Page 45 - 《广西植物》2024年第12期
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１２ 期 李小琴等: 单氰胺破除葡萄休眠生理生化响应及相关基因克隆与表达分析 ２ ２ ０ ３
和龙眼( Ｄｉｍｏｃａｒｐｕｓ ｌｏｎｇａｎꎬＤｌＦＴ２:ＡＨＦ２７４４４.１)ꎬ
氨基酸 同 源 性 分 别 为 ９５. ９８％ 和 ９３. ６８％ꎮ 利 用
ＤＮＡＭＡＮ ８ 软件进行氨基酸序列比对分析ꎬ图 ５:Ｃ
结果 显 示 ＶｖＦＴ１ 和 ＶｖＦＴ２ 的 氨 基 酸 序 列 包 含
ＤＰＰＡＰ 和 ＧＩＨＲ 模块ꎬ具有 ＰＥＢＰ 家族典型功能
结构域ꎬ并且 ＶｖＦＴ１ 和 ＶｖＦＴ２ 均具有关键的保守
氨基酸位点 Ｔｙｒ８４( Ｙ) 和 Ｃｌｎ１３９( Ｑ)ꎬ具有 ＦＴ 活
性起 关 键 作 用 的 １１ 个 保 守 氨 基 酸 残 基 序 列
( ＲＱＴｘＹＡＰＧＷＲＱ )ꎮ 综 上 所 述ꎬ 利 用 ＮＣＢＩ 中
ＣＤＤ 数据库以及同源比对分析结果显示ꎬＶｖＦＴ１
和 ＶｖＦＴ２ 具有 ＰＥＢＰ 家族典型功能结构域ꎬ并且
该结构域保守ꎬ说明该结构域对蛋白功能的发挥
非常重要ꎮ
２.３.３ ＶｖＦＴ１ 和 ＶｖＦＴ２ 蛋白进化树构建 ＶｖＦＴ１ 和
图 ２ 蒸馏水(Ａ)和单氰胺(Ｂ)处理‘水晶’葡萄后 ＶｖＦＴ２ 序列分析表明ꎬ核苷酸同源性为 ９０.２９％ꎬ氨
第 ２８ 天的发芽情况 基酸同源性为 ８３.３０％ꎬ将获得的 ＶｖＦＴ１ 和 ＶｖＦＴ２
Ｆｉｇ. ２ Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｖｉｔｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａ × Ｖ. ｌａｂｒｕｓｃａ 蛋白序列 ＢＬＡＳＴ 比对后下载同源性最高的 １０ 种
‘Ｓｈｕｉｊｉｎｇ’ ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｗｉｔｈ ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ ｗａｔｅｒ (Ａ)
植物 ＦＴ 蛋白序列及葡萄中同源性高的 ２ 个 ＦＴ 蛋
ａｎｄ ｃｙａｎａｍｉｄｅ (Ｂ) ｏｎ ｔｈｅ ２８ｔｈ ｄａｙ
白序列ꎬ利用 ＭＥＧＡ￣Ｘ 构建系统进化树ꎮ 经过比
对发现ꎬ与 ＶｖＦＴ１ 同源性最高的 ＦＴ 蛋白序列依次
为 ＬｃＦＴ( ＡＥＵ０８９６０. １)、ＤｌＦＴ２ ( ＡＬＡ５５９９８. １)、欧
洲栓皮栎(Ｑｕｅｒｃｕｓ ｓｕｂｅｒꎬ ＱｓＦＴ:ＸＰ＿０２３８９９３２０.１)、水
青 冈 ( Ｆａｇｕｓ ｃｒｅｎａｔａꎬ ＦｃＦＴ: ＢＡＰ２８１７３. １ )、 枣
(Ｚｉｚｉｐｈｕｓ ｊｕｊｕｂａꎬＺｊＦＴ:ＸＰ ＿０１５８７３５９８. １)、糙叶山
黄麻( Ｐａｒａｓｐｏｎｉａ ａｎｄｅｒｓｏｎｉｉꎬＰａｎＦＴ:ＰＯＮ５５３８２.１)、
可可( Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ ｃａｃａｏꎬＴｃＦＴ: ＸＰ ＿００７０２８０８３.１)、
银白杨( Ｐｏｐｕｌｕｓ ａｌｂａꎬＰａＦＴ:ＫＡＪ６８９１８５９.１)、毛白
杨 ( Ｐ. ｔｏｍｅｎｔｏｓａꎬ ＰｔＦＴ: ＡＦＵ０８２４０. １ )、 金 银 花
(Ｌｏｎｉｃｅｒａ ｊａｐｏｎｉｃａꎬＬｊＦＴ:ＷＧＯ４９５４２.１)、葡萄( Ｖｉｔｉｓ
ｖｉｎｉｆｅｒａꎬ ＶｖＦＴ: ＡＢＦ５６５２６. １ ) 和 ＶｖＦＴ ( ＮＰ ＿
００１２６７９０７. １ )ꎬ 与 ＶｖＦＴ１ 蛋 白 同 源 性 分 别 为
９４.８３％、 ９３. ６８％、 ８６. ７８％、 ８５. ０６％、 ８５. ６３％、
８４.４８％、 ８４. ４８％、 ８３. ９１％、 ８３. ９１％、 ８３. ３３％、
８０.４６％和 ７９.３１％ꎮ 与 ＶｖＦＴ２ 同源性最高的 ＦＴ 蛋
Ｍ. ＤＬ ２ ０００ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒꎻ １. ＶｖＦＴ１ꎻ ２. ＶｖＦＴ２ꎻ ３. ＶｖＣＢＦ. 白 序 列 依 次 为 ＬｃＦＴ ( ＡＥＵ０８９６１. １ )、 ＤｌＦＴ２
图 ３ ‘水晶’葡萄 ＶｖＦＴ１、ＶｖＦＴ２ 和 ＶｖＣＢＦ 基因扩增 (ＡＨＦ２７４４４. １ )、 欧 洲 栓 皮 栎、 水 青 冈、 番 木 瓜
Ｆｉｇ. ３ ＶｖＦＴ１ꎬ ＶｖＦＴ２ ａｎｄ ＶｖＣＢＦ ｇｅｎｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ (Ｃａｒｉｃａ ｐａｐａｙａꎬＣｐＦＴ:ＸＰ＿０２１９１１５０３.１)、枣、独脚
Ｖｉｔｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａ × Ｖ. ｌａｂｒｕｓｃａ ‘Ｓｈｕｉｊｉｎｇ’ 金( Ｓｔｒｉｇａ ｈｅｒｍｏｎｔｈｉｃａꎬ ＳｈＦＴ:ＣＡＡ０８２１２４５. １)、毛
果 杨 ( Ｐｏｐｕｌｕｓ ｔｒｉｃｈｏｃａｒｐａꎬ ＰｔＦＴ: ＸＰ ＿ ００２３１１２６４.
ｃｈｉｎｅｎｓｉｓꎬＬｃＦＴ: ＡＥＵ０８９６０. １) 和 龙 眼 ( Ｄｉｍｏｃａｒｐｕｓ １)、月季(Ｒｏｓａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓꎬＲｃＦＴ:ＸＰ＿０２４１８９５９３.１)、
ｌｏｎｇａｎꎬＤｌＦＴ２:ＡＬＡ５５９９８.１)ꎬ氨基酸同源性分别 枇 杷 ( Ｒｈａｐｈｉｏｌｅｐｉｓ ｂｉｂａｓꎬ ＲｂＦＴ２: ＡＬＡ５６３００. １ )、
为 ９４.８３％和 ９３.６８％ꎬ以及 ＶｖＦＴ２ 同源性最高的 ２ ＶｖＦＴ( ＡＢＦ５６５２６.１) 和 ＶｖＦＴ( ＮＰ ＿００１２６７９０７.１)ꎬ
个 ＦＴꎬ即荔枝(Ｌｉｔｃｈｉ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓꎬＬｃＦＴ:ＡＥＵ０８９６１.１) 与 ＶｖＦＴ２ 蛋白同源性分别为 ９５.９８％、 ９３.６８％、
