Page 150 - 《广西植物》2025年第7期

１ ３ ４ ２ 广 西 植 物 ４５ 卷
析ꎬ发现其中有大量的与植物生长发育相关的顺
式元件ꎬ如与分生组织表达相关的调控元件、参与
胚乳发育的表达元件、参与栅栏叶肉细胞分化的
元件等( 王惠冉等ꎬ２０２４ａ)ꎬ另外还存在多个激素
相关的调控元件ꎬ如茉莉酸甲酯响应元件、水杨酸
响应元件、脱落酸响应元件等ꎬ在启动子上还发现
有与生物和非生物胁迫相关的顺式作用元件ꎬ说
明该基因家族可能还参与冬枣干旱胁迫和病害的

响应等ꎮ
为了研究 ＺｊＲＷＤ４０ 对冬枣果实发育及 ＤＮＡ
甲基化 的 作 用ꎬ 本 研 究 选 取 了 参 与 脱 落 酸 反 应
Ｍ. ＤＬ５０００ Ｍａｒｋｅｒꎻ １. Ｂａｉｔ１ 质粒线性化ꎻ ２. Ｂａｉｔ２ 质粒线 (ＡＢＲＥ) 、参与干旱诱导 (ＭＢＳ) 和参与茉莉酸甲
性化ꎻ ３. Ｂａｉｔ３ 质粒线性化ꎻ ４. 对照质粒ꎮ 酯 (ＴＧＡＣＧ￣ｍｏｔｉｆ) 的 ３ 个顺式元件为诱饵序列筛
Ｍ. ＤＬ５０００ Ｍａｒｋｅｒꎻ １. Ｌｉｎｅａｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂａｉｔ１ ｐｌａｓｍｉｄꎻ ２.
选上游转录因子ꎮ 将 ３ 条 Ｂａｉｔ 序列构建到 ｐＡｂＡｉ
Ｌｉｎｅａｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂａｉｔ２ ｐｌａｓｍｉｄꎻ ３. Ｌｉｎｅａｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂａｉｔ３ ｐｌａｓｍｉｄꎻ
４. Ｃｏｎｔｒｏｌ ｐｌａｓｍｉｄ. 质粒ꎬ导入酵母菌进行自激活检测ꎬ发现 Ｂａｉｔ１ 菌
株不能用于筛选ꎬ原因可能是细胞内某些转录因
图 ３ 诱饵质粒载体构建及线性化
子非特异性结合 ＡＢＲＥ 元件ꎬ或在特定条件下过
Ｆｉｇ. ３ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｌｉｎｅａｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｉｔ ｐｌａｓｍｉｄ ｖｅｃｔｏｒ
量表达ꎬ增加结合机会从而引发激活ꎮ 将 ｃＤＮＡ 文
库质粒分别转入 Ｂａｉｔ２ 菌株和 Ｂａｉｔ３ 菌株中进行筛
比对ꎬ结果如表 ２ 所示ꎮ 候选互作蛋白包括参与
选ꎬ将阳性克隆测序结果进行 ＢＬＡＳＴｎ 比对ꎬ比对
植物生长发育的转录因子、参与信号转导的转录
结果表明有 ５ 条序列可能与植物抗逆性相关ꎮ
因子及参与抗逆防御的转录因子ꎬ结果表明这些
进一步分析这 ５ 条序列:(１) 驱动蛋白轻链相
转录因子可能通过与 ＭＢＳ 元件和 ＴＧＡＣＧ￣ｍｏｔｉｆ 元
关蛋白 ３(Ｋｉｎｅｓｉｎ Ｌｉｇｈｔ Ｃｈａｉｎ￣Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ ３ꎬ
件互作来调控 ＲＷＤ４０ 基因的表达ꎬ进而调控胁迫
ＫＬＣＡＰ３) 参与 花 粉 管 生 长ꎬ 调 节 防 御 反 应 的 频
条件下冬枣 ＤＮＡ 甲基化水平ꎮ
率、速率或程度ꎮ 在棉花中ꎬＧｈＫＬＣＲ１ 基因编码 １
个驱动 蛋 白 轻 链 相 关 蛋 白ꎬ 并 通 过 实 验 证 明 了
３ 讨论与结论
ＧｈＫＬＣＲ１ 参与逆境胁迫响应(李婕ꎬ２０１８)ꎮ 在干旱
胁迫下ꎬＫＬＣＡＰ３ 可能参与调节与干旱响应相关的
近年来ꎬ如何提高冬枣果实的口感和质量已
转录因子的活性或定位ꎬ从而调控下游抗逆基因的
成为冬枣生产中的突出问题ꎮ 枣果口味和品质的
转录水平ꎬ使植物合成更多的抗逆蛋白和代谢产
形成主要与水分、光照和温度等环境因素有关ꎬ此
物ꎬ提高其抗旱能力ꎮ 因此ꎬ当冬枣面临环境压力ꎬ
外ꎬ枣果风味品质的形成还与自身相关基因的表 ＫＬＣＡＰ３ 蛋白可能会参与调节细胞内物质的重新分
达有关ꎬ这些基因受遗传和表观遗传的调控ꎮ 就 配ꎬ帮助冬枣适应不良环境ꎮ (２)磷脂酰肌醇:神经
分子功能和生物学过程而言ꎬＷＤ４０ 蛋白通过分子
酰胺肌醇磷酸转移酶 ２ 类似物(Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ:
相互作用广泛参与非生物胁迫反应、形态发育和 ｃｅｒａｍｉｄｅ ｉｎｏｓｉｔｏｌ ｐｈｏｓｐｈｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ２￣ｌｉｋｅꎬＰＩＴＰＮＣ２Ｌ)
植物次生代谢的调节等(赵艳等ꎬ２０２２)ꎮ 可能在调节与防御相关的植物程序性细胞死亡中
杨煜琛等(２０２４) 通过分析珍珠粟的 ＰｇＷＤ４０ 发挥重要作用ꎬ磷脂信号传导参与调节植物生长
基因家族启动子ꎬ发现 ＰｇＷＤ４０ 基因与植物的生 发育、信 号 转 导、 细 胞 对 环 境 刺 激 等 ( 宋 洪 星ꎬ
长发育相关ꎬＰｇＷＤ４０ 基因家族成员含有不同激素 ２０２２)ꎬ因此我们推测在冬枣生长发育过程中ꎬ会
胁迫响应的顺式作用元件ꎬ表明该基因家族可能 面临水分亏缺、细胞膜损伤等问题ꎮ 该蛋白所参
通过依赖不同激素的信号通路来调控和响应非生 与的鞘脂代谢途径可能会影响植物细胞的渗透调
物 胁 迫ꎮ 因 此ꎬ 本 研 究 利 用 Ｐｌａｎｔ ＣＡＲＥ 对 节和膜的稳定性ꎬ有助于植物在干旱条件下维持
ＺｊＲＷＤ４０ 基因家族启动子顺式作用元件预测分 细胞的膨压和正常的生理功能ꎬ 从而提高植物的