Page 118 - 《广西植物》2025年第10期
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１ ８ ４ ８ 广 西 植 物 ４５ 卷
１.８ 数据处理 因此ꎬ选择 ３００ ｍＬ 作为后续培养基的最适装液量ꎮ
本研究数据采用 ＳＰＳＳ ２６.０ 软件进行统计学 由图 ２:Ｂ 可知ꎬ将 ３００ ｍＬ 装液量的优化培养
分析ꎬ用平均值±标准差描述符合正态分布的计量 基 ｐＨ 分别调节为 ５.０、６.０、７.０、８.０ꎬ该菌株能够在
数据ꎮ 对正交试验结果进行极差分析、方差分析 由酸性(ｐＨ ５.０)到弱碱性(ｐＨ ８.０) 的环境中保持
和显著性分析ꎮ 采用 ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ９.５ 进行图 其抗菌活性ꎬ表明其对环境 ｐＨ 的变化具有较强的
形绘制ꎮ 耐受性ꎮ 在 ｐＨ ６.０ 时抑菌圈直径最大ꎬ达到 １６.３３
ｍｍꎮ 选择 ｐＨ ６.０ 作为培养基的最适 ｐＨꎮ
２ 结果与分析 在基本发酵培养条件下ꎬ将装液量 ３００ ｍＬ、
ｐＨ ６.０ 的优化培养基分别培养 ６、８、１０、１２ ｄꎬ由图
２.１ 菌株 ＡＰ￣１２ 培养条件的优化 ２:Ｃ 可知ꎬ发酵 ６ ~ １２ ｄ 时ꎬ菌株均具有抑菌活性ꎻ
２.１.１ 碳源和氮源对菌株 ＡＰ￣１２ 抑菌活性的影响 由 发酵 ８ ｄ 时ꎬ抑菌圈直径最大ꎬ为 １６.５０ ｍｍꎬ与其
图 １:Ａ 可知ꎬ向马铃薯浸出液中分别添加不同种 他发酵时间存在显著性差异ꎻ最小的是发酵 ６ ｄꎬ
类碳源ꎬ果糖作为碳源时ꎬ菌株 ＡＰ￣１２ 对青枯菌的 抑菌圈直径为 １４.２３ ｍｍꎮ 因此ꎬ选择发酵 ８ ｄ 作
抑菌活性最强ꎬ抑菌圈直径达 １２.１８ ｍｍꎬ显著高于 为菌株最适发酵时间ꎮ
蔗糖、葡萄糖和麦芽糖ꎬ选择果糖作为最佳碳源ꎮ ２.１.３ 菌株 ＡＰ￣１２ 正交优化结果 根据单因素试
由图 １:Ｂ 可知ꎬ分别添加不同质量浓度的果糖ꎬ抑 验结果ꎬ在确定菌株 ＡＰ￣１２ 合适的发酵培养基各
菌圈直径随着果糖质量浓度的增加先升高后降 组分种类及发酵条件的基础上ꎬ以果糖、酵母粉、
￣１ 装液量、ｐＨ 为考察对象ꎬ以抑菌圈直径为评价指
低ꎬ在浓 度 ４０ ｇ Ｌ 时 抑 菌 活 性 最 大ꎬ 为 １３. １５
￣１ ４
ｍｍꎬ１０ ｇＬ 时抑菌活性最低ꎮ 因此ꎬ选择 ４０ ｇ 标ꎬ采用 Ｌ (３ )正交设计ꎬ因素水平见表 １ꎮ
９
￣１
Ｌ 质量浓度作为最适碳源浓度ꎮ 对正交试验结果进行极差分析(表 ２)ꎬＲ >Ｒ >
Ａ Ｂ
向优化碳源后的培养基中分别 加 入 不 同 种 Ｒ >Ｒ ꎬ即培养基配方及发酵条件对菌株 ＡＰ￣１２ 抑
Ｃ Ｄ
类氮源ꎬ添加了酵母粉、蛋白胨、大豆粉的抑菌圈 菌活性的影响依次为装液量>果糖>酵母粉>ｐＨꎮ
直径显著高于无氮源添加的培养基ꎬ而添加了牛 通过方差分析和显著性分析结果( 表 ３) 发现ꎬ仅
肉膏的 培 养 基 与 无 氮 源 培 养 基 差 异 无 显 著 性ꎮ 装液量对试验结果的影响显著(Ｐ<０.０５)ꎬ果糖、酵
酵母粉的抑 菌 圈 直 径 ( １３. ８５ ｍｍ) 最 大ꎬ相 较 于 母粉及 ｐＨ 对结果的差异均不显著ꎬ表明装液量是
无氮源培养基(１１.９６ ｍｍ) 提高了 １.９ ｍｍ( 图 １: 影响试验结果的主要因子ꎮ 最终确定菌株 ＡＰ￣１２
Ｃ) ꎮ 选择 酵 母 粉 作 为 最 佳 氮 源ꎮ 由 图 １: Ｄ 可 的最佳组合为 Ａ Ｂ Ｃ Ｄ ꎬ编号为 １０ꎬ即碳源为质
１
１
１
３
￣１ ￣１
知ꎬ分别添加不同质量浓度的酵母粉ꎬ２０ ｇＬ 量浓度 ２０ ｇＬ 的果糖、氮源为质量浓度 ２０ ｇ
￣１ ￣１ Ｌ 的酵母粉、ｐＨ 值为 ６.０、装液量为 ４００ ｍＬ、转速
￣１
的抑菌圈直径显著高于 １０ ｇＬ 和 １５ ｇＬ 的ꎬ
￣１
当浓度继续增加ꎬ抑菌活性增大幅度变缓ꎬ在 ２５ 为 １５０ ｒｍｉｎ 及 ２８ ℃ 下培养 ８ ｄꎮ 分别采用最佳
ｇＬ 质量浓度时达到最大值( １４.６８ ｍｍ) ꎬ随后 组合的条件及 １.４.１ 下的初始培养条件(ＰＤＢ 作为
￣１
菌株的抑菌活性不再增强ꎬ并且随着氮源在培养 发酵培养基)对菌株 ＡＰ￣１２ 进行发酵培养ꎬ结果显
基中剩余量的增加ꎬ发酵液过于黏稠ꎬ增大了后 示在最佳发酵工艺条件下ꎬ菌株 ＡＰ￣１２ 对青枯菌
续次生代谢产物分离纯化时处理发酵液的难度ꎮ 的抑菌圈直径为(１９.５７±０.４７) ｍｍꎬ比未进行优化
因此ꎬ 选 择 ２５ ｇ Ｌ 质 量 浓 度 作 为 最 适 氮 源 前的抑菌圈直径提高了 ８３.４１％ꎬ该结果验证了最
￣１
浓度ꎮ 佳发酵工艺条件的合理性ꎮ
２.１.２ 装液量、ｐＨ 和发酵时间对菌株 ＡＰ￣１２ 抑菌活 ２.２ 菌株 ＡＰ￣１２ 的盆栽防治效果
性的影响 由图 ２:Ａ 可知ꎬ向 ５００ ｍＬ 锥形瓶中分 ２.２.１ 广藿香青枯病发病症状 健壮的广藿香叶
别加入 １００、２００、３００、４００ ｍＬ 的优化培养基ꎬ装液量 片深绿色ꎬ根茎呈绿色、肥厚、无病斑ꎬ体视镜下根
为 ３００、４００ ｍＬ 的抑菌圈直径分别为 １５.１７、１５.００ 茎切面绿色、无腐烂痕迹ꎻ感染青枯病后叶片仍为
ｍｍꎬ二者的抑菌圈直径差异不显著ꎬ说明在该范围 绿色ꎬ但萎垂微卷、呈明显缺水状ꎬ根茎有明显病
内ꎬ装液量的增加对菌株抗菌活性的提升作用已达 斑ꎬ根部变黑腐烂ꎬ体视镜下根茎横切面破碎ꎬ由
到饱和ꎬ但显著高于装液量 １００ ｍＬ 和 ２００ ｍＬ 的ꎮ 外向内腐烂变褐(图 ３)ꎮ
