Page 42 - 《广西植物》2025年第4期
P. 42

６ ５ ６                                  广  西  植  物                                         ４５ 卷
            ０.００９)ꎬ而种群间存在高水平的遗传分化( ｃｐＤＮＡ                       金花茶(Ｃ. ｐｉｎｇｇｕｏｅｎｓｉｓ ｖａｒ. ｔｅｒｍｉｎａｌｉｓ)设计的 ２１ 对
            的 Ｇ ＝ ０.９７６ꎬＮ ＝ ０.９７４ꎻＰＡＬ 基因的 Ｇ ＝ ０.２５３ꎬ           ＳＳＲ 引物中共筛选了 １４ 对扩增条带清晰、多态性高
                ＳＴ         ＳＴ                    ＳＴ
            Ｎ ＝ ０.４１４) 和有限的基因流ꎮ 综上认为ꎬ淡黄金                       的引物用于本研究(表 ２)ꎮ ＰＣＲ 反应体系和反应程
              ＳＴ
            花茶的群体研究仍存在研究群体数量较少或仅依                              序参照 Ｌｕ 等(２０１４) 的方法进行ꎮ 扩增产物用 ６％
            靠少数片段提供遗传信息位点等不足ꎬ需要进一                              的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离ꎬ用银染显色ꎮ
            步增加群体(个体)数量并应用基因组覆盖度更广                             １.３ 数据分析

            的分子标记深入研究其遗传多样性和遗传结构ꎮ                                  使 用 Ｇｅｎｅｐｏｐ ｖ４. ２. ２ 在 线 软 件 ( ｈｔｔｐ: / /
                 重复序列微卫星是目前应用比较广的分子标                           ｇｅｎｅｐｏｐ.ｃｕｒｔｉｎ. ｅｄｕ. ａｕ / ) 进 行 哈 迪 － 温 伯 格 平 衡
            记技术ꎬ由 １ ~ ６ 个碱基为重复单位ꎬ组成长达数十                        (Ｈａｒｄｙ￣Ｗｅｉｎｂｅｒｇ ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍꎬＨＷＥ) 检 验ꎬ并 对 所
            个核苷酸的串联序列ꎮ 微卫星序列广泛分布于植                             得 Ｐ 值 进 行 Ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ 校 正 ( Ｒｉｃｅꎬ

            物基因组中ꎬ具有多态性高、重复性好、覆盖度广、                            １９８９)ꎮ 为检验各位点是否独立遗传ꎬ用该软件对
            低成本和高效率等优点(孙亚莉等ꎬ２０２０)ꎬ被广泛                          各个种 群 位 点 间 进 行 基 因 连 锁 不 平 衡 ( ｌｉｎｋａｇｅ
            用于植物群体分析( 罗群凤等ꎬ２０２２ꎻ王芝懿等ꎬ                          ｄｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍꎬ ＬＤ ) 分 析ꎬ 马 尔 可 夫 链 ( Ｍａｒｋｏｖ
            ２０２３)、品种鉴定(刘海燕等ꎬ２０２３)、指纹图谱构建                       ｃｈａｉｎ ) 参 数 为 １０ ０００ ｄｅｍｅｍｏｒｉｓａｔｉｏｎꎬ ５ ０００
            (王清明等ꎬ２０１６ꎻ雷刚等ꎬ２０２４) 以及性状关联位                       ｂａｔｃｈｅｓꎬ５ ０００ ｉｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｐｅｒ ｂａｔｃｈꎮ
            点分析( 刘丽等ꎬ２０２４) 等研究ꎮ 本研究基于微卫                            用 ＧｅｎＡｌＥｘ ｖ６. ５ 软 件 ( ｈｔｔｐ: / / ｂｉｏｌｏｇｙ￣ａｓｓｅｔｓ.
            星标记对淡黄金花茶目前已知分布区的代表种群                              ａｎｕ.ｅｄｕ.ａｕ / ＧｅｎＡｌＥｘ / Ｗｅｌｃｏｍｅ.ｈｔｍｌ) 计算淡黄金花
            进行进一步的遗传多样性和遗传结构分析ꎬ旨在                              茶的等位基因数( ａｌｌｅｌｅ ｎｕｍｂｅｒꎬＮ )、有效等位基
                                                                                              ａ
            为淡黄金花茶的资源保护提供理论依据ꎮ 本研究                             因 数 ( ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｌｌｅｌｅ ｎｕｍｂｅｒꎬ Ｎ )、 观 测 杂 合 度
                                                                                            ｅ
            拟探讨以下问题:(１)淡黄金花茶的遗传多样性水                            (ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙꎬＨ )、期望杂合度(ｅｘｐｅｃｔｅｄ
                                                                                      ｏ
            平如何ꎻ(２)淡黄金花茶的遗传结构ꎮ                                 ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙꎬ Ｈ ) 和 遗 传 分 化 系 数 ( ｇｅｎｅｔｉｃ
                                                                             ｅ
                                                               ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔꎬＦ )ꎬ并进行分子方差分
                                                                                      ＳＴ
            １  材料与方法                                           析(ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｖａｒｉａｎｃｅꎬＡＭＯＶＡ)ꎮ 基于
                                                               Ｆ 计 算 种 群 间 基 因 流 Ｎ [ Ｎ ＝ ( １ / Ｆ － １) / ４]
                                                                ＳＴ                     ｍ   ｍ       ＳＴ
            １.１ 实验材料                                           (Ｗｒｉｇｈｔꎬ１９３１)ꎮ 利用该软件的 Ｍａｎｔｅｌ 检验分析
                 根 据 Ｆｌｏｒａ ｏｆ Ｃｈｉｎａ ( Ｍｉｎ ＆ Ｂａｒｔｈｏｌｏｍｅｗꎬ       遗传分化系数(用 Ｆ 表示)与地理距离的相关性ꎮ
                                                                                 ＳＴ
            ２００７)ꎬ淡黄 金 花 茶 包 括 淡 黄 金 花 茶 原 变 种 ( Ｃ.            用 ＰＩＣ＿ＣＡＬＡ( ｈｔｔｐｓ: / / ｇｉｔｈｕｂ. ｃｏｍ / ｌｕａｎｓｈｅｎｇ / ＰＩＣ＿
            ｆｌａｖｉｄａ ｖａｒ. ｆｌａｖｉｄａ ) 和 直 脉 金 花 茶 ( Ｃ. ｆｌａｖｉｄａ    ＣＡＬＣ) 计 算 每 个 位 点 的 多 态 性 信 息 含 量
            ｖａｒ. ｐａｔｅｎｓ)２ 个变种ꎮ 原变种分布于广西崇左市                     (ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｃｏｎｔｅｎｔꎬＰＩＣ)ꎮ
            龙州县、宁明县和凭祥市ꎬ而直脉金花茶分布于广                                 使用 ＢＯＴＴＬＥＮＥＣＫ ｖ１.２.０２ 软件( Ｐｉｒｙ ｅｔ ａｌ.ꎬ
            西扶绥 县 和 武 鸣 县 ( Ｍｉｎ ＆ Ｂａｒｔｈｏｌｏｍｅｗꎬ２００７)ꎮ           １９９９) 分 别 用 逐 步 突 变 模 型 ( ｓｔｅｐ ｗｉｓｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ
            直脉金花茶在地理分布、形态和遗传上与淡黄金                              ｍｏｄｅｌꎬＳＭＭ) 和双向突变模型( ｔｗｏ￣ｐｈａｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ
            花茶原 变 种 具 有 明 显 差 异ꎬ 被 认 为 是 独 立 的 种               ｍｕｔａｔｉｏｎꎬＴＰＭ)中的 Ｗｉｌｃｏｘｏｎ 标记秩检验来推断
            (Ｗｅｉ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２３ａ)ꎮ 因此ꎬ本研究仅采集淡黄金                  种群近期是否经历过瓶颈效应ꎮ 其中ꎬＴＰＭ 检验
            花茶原变种的种群ꎬ对其 １２ 个自然种群进行群体                           是基 于 ９５％ ＳＭＭ 和 ５％ 无 限 等 位 基 因 模 型
            采样(表 １)ꎬ个体间的间距至少 １０ ｍꎬ每个种群采                        (ｉｎｆｉｎｉｔｅ ａｌｌｅｌｅ ｍｏｄｅｌꎬＩＡＭ)的检验ꎮ 每个突变模型
            集 ２７ ~ ４２ 个个体ꎬ共 ４１６ 个个体ꎬ代表淡黄金花茶                    运行 ５ ０００ 次重复ꎮ
            目前已知分布区ꎮ 采集的新鲜叶片放入含有变色                                 使用 ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ ｖ２.３.４ 软件(Ｅｖａｎｎｏ ｅｔ ａｌ.ꎬ

            硅胶的密封袋中干燥储存ꎮ                                       ２００５)分析种群的遗传结构ꎮ ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ 软件运行
            １.２ 总 ＤＮＡ 的提取和 ＳＳＲ 分型                              的相关参数为 １０ ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ｂｕｒｎ ｉｎ ｐｅｒｉｏｄꎬ１０ ｎｕｍｂｅｒ
                                                                                                     ６
                                                                             ５
                 采用 ＣＴＡＢ 法(Ｄｏｙｌｅ ＆ Ｄｏｙｌｅꎬ１９８７) 提取淡黄            ｏｆ ＭＣＭＣ ｒｅｐｓ ａｆｔｅｒ ｂｕｒｎ ｉｎꎬＫ 值为 １~１３ꎬ每个 Ｋ 值独
            金花茶的总 ＤＮＡꎮ 从 Ｌｉｕｆｕ 等(２０１４)针对淡黄金花                   立重复运行 ２０ 次ꎮ 运行结果用在线软件 Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ
            茶设计的 ３８ 对 ＳＳＲ 引物和 Ｌｕ 等(２０１４) 针对顶生                  Ｓｅｌｅｃｔｏｒ(ｈｔｔｐｓ:/ / ｌｍｍｅ.ａｃ.ｃｎ/ ＳｔｒｕｃｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔｏｒ/ )计算最
   37   38   39   40   41   42   43   44   45   46   47