Page 198 - 《广西植物》2025年第10期

１ ９ ２ ８ 广 西 植 物 ４５ 卷
过促进萜类挥发性物质含量来提高植株抗虫性ꎮ 草炭或椰糠、２０％ ~ ３０％碳化谷壳、８％ ~ ９.５％珍珠
此外ꎬ茉莉酸( ｊａｓｍｏｎｉｃ ａｃｉｄꎬＪＡ)、水杨酸( ｓａｌｉｃｙｌｉｃ 岩、１％过磷酸钙和 １０％ ~ １５％泥炭土组成ꎮ 待苗
ａｃｉｄꎬＳＡ)、ＡＢＡ 和 Ｃａ 等信号通路被证明在植物 木培育至 ６ 个月时ꎬ选择长势基本一致、健康的马
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抗虫防御中发挥重要作用( Ｗａｌｌｉｎｇꎬ ２０００)ꎬ如外 尾松幼苗作为实验材料ꎮ
源 ＡＢＡ 处 理 能 显 著 增 强 水 稻 对 褐 飞 虱 １.２ 实验处理

( Ｎｉｌａｐａｒｖａｔａ ｌｕｇｅｎｓꎻ ＢＰＨ ) 的 抗 性 ( Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ.ꎬ 设计 １０ 个处理ꎬ包括 ９ 个处理组和 １ 个对照
２０１７)ꎮ ＷＲＫＹ２ 和 ＷＲＫＹ６ 基因可通过参与上述信 组(ＣＫ)ꎮ 其中ꎬ４ 个处理组为单独喷施 ７５ ｍｇＬ 脱
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号通路进而调控植物抗虫性ꎮ 例如ꎬ渐狭叶烟草 落酸 ( ＡＢＡ)、５０ ｍｇＬ 水杨酸( ＳＡ)、１００ ｍｇ
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(Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ａｔｔｅｎｕａｔｅ) ＷＲＫＹ３ 和 ＷＲＫＹ６ 基 因 在 昆 Ｌ 茉 莉 酸 甲 酯 ( ｍｅｔｈｙｌ ｊａｓｍｏｎａｔｅꎬ ＭｅＪＡ) 和 １５０
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虫连续攻击过程中能通过增强或维持 ＪＡ 水平来 ｍｇＬ 赤霉素( ｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｎ ａｃｉｄꎬ ＧＡ)ꎬ４ 个处理为
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提高植株抗虫性( Ｓｋｉｂｂｅ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００８)ꎻＮｔＷＲＫＹ６ 激素中分别加入 １００ ｍｇＬ ＣａＣｌ 溶液(配制各溶
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基因受 ＳＡ 显著诱导表达ꎬ过表达该基因能提高烟 液时分别加入 １％ 吐温－ ２０)ꎬ１ 个处理单独喷施
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草对粉虱( Ｂｅｍｉｓｉａ ｔａｂａｃｉ) 的抵抗能力( Ｙａｏ ｅｔ ａｌ.ꎬ １００ ｍｇＬ ＣａＣｌ 溶液ꎬ对照组( ＣＫ) 喷施等量蒸
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２０２１)ꎻ金丝雀棕榈树 ＷＲＫＹ２、ＷＲＫＹ１４、ＷＲＫＹ２８、 馏水ꎬ每处理 ６ 株幼苗ꎬ每处理进行 ３ 次重复ꎬ于
ＷＲＫＹ５１ ４ 个 ＷＲＫＹ 家 族 基 因 在 红 棕 榈 象 虫 每天上午 ９ 点喷施上述各溶液和蒸馏水ꎬ每处理
(Ｒｈｙｎｃｈｏｐｈｏｒｕｓ ｆｅｒｒｕｇｉｎｅｕｓ) 侵染后被显著诱导表 喷施 ２００ ｍＬꎬ连续喷施 ５ ｄꎮ 在停止处理后的第 １
达ꎬ表明这些基因可能在抗虫响应中具有重要作 天、第 ３ 天和第 ５ 天分别采集各处理马尾松幼苗
用(Ｖｅｒｄｅ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１９)ꎮ 同部位针叶ꎬ同一处理样品等量混合后于液氮中
马尾松是我国南方的典型针叶乡土树种ꎬ具 速冻保存(陈虎等ꎬ２０２１)ꎮ
有适应性强、生长迅速等特点ꎬ是可综合利用的重 １.３ ＲＮＡ 提取及逆转录
要用材树种( 杨章旗ꎬ２０１５)ꎮ 马尾松生长过程中 利用 多 糖 多 酚 植 物 总 ＲＮＡ 提 取 试 剂 盒
容易受到生物或非生物逆境威胁ꎬ对木材产量和 [ＰＤ４４１ꎬ天根生化科技( 北京) 有限公司] 提取马
生态环境造成影响ꎬ其中病虫害和季节性干旱等 尾松幼苗针叶 ＲＮＡꎬ利用 １％琼脂糖凝胶电泳检测
是影响林业生产的重要因素( 吴敏娟等ꎬ２０１９)ꎮ ＲＮＡ 完整性ꎬ并用紫外分光光度计检测 ＲＮＡ 浓
课题组前期研究中发现ꎬＷＲＫＹ、ＡＰ２ / ＥＲＦ 等转录 度ꎮ 得到质量合格的样品后ꎬ再采用 Ｍ￣ＭＬＶ 逆转
因子 家 族 响 应 马 尾 松 抗 虫 过 程 ( Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ 录酶[Ｄ２６３９Ａꎬ宝生物工程(大连)有限公司] 将所
２０１６)ꎬ 随 后 发 现 ＷＲＫＹ 转 录 因 子 家 族 中 的 得的 ＲＮＡ 逆转录成 ｃＤＮＡꎬ具体操作按说明书进
ＰｍＷＲＫＹ２ 和 ＰｍＷＲＫＹ６ 在马尾松抗虫品种中显著 行ꎬ最后将所得样品浓度稀释至 ５０ ｎｇμＬ ꎮ
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高表达(Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２１ａ)ꎬ但其是否受到激素和 １.４ 生物信息学分析
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Ｃａ 信号调控还不清楚ꎮ 本研究通过对 ＰｍＷＲＫＹ２ 利 用 Ｅｘｐａｓｙ 在 线 网 站 ( ｈｔｔｐｓ: / / ｗｅｂ. ｅｘｐａｓｙ.
和 ＰｍＷＲＫＹ６ 基因的蛋白理化性质、系统进化等生 ｏｒｇ / ) 分 析 蛋 白 分 子 质 量、 等 电 点 等 理 化 性 质
物信息学特征及在不同外源信号物质处理下的表 (Ｄｕｖａｕｄ ｅｔ ａｌꎬ ２０２１)ꎻ利用 ＴＭＨＭＭ Ｓｅｒｖｅｒ ｖ.２.０
达模式进行分析ꎬ以期为探索马尾松 ＷＲＫＹ 家族 ( ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ. ｃｂｓ. ｄｔｕ. ｄｋ / ｓｅｒｖｉｃｅｓ/ ＴＭＨＭＭ) 预 测

基因参与激素调控机制提供一定的理论基础ꎮ 蛋白跨膜结构域( Ｍｏｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００１)ꎻ利用 ＷｏＬＦ
ＰＳＯＲＴ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ (ｈｔｔｐ: / / ｐｓｏｒｔ１.ｈｇｃ.ｊｐ / ｆｏｒｍ.ｈｔｍｌ)
１ 材料与方法 进行亚细胞定位预测( Ｈｏｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００７)ꎻ利用

ＳＯＰＭＡ ( ｈｔｔｐｓ: / / ｎｐｓａ￣ｐｒａｂｉ. ｉｂｃｐ. ｆｒ / ｃｇｉ￣ｂｉｎ / ｎｐｓａ ＿
１.１ 实验材料 ａｕｔｏｍａｔ.ｐｌ? ｐａｇｅ ＝ ｎｐｓａ％２０＿ｓｏｐｍａ.ｈｔｍｌ) 预测蛋白

本实验以半年生马尾松全同胞幼苗(家系号: 质二 级 结 构 ( Ｇｅｏｕｒｊｏｎ ＆ Ｄｅｌｅａｇｅꎬ １９９５ )ꎻ 利 用
１７￣２４３)为材料ꎬ种植于广西林科院松树良种繁育 ＮｅｔＰｈｏｓ ３.１ ( ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ. ｃｂｓ. ｄｔｕ. ｄｋ / ｓｅｒｖｉｃｅｓ/
苗圃ꎮ 挑选颗粒饱满的马尾松种子播种于黄心土 ＮｅｔＰｈｏｓ/ )分析 蛋 白 质 磷 酸 化 位 点 ( Ｂｌｏｍ ｅｔ ａｌ.ꎬ
中发芽ꎬ待芽长至 ５ ｃｍ 后ꎬ移栽至无纺纤维布育苗 １９９９)ꎻ 利 用 ＮＣＢＩ 的 ＢｌａｓｔＰ 工 具 ( ｈｔｔｐｓ: / / ｗｗｗ.
杯(１２ ~ １５ ｃｍ) 育苗ꎬ采用的轻基质由 ４５％ ~ ６０％ ｎｃｂｉ.ｎｌｍ.ｎｉｈ.ｇｏｖ / ｃｄｄ / ) 对 ＰｍＷＲＫＹ２ 和 ＰｍＷＲＫＹ６