、 ＰｄＣＢＦ ( ＡＦＵ５４６０７. １ )、 甜 樱 桃
( Ｐｒｕｎｕｓ ａｖｉｕｍꎬ ＰａＣＢＦ: ＸＰ ＿ ０２１８０３６６１. １ )、 梅
(Ｐ. ｍｕｍｅꎬ ＰｍｕＣＢＦ: ＡＮＷ８２７８４. １)、 光 核 桃 ( Ｐ.
ｍｉｒａꎬ ＰｍＣＢＦ: ＡＦＵ５４６０６. １ )、 桃 ( Ｐ. ｐｅｒｓｉｃａꎬ
ＰｐｅＣＢＦ:ＸＰ ＿ ００７２０９８４２. ２ )、 樱 花 ( Ｐ. ｙｅｄｏｅｎｓｉｓꎬ
ＰｙＣＢＦ:ＰＱＱ１４２７９. １)、扁 桃 ( Ｐ. ｄｕｌｃｉｓꎬ ＰｄｕＣＢＦ４:
ＢＢＨ０３２９８. １ )、 杏 ( Ｐ. ａｒｍｅｎｉａｃａꎬ ＰａｒＣＢＦ:
ＡＷＲ８８５１７. １ )、 樱 桃 ( Ｐ. ｐｓｅｕｄｏｃｅｒａｓｕｓꎬ ＰｐＣＢＦ:
ＡＩＵ３９９９０.１)、 ＶｖＣＢＦ４ ( ＡＦＶ７３３３４. １) 和 ＶｖＣＢＦ４
(ＡＩＬ００７８６. １)ꎬ 同 源 性 分 别 为 １００％、 ９５. ４０％、
９４. ９４％、 ９４. ９４％、 ９４. １４％、 ９４. １４％、 ９４. ０９％、
９４.０９％、７８.０１％、７４.６９％、３９.６６％ 和 ３９.６６％ꎮ 图
９ 结果显示ꎬＶｖＣＢＦ 与 ＰｌＣＢＦ(ＡＥＢ６９７８２.１) 聚为一
支ꎬＰｐＣＢＦ(ＡＩＵ３９９９０.１)和 ＰａｒＣＢＦ(ＡＷＲ８８５１７.１)分
红色方框表示 ２ 个‘水晶’葡萄 ＦＴ 蛋白 (ＶｖＦＴ１ 和 ＶｖＦＴ２)ꎮ 别单独成一支ꎬＶｖＣＢＦ４( ＡＦＶ７３３３４.１) 和 ＶｖＣＢＦ４
Ｔｈｅ ｒｅｄ ｂｏｘｅｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｔｗｏ ＦＴ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｖｉｔｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａ × Ｖ.
(ＡＩＬ００７８６.１)分别单独成一支ꎬ其他植物 ＣＢＦ 聚
ｌａｂｒｕｓｃａ ‘Ｓｈｕｉｊｉｎｇ’(ＶｖＦＴ１ ａｎｄ ＶｖＦＴ２).
为一支ꎬ说明 ＶｖＣＢＦ 与野扁桃 ＣＢＦ 蛋白同源性最
图 ６ ＶｖＦＴ１ 和 ＶｖＦＴ２ 蛋白系统进化分析
高及亲缘关系最近ꎮ
Ｆｉｇ. ６ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＶｖＦＴ１ ａｎｄ ＶｖＦＴ２ ｐｒｏｔｅｉｎｓ
２.５ 单氰胺喷施后‘水晶’葡萄芽中 ＶｖＦＴ１、ＶｖＦＴ２
和 ＶｖＣＢＦ 基因的相对表达量
后发现ꎬＶｖＣＢＦ 蛋白中无规则卷曲和 α￣螺旋含量
通过 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 分析发现ꎬ喷施单氰胺后ꎬ葡萄
最多ꎬ而折叠延伸链含量最少ꎬ与二级结构预测
的 ＶｖＦＴ１ 和 ＶｖＦＴ２ 基因在第 ７、第 １４、第 ２１、第 ２８
结果一致( 图 ７:Ｂ) ꎮ 天ꎬ均高于其 ＣＫꎮ ‘水晶’ 葡萄的 ＶｖＦＴ１ 基因表达
２.４.２ ＶｖＣＢＦ 氨基酸保守结构域分析 使用 ＮＣＢＩ 量在第 ７ 天较 ＣＫ 增加了 １３５.８８％ꎬ第 １４ 天增加
的 ＣＤＤ 数据库预测葡萄 ＶｖＣＢＦ 蛋白的保守结构 了１２０.１２％ꎬ第 ２１ 天增加了 ４７.１３％ꎬ第 ２８ 天增加
域ꎬ图 ８:Ａ 结果显示葡萄 ＶｖＣＢＦ 蛋白的氨基酸序 了 ５７.７６％(图 １０:Ａ)ꎻＶｖＦＴ２ 基因的表达量在第 ７
列具有 ＡＰ２ 超家族结构域ꎬ其 ＤＮＡ 结合位点第 ５８ 天 较 ＣＫ 增 加 了 ３９０. ０８％ꎬ 第 １４ 天 增 加 了
位至第 ８６ 位氨基酸ꎮ 同时ꎬ经过 ＢＬＡＳＴ 比对分 １４２.３２％ꎬ第 ２１ 天增加了 １２９.２０％ꎬ第 ２８ 天增加
析ꎬ选择与 ＶｖＣＢＦ 同源性最高的 ２ 个 ＣＢＦꎬ即野扁 了 ６４.９０％(图 １０:Ｂ)ꎻＶｖＣＢＦ 基因的表达量在第 ７
桃( Ｐｒｕｎｕｓ ｌｅｄｅｂｏｕｒｉａｎａꎬＰｌＣＢＦ:ＡＥＢ６９７８２.１) 和山 天较 ＣＫ 降低了 ２６.４５％ꎬ第 １４ 天降低了 ５０.３０％ꎬ
桃(Ｐ. ｄａｖｉｄｉａｎａꎬＰｄＣＢＦ:ＡＦＵ５４６０７.１)ꎬ氨基酸同 第 ２１ 天降低了 ３９.８７％ꎬ第 ２８ 天降低了 １３.０５％
源性分别为 １００％和 ９５.４０％ꎮ 利用 ＤＮＡＭＡＮ ８ 软 (图 １０:Ｃ)ꎮ 植物的 ＦＴ 和 ＣＢＦ 基因在植物休眠
件进行 氨 基 酸 序 列 比 对 分 析ꎬ 图 ８: Ｂ 结 果 显 示 过程中起重要作用ꎬ并且 ＦＴ 与 ＣＢＦ 基因在此过程
ＶｖＣＢＦ 的氨基酸序列存在 ＡＰ２ ＤＮＡ 结合域以及 中呈负相关ꎮ 本试验结果显示ꎬ单氰胺喷施提高
位 于 该 结 合 域 两 端 的 特 征 序 列 ＰＫＫ / 了 ＶｖＦＴ１ 和 ＶｖＦＴ２ 基因表达量ꎬ而降低了 ＶｖＣＢＦ
ＲＡＧＲＲＶＦＫＥＴＲＨＰ 和 ＤＳＡＷＲ( 典型的 ＣＢＦｓ 转录 基因的基因表达量ꎬ表明单氰胺喷施葡萄可诱导
因子家族蛋白结构)ꎮ 其葡萄 ＦＴ 基因表达量的增加和 ＣＢＦ 基因表达量
