Page 175 - 《广西植物》2024年第5期

５ 期 安雪姣等: ‘曼赛龙柚’种子不同发育期高温耐性研究 ９ ６ ３

２００１)ꎮ 据此我们推测ꎬ种子高温耐性的获得与种 为 １ 个重复ꎬ每个处理 ６ 个重复ꎮ 每周定期观测并
子发育过程中的细胞结构、代谢活性及保护性蛋 记录萌发情况ꎬ胚根伸出约 ０.５ ｃｍ 为萌发或存活ꎬ
白质合成有关ꎮ 形成形态正常的幼苗为成苗ꎮ 萌发期为 １ 个月左
柚(Ｃｉｔｒｕｓ ｍａｘｉｍａ)是著名的热带亚热带水果ꎬ 右ꎬ实验结束时检查未萌发种子是否腐烂ꎮ 用最
栽培广、产量大、耐贮藏ꎬ我国的种植面积和产量 终发芽率与成苗率来衡量种子的生命力ꎮ
均居世界首位ꎮ 我国是柚的起源中心和分布中 １.２.２ 不同发育时期种子的高温耐性评价 前期
心ꎬ具有丰富的种质资源和悠久的种柚历史( 沈德 的研究表明ꎬ在 ３０ ℃ 条件下ꎬ‘ 曼赛龙柚’ 种子萌
绪等ꎬ１９９８)ꎮ 前期的研究表明ꎬ‘ 曼赛龙柚’ 种子 发率最高、发芽速度最快ꎬ是其萌发的最适温度ꎻ
是中间型种子( Ｗｅｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１０)ꎬ虽然在脱水耐 在 ４０ ℃ 条件下其萌发受到了严重的抑制( Ａｎ ｅｔ
性方面与正常性种子比较靠近ꎬ其高温耐性却与 ａｌ.ꎬ ２０２３)ꎬ而西双版纳地区空旷地地表温度经常
顽拗性种子比较相近ꎬ但又不完全相同ꎬ因此具有 达到或超过 ４０ ℃ (刘文杰等ꎬ２０００)ꎬ因此采用 ４０
一定的特殊性( Ａｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２３)ꎮ 本文通过研究 ℃ 的连续性高温处理评价种子的高温耐性ꎬ具体
发育过程中‘ 曼赛龙柚’ 种子高温耐性的变化ꎬ探 做法如下:将种子播种在含有 １％ 琼脂的培养皿
讨‘曼赛龙柚’ 种子高温耐性形成的生理机制ꎬ为 中ꎬ置于 ４０ ℃ 的恒温培养箱中高温处理不同时
今后制定抗高温技术措施提供科学依据ꎮ 间ꎮ 高温处理完成后ꎬ取出放在 ３０ ℃ 的恒温培养
箱中培养ꎬ按前述方法定期观测并记录萌发与成
１ 材料与方法 苗情况ꎮ 在 ４０ ℃ 高温处理的最长时间依种子的
发育阶段不同ꎬ从 １２ ｈ 到 １ ０３２ ｈꎮ 依据高温处理
１.１ 材料 后种子的存活率和成苗率变化评价不同发育阶段
实验选用在西双版纳广为栽培的‘ 曼赛龙柚’ 种子的高温耐性ꎮ
(Ｃｉｔｒｕｓ ｍａｘｉｍａ ‘Ｍａｎｓａｉｌｏｎｇ’)ꎬ其花期大致在每年 １.２.３ 可溶性和热稳定蛋白的测定 提取: 从上述
１ 月中旬至 ３ 月下旬ꎬ果实成熟期 １０ 月中旬( 杨 不同发育时期的‘ 曼赛龙柚’ 种子中取 １０ ~ ２０ 粒
坤ꎬ２００１)ꎮ 有研究表明ꎬ‘ 曼赛龙柚’ 种子在花后 种子ꎬ用镊子剥去种皮ꎬ切碎ꎬ放入冷冻管中ꎬ保存
１８０ 天达到生理成熟ꎬ完成形态建成并获得发芽能 在－８０ ℃ 备用ꎮ 实验前ꎬ取约 ０. １ ｇ( 鲜重) 的样
力( 薛鹏和文彬ꎬ２０１５)ꎮ 我们观测到ꎬ２０２２ 年西 品ꎬ置于研钵中ꎬ加入 ０.５ ｍＬ ＰＢＳ 缓冲液ꎬ冰浴匀
双版纳热带植物园经济推广站果园‘曼赛龙柚’ 的 浆后ꎬ转移至 １.５ ｍＬ 的离心管中ꎬ再用 ０.５ ｍＬ ＰＢＳ
集中开花时间在 １ 月 ６ 日前后ꎮ 据此ꎬ从 ２０２２ 年 缓冲液冲洗研钵并转移至离心管中ꎮ 充分混匀
６ 月至 １２ 月ꎬ以花后周数标记种子的发育ꎬ每两周 后ꎬ在 ４ ℃ 下 １５ ０００ ｇ 离心 ２ 次ꎬ每次 １５ ｍｉｎꎮ 收
一次从该果园选择大小、颜色相近的果实ꎬ采摘 集上清液约 ４００ μＬꎬ一半用作可溶性蛋白测定ꎮ
１０ ~ １５ 个ꎬ 去 掉 果 皮 果 肉 以 及 外 种 皮ꎬ 获 得 近 另一半在 ９５ ℃ 恒温水浴锅中加热 １０ ｍｉｎꎬ冷却后
１ ３００粒种子ꎮ 在完成千粒重、含水量等基本数据 在 ４ ℃ 下 １５ ０００ ｇ 低温离心 １５ ｍｉｎꎬ收集上清液
的收集后ꎬ其余种子一部分用于高温耐性评价ꎬ另 并用作热稳定蛋白分析(Ｔｈｉｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ.ꎬ １９９９)ꎮ

一部分用于细胞超显微结构观察和蛋白分析ꎮ 标准曲线绘制: 根据 Ｂｒａｄｆｏｒｄ(１９７６) 的考马
１.２ 方法 斯亮蓝法ꎬ使用酶标仪测定每个样品的蛋白质含
１.２.１ 种子基本参数的测定 种子鲜重测定: 随机 量(陈美林等ꎬ２０１８)ꎮ 称取 ５０ ｍｇ 牛血清蛋白ꎬ加
￣１
取出 １００ 粒种子称重ꎬ重复 １０ 次ꎬ取平均值ꎮ 入 ＰＢＳ 溶解并定容至 ５０ ｍＬꎬ配制为 １ ｍｇｍＬ 的
种子含 水 量 测 定: 按 照 国 际 种 子 检 验 规 程 标准蛋白溶液ꎬ再用 ＰＢＳ 溶液稀释成蛋白量浓度
(ＩＳＴＡꎬ １９９６)ꎬ随机取 １ 粒种子ꎬ重复 ８ 次ꎬ放入 分别为 ０、１００、２００、４００、６００、８００、１ ０００ μｇｍＬ ꎬ
￣１
(１０３±２) ℃ 的烘箱中烘(１７±１) ｈꎮ 以种子鲜重为 然后加入考马斯亮蓝 Ｇ￣２５０ 染液在 ５９５ ｎｍ 处测定

基础表示含水量ꎬ即含水量(％) ＝ ( 鲜重－干重) / 吸光值并绘制标准曲线ꎮ
鲜重×１００ꎮ 测定: 可溶性蛋白按 ２５ μＬ 样品加入 ７５ μＬ
种子生命力测定: 按发芽端朝上的方式ꎬ将种 提取液进行稀释ꎬ再加入 ０.５ ｍＬ 考马斯亮蓝染液ꎬ
子播种在含 １％琼脂的培养皿中ꎬ每皿 ２５ 粒种子 混匀后静置 ５ ~ ２０ ｍｉｎꎬ用酶标仪在 ５９５ ｎｍ 处测定