Page 81 - 《广西植物》2024年第2期

２ 期 魏丽琴等: 三个玫瑰品种花色物质的代谢组学分析 ２ ８ ３

分析ꎮ ＡＣＱＵＩＴＹＴＭ ＵＰＬＣ Ｉ￣Ｃｌａｓｓ 超高效液相色谱
１ 材料与方法 系统 ( Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎꎬ Ｍｉｌｆｏｒｄꎬ ＭＡꎬ ＵＳＡ)ꎬ Ｘｅｖｏ

Ｇ２￣ＸＳＱＴｏｆ ＭＳ 质 谱 系 统 ( Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎꎬ
１.１ 材料采集和处理 ＭａｎｃｈｅｓｔｅｒꎬＵＫ)ꎬＵＮＩＦＩ １.８ 软件系统ꎮ ＵＰＬＣ ＢＥＨ

试验样品为紫红色‘苦水玫瑰’(‘Ｒｏｓａ ｒｕｇｏｓａ × Ｃ 色谱柱(Ｗａｔｅｒｓꎬ１.７ μｍꎬ ２.１ ｍｍ × １５０ ｍｍ)ꎮ 以
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Ｒｏｓａ ｓｅｒｔａｔａ’ꎬ ＫＳＭＧ)、 红 色 ‘ 墨 红 玫 瑰’ (‘ Ｒｏｓａ ０.１％甲酸水溶液(Ａ) 和乙腈( Ｂ) 为液相色谱流动
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Ｃｒｉｍｓｏｎ Ｇｌｏｒｙ’ꎬＭＨＭＧ) 和白色‘保加利亚白玫瑰’ 相ꎬ流速 ０.３ ｍＬｍｉｎ ꎻ洗脱程序为 ０.００~０.５０ ｍｉｎꎬ
(‘Ｒｏｓａ ａｌｂａ’ꎬ ＢＭＧ)３ 个栽培玫瑰ꎮ 花瓣材料采自 １０％ Ｂꎻ０.５０~１５.００ ｍｉｎꎬ１０％ ~ ６０％ Ｂꎻ１５.００~ １６.０１
甘肃省永登县玫瑰研究所玫瑰种质资源基地ꎮ 每 ｍｉｎꎬ６０％ ~９８％ Ｂꎻ１６.０１~１８.００ ｍｉｎꎬ９８％ Ｂꎻ１８.００~
种试材均选择生长势一致、无病害、管理统一的玫 １８.０１ ｍｉｎꎬ９８％ ~ １０％ Ｂꎻ１８.０１ ~ ２０.００ ｍｉｎꎬ１０％ Ｂꎮ
瑰植株 ３ 株ꎮ 于 ２０２２ 年 ５ 月 ２０ 日和 ６ 月 ５ 日采集 ４０ ℃的柱温箱、８ ℃ 的自动进样器和 ２ μＬ 的进样
盛开期的花瓣样品(图 １)ꎮ 采集标本时ꎬ从 ４ 个方 量ꎮ 数据采集以多反应监测(ＭＲＭ) 模式进行质谱
向分别抽取不同的花瓣样本ꎬ然后进行混合ꎬ每一 分析(赵君等ꎬ２０２１)ꎮ
品种分别进行 ３ 次生物学重复测定ꎮ 取样后将花瓣 １.３ 数据分析
样品装入具有编号的密封袋内ꎬ将其放入冰盒中以 本 研 究 通 过 色 差 仪 测 定 玫 瑰 花 瓣 的 明 度
防其凋谢ꎬ随后放置于－８０ ℃ 的冰箱中保存用于后 (Ｌ )、红度( ａ ) 和黄度( ｂ )ꎬ计算出彩度( Ｃ )
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续代谢组学分析(王峰等ꎬ２０１７)ꎮ 和色调角(ｈ )ꎬ公式如下:Ｃ ＝ ( ａ ∗ ２ ＋ｂ ∗ ２ ) １/ ２ ꎻｈ ＝
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１.２ 方法 ａｒｃｔａｎ(ａ / ｂ )ꎮ 使用 ＳＰＳＳ ２２.０ 软件对花色与关
１.２.１ 花色表型测定 花色利用国际照明委员会制 键代谢物进行相关性分析ꎮ 使用上海百趣生物医
定的 ＣＩＥ Ｌ ａ ｂ 表色系法(王峰等ꎬ２０１７ꎻ李辛雷 学科技有限公司 ＵＰＬＣ￣ＭＳ / ＭＳ 检测平台测定不同
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等ꎬ２０１９ａ)进行测定ꎮ 采集新鲜花瓣ꎬ用 ＷＲ１８ 精密 花色玫瑰中类黄酮代谢物ꎮ 采用 Ｍｅｔａｂｏ Ａｎａｌｙｓｔ
色差仪(深圳市威福光电科技有限公司) 测定玫瑰 ５.０ 软件对所有样本中的待测物进行定性定量分
花瓣的明度 ( Ｌ )、红度 ( ａ ) 和黄度 ( ｂ )ꎬ 彩度 析ꎮ 用无监督模式对各组样本之间的代谢物进行
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∗ ꎮ 多元统计分析ꎬ并且挑选出 Ｐ<０.０５ 且 ＶＩＰ≥１ 的
(Ｃ ) 和 色 调 角 ( ｈ ) 实 现 花 色 的 数 字 化 ( 张 玲ꎬ
２０１５)ꎮ 在光源 Ｃ / ２ 下ꎬ将集光孔对准花瓣上表皮 显著 差 异 代 谢 产 物ꎮ 利 用 ＫＥＧＧ 数 据 库、 ＭＢ
ꎮ
中央部位进行测量ꎬ每样品分别测量 ３ 朵花的花色 ＲＯＬＥ ２.０ 网站和微生信网站进行通路富集分析ꎮ
参数ꎬ取平均值(Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ２００４ꎻ Ｗａｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１９)ꎮ
１.２.２ 类黄酮提取 将新鲜花瓣进行－８０ ℃ 冷冻干 ２ 结果与分析
燥后ꎬ将其粉碎(６０ Ｈｚꎬ３０ ｓ) 为粉末状ꎬ将 １００ ｍｇ
的试样加入 ５ ｍＬ 离心管中ꎬ加入提取液(７５％甲 ２.１ ３ 个玫瑰品种的花色特征
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醇含 １％乙酸) ３ ０００ μＬꎬ涡旋 ３０ ｓꎬ４０ Ｈｚ 匀浆 ４ 花色在 ＣＩＥ Ｌ ａ ｂ 表色系统坐标轴的分布
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ｍｉｎꎬ于冰水浴中超声 ３０ ｍｉｎꎻ４ ℃ ꎬ１２ ０００ ｒｍｉｎ 上ꎬ明度(Ｌ )为明暗度变化ꎬＬ 越大ꎬ花瓣的亮度
[离心力 １３ ８００( ×ｇ)ꎬ半径 ８.６ ｃｍ] 离心 １５ ｍｉｎꎻ 越高ꎮ 由表 １ 可知ꎬ相比于‘墨红玫瑰’ 和‘ 苦水玫
取 ２ ５００ μＬ 的 上 清 液ꎬ 然 后 用 氮 气 吹 干ꎬ 再 用 瑰’的 Ｌ ꎬ‘保加利亚白玫瑰’ 的 Ｌ 最高(７８.４１)ꎬ
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１ ５００ μＬ 提取液 Ｂ(５０％ 甲醇含 ０.１％ 甲酸ꎬ含内 花色更偏向于白色ꎮ 红度( ａ ) 由正值到负值ꎬ是
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标)复溶ꎻ涡旋 １ ｍｉｎ 后于冰水浴中超声 １５ ｍｉｎꎬ４ 红色到绿色的变化程度ꎬ‘ 墨红玫瑰’ 的 ａ 比‘ 保
￣１ 加利亚白玫瑰’的高 １０６.４６ꎬ‘墨红玫瑰’的花色偏
℃ ꎬ１２ ０００ ｒｍｉｎ [离心力 １３ ８００( ×ｇ)ꎬ半径 ８.６
ｃｍ]离心 １５ ｍｉｎꎻ上清液通过 ０.２２ μｍ 滤膜过滤 向于红色ꎮ 黄度( ｂ ) 由正值到负值ꎬ是黄色到蓝
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后ꎬ取于 ２ ｍＬ 进样瓶中ꎬ各样品均匀混合ꎬ制作质 色的变化程度ꎬ‘保加利亚白玫瑰’ 的 ｂ 介于两者
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量控制( ＱＣ) 样品ꎬ上机检测与分析( 王方方等ꎬ 之间ꎬ花色为白色且带黄晕ꎮ 彩度( Ｃ ) 值越大ꎬ
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２０１７ꎻＤａｎｅｓｈｐａｊｏｏｈ ｅｔ ａｌ.ꎬ２０１９ꎻ张培月等ꎬ２０２２)ꎮ 颜色越鲜明ꎬ‘墨红玫瑰’的 Ｃ 最大ꎬ为 １１０.３７ꎬ颜
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１.２.３ 类黄酮的定性和定量分析 利用 ＵＰＬＣ￣Ｑ￣ 色偏向 于 深 红 色ꎬ 其 次 是 ‘ 苦 水 玫 瑰’ 的 Ｃ 为
ＴＯＦ￣ＭＳ 联用技术对花瓣中类黄酮进行定性与定量 ７１.６０ꎬ 花色偏向紫红色ꎮ 色调角( ｈ ) 是对 ７ 种颜
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