Page 149 - 《广西植物》2025年第7期
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７ 期 王嘉琪等: 冬枣 ｃＤＮＡ 三框表达文库构建及 ＺｊＲＷＤ４０ 基因上游调控因子的筛选 １ ３ ４ １
表 １ ＺｊＲＷＤ４０ 基因顺式作用元件分析
Ｔａｂｌｅ １ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｃｉｓ￣ａｃｔｉｎｇ ｅｌｅｍｅｎｔｓ ｏｆ ＺｊＲＷＤ４０ ｇｅｎｅ
元件名称 元件序列 功能 备注
Ｅｌｅｍｅｎｔ ｎａｍｅ Ｅｌｅｍｅｎｔ ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ Ｒｅｍａｒｋ
参与光响应的顺式作用元件 光响应元件
ＡＣＥ ＣＴＡＡＣＧＴＡＴＴ
Ｃｉｓ￣ａｃｔｉｎｇ ｅｌｅｍｅｎｔｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｌｉｇｈｔ ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｌｉｇｈｔ￣ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｅｌｅｍｅｎｔ
参与光响应的保守 ＤＮＡ 模块的一部分
ＡＴＣＴ￣ｍｏｔｉｆ ＡＡＴＣＴＡＡＴＣＣ
Ａ ｐａｒｔ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ＤＮＡ ｍｏｄｕｌｅ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｌｉｇｈｔ ｒｅｓｐｏｎｓｅ
光响应元件的一部分
ＴＣＴ￣ｍｏｔｉｆ ＴＣＴＧＴＴＧ
Ａ ｐａｒｔ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｇｈｔ￣ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｅｌｅｍｅｎｔ
光响应元件
ＧＴ１￣ｍｏｔｉｆ ＣＣＴＴＴＴＧ
Ｌｉｇｈｔ￣ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｅｌｅｍｅｎｔ
光响应模块的一部分
ＡＥ￣ｂｏｘ ＴＧＡＣＧ
Ｐａｒｔ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｇｈｔ￣ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｍｏｄｕｌｅ
参与光响应的顺式调控元件
Ｇ￣Ｂｏｘ ＣＡＣＧＴＣ
Ｃｉｓ￣ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｅｌｅｍｅｎｔｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｌｉｇｈｔ ｒｅｓｐｏｎｓｅ
参与脱落酸响应的顺式作用元件 激素响应元件
ＡＢＲＥ ＡＣＧＴＧ
Ｃｉｓ￣ａｃｔｉｎｇ ｅｌｅｍｅｎｔｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ａｂｓｃｉｓｉｃ ａｃｉｄ ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｈｏｒｍｏｎｅ￣ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｅｌｅｍｅｎｔ
参与茉莉酸甲酯响应的顺式作用调节元件
ＴＧＡＣＧ￣ｍｏｔｉｆ ＴＧＡＣＧ Ｃｉｓ￣ａｃｔｉｎｇ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｅｌｅｍｅｎｔｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｍｅｔｈｙｌ
ｊａｓｍｏｎａｔｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ
生长素响应元件
ＴＧＡ￣ｅｌｅｍｅｎｔ ＡＡＣＧＡＣ
Ａｕｘｉｎ￣ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｅｌｅｍｅｎｔ
生长发育响应元件
厌氧诱导所必需的顺式调控元件
ＡＲＥ ＴＧＴＣＴＣＡＡＴＡＡＧ Ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ
Ｔｈｅ ｎｅｃｅｓｓａｒｙ ｃｉｓ￣ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｅｌｅｍｅｎｔｓ ｆｏｒ ａｎａｅｒｏｂｉｃ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｅｌｅｍｅｎｔ
玉米醇溶蛋白代谢调控中的顺式调控元件
Ｏ２￣ｓｉｔｅ ＧＧＴＣＣＡＴ Ｃｉｓ￣ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｅｌｅｍｅｎｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｚｅｉｎ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ
ｉｎ ｍａｉｚｅ
ＭＹＢ 结合位点参与干旱诱导 应激防御响应元件
ＭＢＳ ＣＡＡＣＴＧ
ＭＹＢ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅｓ ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅ ｉｎ ｄｒｏｕｇｈｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ Ｓｔｒｅｓｓ ｄｅｆｅｎｓｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｅｌｅｍｅｎｔ
启动子序列均有的基本元件
启动子和增强子区的常见顺式作用元件 Ｔｈｅ ｂａｓｉｃ ｅｌｅｍｅｎｔｓ ｔｈａｔ ａｒｅ
ＣＡＡＴ￣ｂｏｘ ＡＡＣＣＴＡＡ
Ｃｏｍｍｏｎ ｃｉｓ￣ａｃｔｉｎｇ ｅｌｅｍｅｎｔｓ ｉｎ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ａｎｄ ｅｎｈａｎｃｅｒ ｒｅｇｉｏｎｓ ｐｒｅｓｅｎｔ ｉｎ ａｌｌ ｐｒｏｍｏｔｅｒ
ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
启动子核心元件
ＴＡＴＡ￣ｂｏｘ ＡＣＧＴＧ
Ｃｏｒｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｅｌｅｍｅｎｔ ａｒｏｕｎｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｓｔａｒｔ
株在 ＳＤ / ￣Ｕｒａ 平板上有大量菌落生长且长菌数大 当于 ０.１ ｍＬ) ×１５(总菌量 １５ ｍＬ) ＝ ２７０ 万]ꎬＢａｉｔ３
于 ２ ０００ꎬ在 ＳＤ / ￣Ｕｒａ ｗｉｔｈ ＡｂＡ (１００ ｎｇｍＬ ) 上 菌株筛选覆盖克隆总量为 ２４０ 万 [１６０ × １００(稀释
￣１
有 ３ 个菌落生长(图 ４:Ｃ)ꎬ说明 Ｂａｉｔ２ 菌株和 Ｂａｉｔ３ 倍数)× １０(１００ μＬ 涂菌相当于 ０.１ ｍＬ)×１５( 总菌量
菌株 均 未 发 生 自 激 活 现 象ꎬ 同 时 选 择 ＡｂＡ ３００ １５ ｍＬ)＝ ２４０ 万]ꎮ 分别挑取 ２ 个筛选平板中正常
￣１
ｎｇｍＬ 作为 Ｂａｉｔ２ 菌株和 Ｂａｉｔ３ 菌株的筛选浓度ꎮ 生长的阳性菌落转移至新的 ＳＤ / ￣Ｌｅｕ / ＡｂＡ ( ３００
２.５ 酵母单杂交筛选上游互作蛋白 ｎｇｍＬ ) 平板进一步培养确认( 图 ６)ꎮ 将平板
￣１
取 ２０ μＬ 文库质粒分别转化到 Ｙ１ＨＧｏｌｄ￣Ｂａｉｔ２ 中仍正常生长的 ４８ 个阳性克隆菌落做菌液 ＰＣＲ
和 Ｙ１ＨＧｏｌｄ￣Ｂａｉｔ３ 酵母菌中各获得 １５ ｍＬ 悬浮菌 检测ꎬ结果显示 Ｂａｉｔ２ 阳性克隆基因大小为 ５００ ~ ２
液ꎮ 分别取少量悬浮液进行 １ / １０、１ / １００ 稀释ꎬ涂布 ０００ ｂｐꎬＢａｉｔ３ 阳性克隆基因大小为 ５００ ~ ３ ０００ ｂｐ
监控平板 ＳＤ/ ￣Ｌｅｕꎬ计算筛选克隆总量(图 ５)ꎬ计算 (图 ７)ꎬ切胶回收特异条带进行测序ꎮ
得稀释 １ / １００ 后 Ｂａｉｔ２ 菌株筛选覆盖克隆总量为 ２.６ 测序结果 ＢＬＡＳＴ 比对分析
２７０ 万 [１８０ × １００(稀释倍数)× １０(１００ μＬ 涂菌相 将阳性克隆测序结果在 ＮＣＢＩ 上进行 ＢＬＡＳＴｎ
