Page 148 - 《广西植物》2025年第7期

１ ３ ４ ０ 广 西 植 物 ４５ 卷

Ａ－Ｃ. 读码框 １－３ꎻ Ｍ. ＤＬ５０００ Ｍａｒｋｅｒꎻ １－１６. 每个读码框挑取 １６ 个菌落ꎮ
Ａ－Ｃ. Ｆｒａｍｅｓ ｏｆ ｒｅａｄｉｎｇ １－３ꎻ Ｍ. ＤＬ５０００ Ｍａｒｋｅｒꎻ １－１６. Ｓｉｘｔｅｅｎ ｃｏｌｏｎｉｅｓ ｐｅｒ ｆｒａｍｅ ｏｆ ｒｅａｄｉｎｇ.
图 ２ 插入 ｃＤＮＡ 片段检测
Ｆｉｇ. ２ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｓｅｒｔｅｄ ｃＤＮＡ ｓｅｇｍｅｎｔｓ

质量良好ꎮ 将 ３ 种读码框初级文库平板上生长的 别构建于 ｐＡｂＡｉ 质粒 Ｓａｃ Ｉ / Ｓａｌ Ｉ 位点间ꎬ电泳结果
菌落混合ꎬ转化感受态细胞并提取质粒ꎬ结果显示 显示 ３ 条 Ｂａｉｔ 序列质粒线性化大小均大于５ ０００
文库质粒大小符合预设 ２ ５００ ｂｐ 至 ５ ０００ ｂｐ 之 ｂｐꎬ表明 ３ 条 Ｂａｉｔ 序列已成功构建到 ｐＡｂＡｉ 质粒
间ꎬ可用于后续酵母单杂交筛选实验ꎮ 中(图 ３)ꎬ将构建好的质粒转入 Ｙ１ＨＧｏｌｄ 菌株ꎬ涂
２.３ 冬枣 ＺｊＲＷＤ４０ 基因家族顺式作用元件预测 布 ＳＤ / ￣Ｕｒａ 平 板ꎬ 可 以 得 到 菌 株 Ｙ１ＨＧｏｌｄ￣Ｂａｉｔ１、
ＺｊＲＷＤ４０ 基因家族启动子顺式作用元件预测 Ｙ１ＨＧｏｌｄ￣Ｂａｉｔ２ 和 Ｙ１ＨＧｏｌｄ￣Ｂａｉｔ３ꎮ
显示ꎬ其主要包括 ＣＡＡＴ￣ｂｏｘ、ＴＡＴＡ￣ｂｏｘ、光响应元 ３ 个 菌 株 的 最 低 ＡｂＡ 抗 性 检 测 结 果 表 明:
件、激素响应元件、生长发育响应元件及与干旱胁 Ｂａｉｔ１ 菌株在不同浓度 ＡｂＡ 的 ＳＤ / ￣Ｕｒａ 平板上均
迫相关的应激防御响应元件等( 表 １)ꎬ本研究选 有大量菌落生长ꎬ说明 Ｂａｉｔ１ 自激活现象严重ꎬ背
取了 ３ 个顺式作用元件 ＡＢＲＥ( ｔｇＡＣＧＴＧｇｃꎬ脱落 景无法抑制ꎬ不能用于筛选( 图 ４:Ａ)ꎻＢａｉｔ２ 菌株

酸响应元件)、ＭＢＳ( ａｇＣＡＡＣＴＧｃａꎬ干旱应答元件) 和 Ｂａｉｔ３ 菌株在不同浓度 ＡｂＡ 的 ＳＤ / ￣Ｕｒａ 平板上
和 ＴＧＡＣＧ￣ｍｏｔｉｆ( ａｔＴＧＡＣＧａａꎬ茉 莉 酸 甲 酯 响 应 元 菌落数不同ꎬＢａｉｔ２ 菌株在ＳＤ / ￣Ｕｒａ平板和 ＳＤ / ￣Ｕｒａ
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件)作为酵母单杂交的诱饵序列进行筛选ꎮ ｗｉｔｈ ＡｂＡ (１００ ｎｇｍＬ ) 上有大量菌落生长且长
２.４ Ｂａｉｔ 菌株构建及 ＡｂＡ 抗性自激活检测 菌数均大于 ２ ０００ꎬＳＤ / ￣Ｕｒａ ｗｉｔｈ ＡｂＡ ( ２００ ｎｇ
将选定的 ３ 条 Ｂａｉｔ 序列进行 ３ 次串联重复ꎬ分 ｍＬ ) 平板上有 １ 个菌落生长(图 ４: Ｂ)ꎬ Ｂａｉｔ３ 菌
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