Page 141 - 《广西植物》2025年第7期

７ 期 刘文珍等: 地钱 ＭｐＰＰ２Ａ￣Ａ 基因克隆及基因敲除突变体构建 １ ３ ３ ３

图 ９ ＭｐＰＰ２Ａ￣Ａ 基因敲除载体的测序结果
Ｆｉｇ. ９ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ＭｐＰＰ２Ａ￣Ａ ｇｅｎｅ ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｖｅｃｔｏｒ

Ａ. 筛选培养基上长出的转化子ꎻ Ｂ. 转化子的 ＰＣＲ 鉴定结果(Ｍ. ＤＬ５０００ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒꎻ １－１３. １３ 个转化子鉴定结果)ꎻ Ｃ. 转化子
靶位点序列比对峰图ꎮ
Ａ. Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｎｔｓ ｇｒｏｗｎ ｏｎ ｔｈｅ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｍｅｄｉｕｍꎻ Ｂ. ＰＣＲ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｎｔｓ ( Ｍ. ＤＬ５０００ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒꎻ １ － １３.
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ １３ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｎｔｓ)ꎻ Ｃ. Ｐｅａｋ ｍａｐ ｏｆ ｃｏｎｖｅｒｔｅｒ ｔａｒｇｅｔ ｓｉｔｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ.
图 １０ ＭｐＰＰ２Ａ￣Ａ 转化子的获得及鉴定
Ｆｉｇ. １０ Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＭｐＰＰ２Ａ￣Ａ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｎｔ

也为后续在地钱中的实验提供了方向ꎮ 为进一步探索地钱的生长发育机制和适应环境的
综上所述ꎬ本研究从地钱基因组中筛选出编 策略提供了新思路ꎮ
码 ＰＰ２Ａ￣Ａ 亚基的唯一基因ꎬ成功克隆了 ＭｐＰＰ２Ａ￣
Ａ 基因ꎬ并对其理化性质和二级、三级结构进行了
预测分析ꎮ 系统进化树分析显示ꎬＭｐＰＰ２Ａ￣Ａ 基因 参考文献:
与拟南芥 ＲＣＮ１ 聚为一类ꎮ 通过荧光定量 ＰＣＲ 分
ＢＬＡＫＥＳＬＥＥ ＪＪꎬ ＺＨＯＵ ＨＷꎬ ＨＥＡＴＨ ＪＴꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００８.
析了 ＭｐＰＰ２Ａ￣Ａ 基因在地钱不同组织部位的表达
Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ＲＣＮ１￣ｍｅｄｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ２Ａ
情况及对生长发育的影响ꎮ 此外ꎬＭｐＰＰ２Ａ￣Ａ 基因 ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｍｅｒｉｓｔｅｍ ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｉｎ
缺失导致地钱胞芽面积和形态发生显著变化ꎬ暗 ｒｏｏｔｓ [Ｊ]. Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙꎬ １４６(２): ５３９.
示该基因参与调控地钱胞芽生长、顶端缺口形成 ＢＯＷＭＡＮ ＪＬꎬ ＡＲＴＥＡＧＡ￣ＶＡＺＱＵＥＺ Ｍꎬ ＢＥＲＧＥＲ Ｆꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ
２０２２. Ｔｈｅ ｒｅｎａｉｓｓａｎｃｅ ａｎｄ ｅｎｌｉｇｈｔｅｎｍｅｎｔ ｏｆ Ｍａｒｃｈａｎｔｉａ ａｓ ａ
及对称性维持ꎮ 本研究结果为进一步探索 ＰＰ２Ａ￣Ａ
ｍｏｄｅｌ ｓｙｓｔｅｍ [Ｊ]. Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌꎬ ３４(１０): ３５１２－３５４２.
调控植物生长的分子机制奠定了基础ꎬ并为揭示 ＢＯＷＭＡＮ ＪＬꎬ ＫＯＨＣＨＩ Ｔꎬ ＹＡＭＡＴＯ ＫＴꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１７.
ＰＰ２Ａ￣Ａ 亚基在植物中的功能提供了重要方向ꎬ也 Ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｌａｎｄ ｐｌａｎｔ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｇａｒｎｅｒｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ