Page 51 - 《广西植物》2025年第2期
P. 51
２ 期 滕明雪等: 东京银背藤中一个新的异戊烯基异黄酮 ２ ５ ３
国 Ｂｒｕｋｅｒ 公司)ꎻＡｇｉｌｅｎｔ Ｇ６２３０ ＴＯＦ 质谱仪( 美国 乙酯ꎬ９ ∶ １ →３ ∶ ７ꎬＶ / Ｖ) 洗 脱 得 ９ 个 组 分 ( Ｂ１ －
Ａｇｉｌｅｎｔ 公司)ꎻＬＣ￣２０ＡＲ 型制备型高效液相色谱仪 Ｂ９)ꎻ Ｂ７ 经 反 相 Ｃ 柱 色 谱 分 离ꎬ 用 甲 醇 － 水
１８
(日本岛津公司)ꎻＲＥＶＥＬＥＲＩＳＸ２ 型制备色 谱 仪 (３０％ ~ １００％) 划分为 １０ 个组分( Ｂ７￣１ － Ｂ７￣１０)ꎻ
(美 国 Ｇｒａｃｅ 公 司 )ꎻ Ｎ￣１３００Ｄ￣ＷＢ 旋 转 蒸 发 仪 Ｂ７￣３ 经半制备液相色谱( 甲醇 －水ꎬ２５ ∶ ７５ꎬＶ / Ｖꎻ
￣１
(ＥＶＥＬＡ 公司)ꎻ分析天平( 德国 Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ 公司)ꎻ ｖ ＝ ２ ｍＬｍｉｎ ) 洗脱得化合物 １２( ｔ ＝ ２０.４ ｍｉｎꎬ
Ｒ
半制备型色谱柱( ＹＭＣ￣Ｐａｃｋ ＯＤＳ￣Ａ １０ ｍｍ × ２５０ ２.０ ｍｇ)ꎻＢ７￣４ 用半制备液相色谱( 甲醇－水ꎬ２５ ∶
￣１
ｍｍꎬＳ￣５ μｍ)、Ｃ 反 相 填 料 ( ＹＭＣ ∗ ＧＥＬ ＯＤＳ￣Ａ￣ ７５ꎬＶ / Ｖꎻｖ ＝ ２ ｍＬｍｉｎ ) 洗脱得化合物 １１ ( ｔ ＝
１８ Ｒ
ＨＧ)(日本 ＹＭＣ 公司)ꎻ色谱柱( 各种不同规格普 ２５.６ ｍｉｎꎬ１０.２ ｍｇ)ꎮ
通开口玻璃柱)ꎻ薄层层析硅胶 Ｇ、柱层析硅胶( 青 组分 Ｃ(１１２.７ ｇ)经硅胶柱色谱分离(石油醚－
岛海洋化工厂)ꎻＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０( 美国 Ｐｈａｒｍａｃｉａ 乙酸 乙 酯 ９ ∶ １ →３ ∶ ７ꎬ Ｖ / Ｖ) 洗 脱 得 １１ 个 组 分
公司)ꎻ色谱纯乙腈、甲醇(赛默飞世尔科技公司)ꎻ (Ｃ１－Ｃ１１)ꎻＣ５ 经反相 Ｃ 柱色谱分离ꎬ用甲醇－水
１８
其余试剂为国产分析纯( 西陇科学公司)ꎻＤＭＥＭ (３０％ ~ １００％) 划分为 １３ 个组分( Ｃ５￣１ － Ｃ５￣１３)ꎻ
培养基和胎牛血清( 以色列 Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ 公 Ｃ５￣９ 用半制备液相色谱(甲醇－０.１％甲酸水ꎬ５２ ∶
司)ꎻＭＴＳ 试剂盒( 北京普洛麦格公司)ꎻ顺铂和紫 ４８ꎬＶ / Ｖꎻｖ ＝ ２ ｍＬ ｍｉｎ ) 洗 脱 得 化 合 物 ６ ( ｔ ＝
￣１
Ｒ
杉醇(大连美仑生物科技有限公司)ꎮ ６０.２ ｍｉｎꎬ１２.０ ｍｇ)ꎮ Ｃ６ 经反相 Ｃ 柱色谱分离ꎬ用
１８
甲醇－水(３０％ ~ １００％) 划分为 １０ 个组分( Ｃ６￣１－
２ 研究方法 Ｃ６￣１０)ꎻＣ６￣７ 经 硅 胶 柱 色 谱 ( 二 氯 甲 烷 － 甲 醇ꎬ
９８ ∶ ２→８８ ∶ １２) 洗脱得 １３ 个组分( Ｃ６￣７￣１－Ｃ６￣７￣
２.１ 提取和分离 １３)ꎻＣ６￣７￣４ 经 反 相 Ｃ 柱 色 谱 分 离ꎬ 用 甲 醇 － 水
１８
干燥东京银背藤粗粉 １５.０ ｋｇꎬ用 ８０％乙醇浸 (５０％ ~ ７０％) 划分为 ６ 个组分( Ｃ６￣７￣４￣１－Ｃ６￣７￣４￣
提 ３ 次并减压浓缩得总浸膏(１ １２３.０ ｇ) 后用水分 ６)ꎻＣ６￣７￣４￣１ 经半制备液相色谱( 甲醇－０.１％甲酸
散ꎬ依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行萃 水ꎬ４０ ∶ ６０ꎬＶ / Ｖꎻｖ ＝ ２ ｍＬｍｉｎ ) 洗脱得化合物 ７
￣１
取得到 ５ 个萃取部位(Ａ－Ｅ)ꎮ (ｔ ＝ ７６.５ ｍｉｎꎬ１５.１ ｍｇ)ꎻＣ６￣７￣４￣２ 经半制备液相
Ｒ
组分 Ａ(１０８.０ ｇ)经硅胶柱色谱(石油醚－乙酸 色谱(甲醇－０.１％甲酸水ꎬ４５ ∶ ５５ꎬＶ / Ｖꎻｖ ＝ ２ ｍＬ
￣１
乙酯 ９ ∶ １ →３ ∶ ７ꎬ Ｖ / Ｖ) 洗 脱 得 ８ 个 组 分 ( Ａ１ － ｍｉｎ )洗脱得化合物 ９( ｔ ＝ ５３.７ ｍｉｎꎬ２０.２ ｍｇ)ꎻ
Ｒ
Ａ８)ꎮ Ａ４ 经 反 相 Ｃ 柱 色 谱 分 离ꎬ 用 甲 醇 － 水 Ｃ６￣７￣４￣４ 经半制备液相色谱( 甲醇－０.１％甲酸水ꎬ
１８
￣１
(３０％ ~ １００％) 划分为 １１ 个组分( Ａ４￣１－Ａ４￣１１)ꎻ ４３ ∶ ５７ꎬ Ｖ / Ｖꎻ ｖ ＝ ２ ｍＬ ｍｉｎ ) 洗 脱 得 化 合 物 ８
Ａ４￣８ 经半制备液相色谱( 乙腈－水ꎬ６３ ∶ ３７ꎬＶ / Ｖꎻ (ｔ ＝ ９５.５ ｍｉｎꎬ１８.２ ｍｇ)ꎻＣ６￣７￣４￣５ 经半制备液相
Ｒ
￣１
ｖ ＝ ３ ｍＬｍｉｎ ) 洗脱得化合物 ４( ｔ ＝ ２３.２ ｍｉｎꎬ 色谱(乙腈－０.１％甲酸水ꎬ３０ ∶ ７０ꎬＶ / Ｖꎻｖ ＝ ２ ｍＬ
Ｒ
２.６ ｍｇ)ꎮ Ａ５ 经反相 Ｃ 柱色谱分离ꎬ用甲醇 －水 ｍｉｎ )洗脱得化合物 １０(ｔ ＝ ４４.５ ｍｉｎꎬ２.０ ｍｇ)ꎮ
￣１
１８ Ｒ
(３０％ ~ １００％) 划分为 １１ 个组分( Ａ５￣１－Ａ５￣１１)ꎻ １２ 个化合物的结构如图 １ 所示ꎮ
Ａ５￣６ 经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ 柱分离和半制备液相色谱 ２.２ 细胞毒活性评价
(甲醇 － ０. １％ 甲 酸 水ꎬ ６０ ∶ ４０ꎬ Ｖ / Ｖꎻ ｖ ＝ ３ ｍＬ 细 胞 毒 活 性 测 试 采 用 ＭＴＳ [ ３￣( ４ꎬ ５￣
ｍｉｎ )洗脱得化合物 ５( ｔ ＝ ２５.９ ｍｉｎꎬ３.０ ｍｇ)、化 ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ￣２￣ｙｌ)￣５ ( ３￣ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ)￣２￣
￣１
Ｒ
合物 ３( ｔ ＝ ３１.８ ｍｉｎꎬ７.１ ｍｇ)ꎻＡ５￣８ 经硅胶柱色 (４￣ｓｕｌｆｏｐｈｅｎｙ)￣２Ｈ￣ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ 是 一 种 全 新 的 ＭＴＴ
Ｒ
谱(石油醚－乙酸乙酯 ９ ∶ １→３ ∶ ７) 梯度洗脱得到 类似物]法筛选(程子洋等ꎬ２０２１)ꎮ 选取对数生长
３
的化合物ꎬ划分为 １１ 个组分( Ａ５￣８￣１ － Ａ５￣８￣１１)ꎻ 期的细胞ꎬ以每孔 ３ × １０ 个细胞接种于 ９６ 孔板中
Ａ５￣８￣１０ 经半制 备 液 相 色 谱 ( 甲 醇 － 水ꎬ６５ ∶ ３５ꎬ 培养ꎬ置于 ３７ ℃ 、５％ ＣＯ 的恒温培养箱孵育 ４８ ｈꎬ
２
￣１ 取出ꎬ设阳性对照药组( 顺铂和紫杉醇)、实验组
Ｖ / Ｖꎻｖ ＝ ３ ｍＬｍｉｎ ) 洗脱得化合物 ２( ｔ ＝ ２０.７
Ｒ
ｍｉｎꎬ２７.８ ｍｇ)ꎻＡ５￣１０ 经半制备液相色谱( 甲醇 － (单体化合物)ꎬ每孔加入 ２００ μＬ 药物处理ꎬ单体
水ꎬ４５ ∶ ５５ꎬＶ / Ｖꎻｖ ＝ ３ ｍＬｍｉｎ ) 洗脱得化合物 １ 化合物以 ４０、８、１.６、０.３２、０.０６４ μｍｏｌＬ 的浓度
￣１
￣１
(ｔ ＝ ３４.０ ｍｉｎꎬ３.６ ｍｇ)ꎮ 处理细胞 ４８ ｈꎬ弃孔内培养液ꎬ每孔加 ２０ μＬ ＭＴＳ
Ｒ
组分 Ｂ(８６.５ ｇ) 经硅胶柱色谱( 石油醚－乙酸 溶液和 １００ μＬ 培养液ꎬ设置 ３ 个复孔ꎬ 继续孵育
