Page 63 - 《广西植物》2024年第2期

２ 期 李童等: 绣球‘杜丽’ＡＰ３ 基因克隆与基因编辑载体构建 ２ ６ ５

段潮霉素浓度的方式来进一步优化ꎬ以提高基因 ＰＩＳＴＩＬＬＡＴＡ ｈｏｍｏｌｏｇｓ ｅｘｈｉｂｉｔ ｎｏｖｅｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｉｎ
编辑效率ꎮ ｔｈｅ ｕｎｉｑｕｅ ｐｅｒｉａｎｔｈ ｏｆ Ａｒｉｓｔｏｌｏｃｈｉａ ( Ａｒｉｓｔｏｌｏｃｈｉａｃｅａｅ )
[Ｊ]. Ｅｖｏｌ Ｄｅｖꎬ ６(６): ４４９－４５８.
本研究在绣球‘ 杜丽’ 中克隆到 １ 个 ＨｍＡＰ３
ＪＩＡ ＤＪꎬ ＦＡＮ ＬＭꎬ ＳＨＥＮ ＪＬꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１３. Ｇｅｎｅｔｉｃ
基因ꎬｃＤＮＡ 序列全长 ５４６ ｂｐꎬ共编码 １８１ 个氨基
ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｏｆ ａｓｔａｘａｎｔｈｉｎ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
酸ꎬ为稳定的亲水性蛋白ꎬ氨基酸序列结构分析证
ｇｅｎｅｓ ＢＫＴ ｉｎｔｏ ‘ Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ Ｇａｌａ’ ａｐｐｌｅ ｔｒｅｅ [ Ｊ]. Ａｃｔａ
明其具有 ＭＡＤＳ￣ｂｏｘ Ｂ 类基因亚家族特征ꎬ系统进 Ｈｏｒｔｉｃ Ｓｉｎꎬ ４０(１): ２１－３１. [贾东杰ꎬ 樊连梅ꎬ 沈俊岭ꎬ
化分析表明 ＨｍＡＰ３ 与烟草、番茄、金鱼草亲缘关 等ꎬ ２０１３. 虾 青 素 合 成 关 键 酶 基 因 ＢＫＴ 在 ‘ Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ
系较近ꎬ基序组成结构保守ꎻ以 ＨｍＡＰ３ 为靶点ꎬ成 Ｇａｌａ’苹果中的遗传转化及表达 [Ｊ]. 园艺学报ꎬ ４０(１):
功构建 ２ 个以 Ｃａｓ９ 基因、ｓｇＲＮＡ、潮霉素抗性基因 ２１－３１.]
为骨架的 ＣＲＩＳＰＲ / Ｃａｓ９ 基因编辑载体ꎬ并将载体 ＪＩＮＥＫ Ｍꎬ ＣＨＹＬＩＮＳＫＩ Ｋꎬ ＦＯＮＦＡＲＡ Ｉꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１２. Ａ
ｐｒｏｇｒａｍｍａｂｌｅ ｄｕａｌ￣ＲＮＡ￣ｇｕｉｄｅｄ ＤＮＡ ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ ｉｎ
序列整合到绣球基因组中ꎮ 上述研究结果为进一
ａｄａｐｔｉｖｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｉｍｍｕｎｉｔｙ [ Ｊ ]. Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ ３３７(６０９６):
步研究 ＨｍＡＰ３ 基因功能奠定了理论基础ꎬ为重瓣
８１６－８２１.
绣球基因编辑辅助育种工作提供技术支撑ꎮ ＫＡＵＲ Ｈꎬ ＰＡＮＤＥＹ ＤＫꎬ ＧＯＵＴＡＭ Ｕꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２１. ＣＲＩＳＰＲ/
Ｃａｓ９￣ｍｅｄｉａｔｅｄ ｇｅｎｏｍｅ ｅｄｉｔｉｎｇ ｉｓ ｒｅｖｏｌｕｔｉｏｎｉｚｉｎｇ ｔｈｅ
ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ ｃｒｏｐｓ: ｒｅｃｅｎｔ ａｄｖａｎｃｅｓ ａｎｄ
参考文献: ｆｕｔｕｒｅ ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ [Ｊ]. Ｓｃｉ Ｈｏｒｔ￣Ａｍｓｔｅｒｄａｍꎬ ２８９(１１０４７６):

１－１３.
ＡＬＢＥＲＴ ＶＡꎬ ＧＵＳＴＡＦＳＳＯＮ ＭＨＧꎬ ＬＡＵＲＥＮＺＩＯ ＬＤꎬ
ＫＩＳＨＩ￣ＫＡＢＯＳＨＩ Ｍꎬ ＡＩＤＡ Ｒꎬ ＳＡＳＡＫＩ Ｋꎬ ２０１７. Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ
１９９８. Ｏｎｔｏｇｅｎｅｔｉｃ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｓꎬ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ
ｇｅｎｅ￣ｅｄｉｔｅｄ Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ ｍｏｒｉｆｏｌｉｕｍ ｕｓｉｎｇ ｍｕｌｔｉｃｏｐｙ
ｇｅｎｅｔｉｃｓꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ａｎｇｉｏｓｐｅｒｍｐｅｔａｌ [ Ｍ ] / / Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｔｒａｎｓｇｅｎｅｓ ａｓ ｔａｒｇｅｔｓ ａｎｄ ｍａｒｋｅｒｓ [Ｊ]. Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌꎬ
Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｓ ｏｆ ｐｌａｎｔｓⅡ. Ｂｏｓｔｏｎ: Ｓｐｒｉｎｇｅｒ: ３４９－３７４. ５８(２): ２１６－２２６.
ＣＨＯＵ ＫＣꎬ ＳＨＥＮ ＨＢꎬ ２０１０. Ｃｅｌｌ￣ＰＬｏｃ ２. ０: ａｎ ｉｍｐｒｏｖｅｄ
ＫＩＳＨＩ￣ＫＡＢＯＳＨＩ Ｍꎬ ＡＩＤＡ Ｒꎬ ＳＡＳＡＫＩ Ｋꎬ ２０１９. Ｐａｒｓｌｅｙ
ｐａｃｋａｇｅ ｏｆ ｗｅｂ￣ｓｅｒｖｅｒｓ ｆｏｒ ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ
ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｄｉｓｐｌａｙｓ ｈｉｇｈｅｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｔｈａｎ ｔｈｅ ＣａＭＶ
ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｖａｒｉｏｕｓ ｏｒｇａｎｉｓｍｓ [Ｊ]. Ｎａｔ Ｓｃｉꎬ ２(１０): １０９０.
３５Ｓ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ Ａｃｔｉｎ ２ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｆｏｒ
ＣＯＥＮ ＥＳꎬ ＭＥＹＥＲＯＷＩＴＺ ＥＭꎬ １９９１. Ｔｈｅ ｗａｒ ｏｆ ｔｈｅ ｗｈｏｒｌｓ: ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅꎬ ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅꎬ ａｎｄ ｄｕｒａｂｌｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａ
ｇｅｎｅｔｉｃ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ｆｌｏｗｅｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ [ Ｊ ]. ｔｒａｎｓｇｅｎｅ ｉｎ Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ ｍｏｒｉｆｏｌｉｕｍ [ Ｊ]. Ｂｒｅｅｄ Ｓｃｉꎬ
Ｎａｔｕｒｅꎬ ３５３(６３３９): ３１－３７. ６９(３): １９０３６.
ＦＡＮ Ｄꎬ ＬＩＵ ＴＴꎬ ＬＩ ＣＦꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１５. Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ＣＲＩＳＰＲ/ Ｃａｓ９￣
ＫＵＩ Ｌꎬ ＣＨＥＮ ＨＴꎬ ＺＨＡＮＧ ＷＸꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１７. Ｂｕｉｌｄｉｎｇ ａ
ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ Ｐｏｐｕｌｕｓ ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｇｅｎｅｔｉｃ ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ ｔｏｏｌ ｂｏｘ ｆｏｒ ｏｒｃｈｉｄ ｂｉｏｌｏｇｙ:
ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ [Ｊ]. Ｓｃｉ Ｒｅｐꎬ ５(１): １－７. ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒｓ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ
ＧＡＮ ＨＣꎬ ＬＡＩ ＣＣꎬ ＰＡＮ Ｈꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１８. Ｐｌａｎｔ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ＣＲＩＳＰＲ/ Ｃａｓ９ ｉｎ ｔｈｅ ｏｒｃｈｉｄꎬ Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ [ Ｊ].
ｖｅｃｔｏｒ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｊａｓｍｉｎｅ [Ｊａｓｍｉｎｕｍ ｓａｍｂａｃ (Ｌｉｎｎ.) Ｆｒｏｎｔ Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉꎬ ７(２０３６): １－１３.
Ａｉｔｏｎ] ｃａｌｌｕｓ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ＤＦＲ ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ ｓｐｉｎｅ ｇｒａｐｅ ＬＩＵ ＹＬꎬ ＮＡＫＡＹＡＭＡ Ｎꎬ ＳＣＨＩＦＦ Ｍꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００４. Ｖｉｒｕｓ
(Ｖｉｔｉｓ ｄａｖｉｄｉｉ Ｆｏëｘ.) [Ｊ]. Ｃｈｉｎ Ｊ Ｔｒｏｐ Ｃｒｏｐꎬ ３９(６): １１２８－ ｉｎｄｕｃｅｄ ｇｅｎｅ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｏｆ ａ ｄｅｆｉｃｉｅｎｓ ｏｒｔｈｏｌｏｇ ｉｎ Ｎｉｃｏｔｉａｎａ
１１３６. [甘煌灿ꎬ 赖呈纯ꎬ 潘红ꎬ 等ꎬ ２０１８. 刺葡萄 ＤＦＲ 基 ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ [Ｊ]. Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌꎬ ５４(５): ７０１－７１１.
因植物表达载体构建及转化茉莉花愈伤组织的研究 ＭＡＲＴＩＮＯ ＧＤꎬ ＰＡＮ Ｉꎬ ＥＭＭＡＮＵＥＬ Ｅꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００６.
[Ｊ]. 热带作物学报ꎬ ３９(６): １１２８－１１３６.] Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｎａｌｙｓｅｓ ｏｆ ｔｗｏ ｔｏｍａｔｏ ＡＰＥＴＡＬＡ３ ｇｅｎｅｓ
ＨＳＵ ＰＤꎬ ＳＣＯＴＴ ＤＡꎬ ＷＥＩＮＳＴＥＩＮ ＪＡꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１３. ＤＮＡ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅ ｄｉｖｅｒｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅｉｒ ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｆｌｏｒａｌ
ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ＲＮＡ￣ｇｕｉｄｅｄ Ｃａｓ９ ｎｕｃｌｅａｓｅｓ [Ｊ]. Ｎａｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ [Ｊ]. Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌꎬ １８(８): １８３３－１８４５.
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌꎬ ３１(９): ８２７－８３２. ＭＥＬＺＥＲ Ｒꎬ ＴＨＥＩßＥＮ Ｇꎬ ２００９. Ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ｏｆ ‘ ｆｌｏｒａｌ
ＨＵ ＸＹꎬ ＧＵＯ ＣＬꎬ ＷＡＮＧ Ｌꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２１. Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｑｕａｒｔｅｔｓ’ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ ｃｌａｓｓ Ｂ ａｎｄ ｃｌａｓｓ Ｅ ｆｌｏｒａｌ ｈｏｍｅｏｔｉｃ
ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＶｖＭＡＤＳ４６ ｉｎ ｒｅｄ ｇｌｏｂｅ ａｎｄ ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ [Ｊ]. Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓꎬ ３７(８): ２７２３－２７３６.
ｓｅｅｄｌｅｓｓ ｆｏｒ ｓｅｅｄｌｅｓｓ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ [Ｊ]. Ｊ Ｆｒｕｉｔ Ｓｃｉꎬ ３８(８): ＭＯＮＤＲＡＧÓＮ￣ＰＡＬＯＭＩＮＯ Ｍꎬ ＴＨＥＩßＥＮ Ｇꎬ ２００９. Ｗｈｙ ａｒｅ
１２３１－１２３９. [胡晓燕ꎬ 郭春磊ꎬ 王莉ꎬ 等ꎬ ２０２１. 无核白及 ｏｒｃｈｉｄ ｆｌｏｗｅｒｓ ｓｏ ｄｉｖｅｒｓｅ? Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ
红地球葡萄 ＶｖＭＡＤＳ４６ 基因的克隆及其无核调控功能分 ｃｏｎｓｔｒａｉｎｔｓ ｂｙ ｐａｒａｌｏｇｕｅｓ ｏｆ ｃｌａｓｓ Ｂ ｆｌｏｒａｌ ｈｏｍｅｏｔｉｃ ｇｅｎｅｓ
析 [Ｊ]. 果树学报ꎬ ３８(８): １２３１－１２３９.] [Ｊ]. Ａｎｎ Ｂｏｔꎬ １０４(３): ５８３－５９４.
ＪＡＲＡＭＩＬＬＯ ＭＡꎬ ＫＲＡＭＥＲ ＥＭꎬ ２００４. ＡＰＥＴＡＬＡ３ ａｎｄ ＮＩＳＨＩＨＡＲＡ Ｍꎬ ＨＩＧＵＣＨＩ Ａꎬ ＷＡＴＡＮＡＢＥ Ａꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ