Page 132 - 《广西植物》2025年第8期

１ ４ ９ ８ 广 西 植 物 ４５ 卷
( ＴＩＲ１ ) / ＡＵＸＩＮ ＳＩＧＮＡＬＩＮＧ Ｆ ＢＯＸ ＰＲＯＴＥＩＮ １.２ 植物培养条件
(ＡＦＢ)识别ꎮ 受体与生长素的复合体促进 ＡＵＸ / 种子灭菌和幼苗培养均依照我们已发表的文
ＩＡＡ 与 Ｓｋｐ１￣Ｃｕｌｌｉｎ￣Ｆ￣ｂｏｘ(ＳＣＦ) ＴＩＲ１ / ＡＦＢ Ｅ３ 泛素 章进行( Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１５)ꎮ 实时荧光定量 ＰＣＲ
连接酶复合体结合ꎬ从而将 ＡＵＸ / ＩＡＡ 蛋白泛素化 (ｑＲＴ￣ＰＣＲ)和 ＣｈＩＰ 实验使用的幼苗培养条件:持
并降解(Ｍａｒａｓｃｈｉｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００９)ꎮ 这就造成了转录 续白光 ２０ ℃ 下培养 ６ ｄ 后分别转入 ２０ ℃ 和 ２９ ℃
因子 ＡＲＦｓ 的释放ꎬ这些游离的 ＡＲＦｓ 激活生长素 培养 ６ ｈꎮ 培养完成后ꎬ将整株幼苗放入液氮中并
应答基因转录ꎮ 因为 ＳＡＵＲ 基因家族是生长素激 置于－８０ ℃ 冰箱中待用ꎮ 表型实验使用的幼苗均
活基因ꎬ 所 以 它 们 的 表 达 很 可 能 受 到 上 述 ５ 个 在 ２０ ℃ 和 ２９ ℃ 持续白光中培养 ８ ｄꎮ 光照条件:
ＡＲＦ 转录因子的促进ꎮ ＳＡＵＲｓ 在促进植物生长和 持续白光ꎬ光强为 ２５ μｍｏｌｍ ｓ ꎮ
￣１
￣２
细胞伸长过程中发挥着重 要 作 用 ( Ｒｅｎ ＆ Ｇｒａｙꎬ １.３ 下胚轴拍照及数据处理
２０１５)ꎮ 其分子机制主要有 ２ 种:(１) 通过使细胞 将基因型不同的幼苗置于同一平板上进行培
壁酸化来提高其延展性ꎬ从而促进拟南芥下胚轴 养ꎬ并重复 ３ 次ꎮ 拍照后在 Ｉｍａｇｅ￣Ｊ 软件( ｈｔｔｐ: / /
细胞膨大ꎬ汇集到表型层面就表现为下胚轴伸长 ｒｓｂ.ｉｎｆｏ.ｎｉｈ.ｇｏｖ / ｉｊ)中测量幼苗的下胚轴长度ꎮ
(Ｓｐａｒｔｚ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１４ꎻ Ｗｏｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２１)ꎻ(２)通过 １.４ 拟南芥中 ＲＮＡ 的提取
与核糖体蛋白 ＲＰＬ１２ 和 ＳＡＵＲ６２ / ７５ 的结合ꎬ加强 本研究使用天根生化科技( 北京) 有限公司的
核糖体的组装和翻译ꎬ从而促进花粉管生长( Ｈｅ ｅｔ 多糖多酚植物总 ＲＮＡ 提取试剂盒(ＤＰ４３２)提取植
ａｌ.ꎬ ２０１８)ꎮ 综上所述ꎬ在热形态建成中植物通过 物总 ＲＮＡꎬ实验操作完全按照产品说明书进行ꎮ
抑制 ＨＹ５ 来解除生长素合成的抑制状态ꎬ从而提 １.５ ＲＮＡ 的逆转录
高植物的生长素含量ꎮ 在逆转录过程中ꎬ我们使用了天根生化科技
ＳＡＵＲｓ 具有促进植物生长和细胞伸长的作用 (北京)有限公司的 ＦａｓｔＫｉｎｇ ｃＤＮＡ 第一链合成试
(Ｒｅｎ ＆ Ｇｒａｙꎬ ２０１５)ꎬ然而在高温诱导下胚轴伸长 剂盒(ＫＲ１１６)对所获得的 ＲＮＡ 进行逆转录ꎮ
的过程中ꎬ高温调控 ＳＡＵＲｓ 的分子机制尚不清楚ꎮ １.６ 实时荧光定量 ＰＣＲ(ｑＲＴ￣ＰＣＲ)实验
本研究以拟南芥和烟草为实验材料ꎬ主要采用分 本实验采用了天根生化科技( 北京) 有限公司
子生物学的方法ꎬ拟探讨以下问题:(１) ＨＹ５ 与生 的 ＳＹＢＲ 预 混 试 剂 盒ꎬ 以 ＵＢＱ１ 作 为 内 参 基 因ꎮ
长素在热形态建成信号转导通路中的上下游关 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 引物见表 １ꎮ
系ꎻ(２) ＨＹ５ 是否调控 ＳＡＵＲ１ / ２ / ３ / ４ 的转录ꎻ(３) １.７ 染色质免疫共沉淀(ＣｈＩＰ)实验
ＨＹ５ 能否与 ＳＡＵＲ１ / ２ / ３ / ４ 的启动子染色质区结合 本实验依照 Ｊｉｎｇ 等(２０１３) 的研究方法进行ꎮ
及结合的具体位置ꎻ(４)ＨＹ５ 是否能够越过生长素 在沉淀蛋白￣ＤＮＡ 样品的过程中我们使用了 α￣ＨＡ
来调控 ＳＡＵＲ１ / ２ / ３ / ４ 的转录ꎮ 本研究关注了热形 抗体或 ＩｇＧ 血清ꎮ 使用 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 为 ＤＮＡ 定量( 引
态建成中高温如何调控 ＳＡＵＲｓꎬ丰富了 ＨＹ５ 的下 物见表 ２)ꎮ
游调控基因ꎬ进一步加深了对高温调控细胞伸长 １.８ 载体构建

基因分子机制的认识ꎮ 使用 ｐｆｕ ＤＮＡ 聚合酶在野生型幼苗的基因组
中扩增 ＳＡＵＲ１、ＳＡＵＲ２、ＳＡＵＲ３ 和 ＳＡＵＲ４ 启动子区
１ 材料与方法 (起始密码子 ＡＴＧ 上游 ２.０ ｋｂ 的 ＤＮＡ 片段) ( 引
物见表 ３)ꎮ 使用 ｐｆｕ ＤＮＡ 聚合酶在野生型幼苗的
１.１ 实验材料 ｃＤＮＡ 中扩增 ＨＹ５ 的编码区( 引物见表 １)ꎮ 使用
在本实验中ꎬ我们采用模式植物拟南芥作为 ＤＮＡ 测 序 确 认 无 误 后ꎬ 将 所 得 扩 增 片 段 插 入

研究材料ꎮ 野生型采用 Ｃｏｌｕｍｂｉａ￣０( Ｃｏｌ) 生态型ꎬ ｐＥＡＳＹ￣Ｂｌｕｎｔ 载 体 ( ＴｒａｎｓＧｅｎ )ꎬ 得 到 ｐＥＡＳＹ￣
突变体 采 用 ｈｙ５ꎬ 染 色 质 免 疫 共 沉 淀 ( Ｃｈｒｏｍａｔｉｎ ＳＡＵＲ１ｐ、 ｐＥＡＳＹ￣ＳＡＵＲ２ｐ、 ｐＥＡＳＹ￣ＳＡＵＲ３ｐ、
ＩｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎꎬＣｈＩＰ ) 实 验 采 用 ３５Ｓ:: ＨＹ５￣ ｐＥＡＳＹ￣ＳＡＵＲ４ｐ 和 ｐＥＡＳＹ￣ＨＹ５ꎮ 采 用 ＴａＫａＲａ
ＨＡ / Ｃｏｌ 转基因植物ꎮ ２９ ℃ 作为其温和高温条件ꎮ ＭｕｔａｎＢＥＳＴ ｋｉｔ 突变 ＨＹ５ 结合的 ＳＡＵＲ１ / ２ / ３ / ４ 启
这 ３ 种植物材料均来自中国科学院光生物学重点 动子区中含有 Ｅ￣ｂｏｘ 的部分ꎬ获得 ｐＥＡＳＹ￣ＳＡＵＲ１ｐ
实验室ꎮ ( ｍｕｔ) 、 ｐＥＡＳＹ￣ＳＡＵＲ２ｐ( ｍｕｔ) 、 ｐＥＡＳＹ￣ＳＡＵＲ３ｐ