Page 134 - 《广西植物》2025年第8期

１ ５ ０ ０ 广 西 植 物 ４５ 卷
表 ３ ＤＮＡ 片段克隆引物序列
Ｔａｂｌｅ ３ Ｔｈｅ ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｃｌｏｎｉｎｇ

引物 序列 (５′→３′) 引物 序列 (５′→３′)
Ｐｒｉｍｅｒ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ (５′→３′) Ｐｒｉｍｅｒ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ (５′→３′)
ＨＹ５￣Ｆ ＧＡＡＴＴＣＡＴＧＣＡＧＧＡＡＣＡＡＧＣＧＡＣ ｐＳＡＵＲ２￣Ｒ ＧＧＡＴＣＣＡＴＣＴＡＴＣＴＴＴＣＡＡＡＴＧＡＡＣ
ＨＹ５￣Ｒ ＣＴＣＧＡＧＣＴＡＧＡＣＴＣＧＴＡＡＡＴＧＴＧ ｐＳＡＵＲ３￣Ｆ ＣＴＣＧＡＧＴＧＧＡＡＣＡＡＡＧＧＡＴＧＧＴ
ｐＳＡＵＲ１￣Ｆ ＣＴＣＧＡＧＣＴＣＣＡＴＴＡＴＧＴＣＡＡＴＡＧ ｐＳＡＵＲ３￣Ｒ ＧＧＡＴＣＣＧＴＣＴＴＣＴＴＡＴＴＴＡＴＧＴＴＴＧ
ｐＳＡＵＲ１￣Ｒ ＧＧＡＴＣＣＣＴＴＴＧＡＧＧＡＣＴＡＡＴＧＣ ｐＳＡＵＲ４￣Ｆ ＣＴＣＧＡＧＣＡＴＴＧＡＧＧＡＡＣＧＣＡＴＴＡ

ｐＳＡＵＲ２￣Ｆ ＣＴＣＧＡＧＧＧＡＡＣＣＡＣＡＡＡＣＣＴＣＴＴＣ ｐＳＡＵＲ４￣Ｒ ＧＧＡＴＣＣＣＴＴＴＡＡＡＡＧＣＡＡＧＡＡＧ

ＣｈＩＰ 结果显示ꎬ富集现象出现在 ＳＡＵＲ１ 启动子的
２ 结果与分析 片段 ３ 和 ４(图 ３:Ｂ)、ＳＡＵＲ２ 启动子的片段 １ 和 ２
(图 ３: Ｃ)、 ＳＡＵＲ３ 启 动 子 的 片 段 ４ ( 图 ３: Ｄ) 和
２.１ 在 热 形 态 建 成 信 号 转 导 通 路 中 生 长 素 位 于 ＳＡＵＲ４ 启动子的片段 ３ 和 ４( 图 ３:Ｅ)ꎮ 而且ꎬ２９
ＨＹ５ 的下游 ℃ 中的富集量明显低于 ２０ ℃ 中的富集量( 图 ３:
生长素和转录因子 ＨＹ５ 均调控温和高温诱 Ｂ－Ｅ)ꎮ 这表明 ＨＹ５ 与 ＳＡＵＲ１ / ２ / ３ / ４ 启动子区中
导的下胚轴伸长( Ｄｅｌｋｅｒ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１４) ꎬ但二者在 某些含有 Ｅ￣ｂｏｘ 的染色质区域结合ꎬ并且这些结合
热形态建成信号转导通路中的上下游关系尚不 被温和高温所抑制ꎮ
清楚ꎮ 在热形态建成中ꎬ生长素在子叶中合成后 ２.４ 双 荧 光 素 酶 报 告 基 因 实 验 中 ＨＹ５ 抑 制
被运输到下胚轴并促进其伸长ꎮ ＮＰＡ 是生长素 ＳＡＵＲ１ / ２ / ３ / ４ 的表达
运输抑制剂ꎬ可抑制生长素由子叶向下胚轴的极 本研究使用双荧光素酶报告基因实验进一步
性运输ꎮ 与 Ｇｒａｙ 等( １９９８) 的研究结果一致ꎬ在 检测 ＨＹ５ 是否调控 ＳＡＵＲ１ / ２ / ３ / ４ 的转录ꎮ 在共
２０ ℃ 和 ２９ ℃ 中 ＮＰＡ 抑 制 下 胚 轴 伸 长 ( 图 １) ꎮ 表达 ｐＳＡＵＲ１: ＬＵＣ 和 ３５Ｓ: ＨＹ５ 的 烟 草 叶 片 中ꎬ
值得关注的是ꎬ在 ２ 种温度条件下 ＨＹ５ 的下胚轴 ＬＵＣ 的表达量明显低于共表达 ｐＳＡＵＲ１:ＬＵＣ 和空
伸长均被 ＮＰＡ 处理强烈抑制( 图 １) ꎮ 这说明在 载体的烟草叶片(图 ４:Ｃ)ꎬ并且在其余 ３ 个 ＳＡＵＲ
热形态建成信号转导通路中生长素处于 ＨＹ５ 的 中也观察到了这种现象(图 ４:Ｄ－Ｆ)ꎮ 这进一步证

下游ꎮ 实了 ＨＹ５ 抑制 ＳＡＵＲ１ / ２ / ３ / ４ 的转录ꎮ 此外ꎬ我们
２.２ ＨＹ５ 调控 ＳＡＵＲ１ / ２ / ３ / ４ 的表达 还将 ＳＡＵＲ１ / ２ / ３ / ４ 启动子中 ＨＹ５ 结合区域的 Ｅ￣
我们检测了 ＨＹ５ 是否调控 ＳＡＵＲ１ / ２ / ３ / ４ 的 ｂｏｘ 突变ꎬ并检测 ＨＹ５ 是否依然调控突变启动子
转录ꎮ 与本实验室同时进行的另一项研究一致的 控制下的报告基因ꎮ 在共转化 ｐＳＡＵＲ１(ｍｕｔ):ＬＵＣ
是ꎬ在 Ｃｏｌ 幼苗中温和高温促进 ＳＡＵＲ１ / ２ / ３ / ４ 的 和 ３５Ｓ:ＨＹ５ 的烟草叶片中ꎬＬＵＣ 的表达量与共表
转录( 图 ２)ꎮ 在 ２０ ℃ 和 ２９ ℃ 中ꎬｈｙ５ 的 ＳＡＵＲ１ / 达 ｐＳＡＵＲ１(ｍｕｔ):ＬＵＣ 和空载体的相似( 图 ４:Ｃ)ꎬ
２ / ３ / ４ 转录本丰度明显高于 Ｃｏｌ( 图 ２)ꎬ这说明转 在其余 ３ 个 ＳＡＵＲ 基因中也存在类似现象( 图 ４:
录因子 ＨＹ５ 在 ２ 种温度条件中均抑制了 ＳＡＵＲ１ / Ｄ－Ｆ)ꎮ 这说明 ＨＹ５ 在抑制 ＳＡＵＲ１ / ２ / ３ / ４ 转录的

２ / ３ / ４ 的转录ꎮ 过程中需要这些被突变的 Ｅ￣ｂｏｘ 元件ꎮ
２.３ 转录因子 ＨＹ５ 与 ＳＡＵＲ１ / ２ / ３ / ４ 的启动子区 综合图 ２、图 ３ 和图 ４ 的结果说明ꎬ在常温条
染色质结合 件下ꎬＨＹ５ 与 ＳＡＵＲ１ / ２ / ３ / ４ 的启动子区染色质结
Ｌｅｉｖａｒ 和 Ｑｕａｉｌ(２０１１) 研究表明ꎬＨＹ５ 结合靶 合较强ꎬ对 ＳＡＵＲ１ / ２ / ３ / ４ 的转录抑制较强ꎬ从而导
基因启动子区的 Ｅ￣ｂｏｘ( ＣＡＮＮＴＧ) 顺式作用元件ꎮ 致这 ４ 个基因的表达量较低ꎻ当中温和高温来临
本研究探究了 ＨＹ５ 能否直接抑制 ＳＡＵＲ１ / ２ / ３ / ４ 时ꎬＨＹ５ 与 ＳＡＵＲ１ / ２ / ３ / ４ 的启动子区染色质结合
的转录ꎬ结果发现在 ＳＡＵＲ１ / ２ / ３ / ４ 的启动子区中 减弱ꎬ对 ＳＡＵＲ１ / ２ / ３ / ４ 的转录抑制也减弱ꎬ从而导
分布着 大 量 的 Ｅ￣ｂｏｘ 顺 式 作 用 元 件 ( 图 ３: Ａ)ꎮ 致这 ４ 个基因的表达量上升ꎮ