Page 192 - 《广西植物》2026年第1期
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１ ８ ８                                  广  西  植  物                                         ４６ 卷
            提升其耐旱能力( 李娇娇和曾明ꎬ２０２０)ꎮ 程龙媛                         经浙江省中医药研究院浦锦宝研究员鉴定ꎮ 鉴于
            等(２０２４)研究表明ꎬ内生菌和根际微生物协同调                           短萼黄连野外种群数量少、多为极小种群的濒危
            控药用植物的生长与品质ꎮ 在干旱环境下ꎬ对黄                             现状ꎬ为尽量减少对物种及其原生境的干扰ꎬ本研
            芪、甘草、枸杞施用深色有隔内生菌ꎬ可增加根际                             究选择龙塘山分布点(１１８°５４′０４″Ｅ、３０°０６′３７″Ｎꎬ

            微生物丰度ꎬ助力药用植物旱地种植( Ｈｅ ｅｔ ａｌ.ꎬ                       海拔 ９１０.９３ ｍ) 的短萼黄连群落作为采样区ꎮ 该
            ２０１９ꎬ ２０２２ａꎬ ｂ)ꎮ 因此ꎬ研究植物、内生菌及根际                    区种群个体数量适中且能够较好地代表短萼黄连
            微生物间的互作ꎬ对药用植物种植及其可持续发                              的自然生境ꎮ 短萼黄连是多年生植物ꎬ常规按照

            展具有重要指导意义ꎮ                                         叶片数目判断生长年限( 一年生:１ ~ ２ 片真叶ꎻ两
                 连作障碍是药用植物种植中常见的问题ꎬ土                           年生:３ ~ ５ 片真叶ꎻ多年生:１０ 片真叶及以上) ( 张
            壤微生物群落结构失衡被认为是连作障碍形成的                              莉和张小平ꎬ２００５)ꎮ 一年生、两年生和多年生短
            重要原因ꎮ 随着种植年限的增加ꎬ枳壳( 吴微微                            萼黄连各 ５ 株ꎬ共计 １５ 株ꎬ用无菌刷去除大块土
            等ꎬ２０２４)、党参(孟彤彤等ꎬ２０２３)等药用植物根际                       壤ꎬ保留 １ ｍｍ 左右的土壤附着在根上ꎬ将植物根
            微生物群落结构发生显著变化ꎬ有益细菌和真菌                              部放入无菌管中ꎬ加入 ５０ ｍＬ ＰＢＳ 缓冲液ꎬ用无菌
            丰度下降ꎬ潜在致病菌属丰度上升ꎬ这可能与植物                             镊子用力搅拌ꎬ以便从根表面分离根际土ꎬ移除根
            根系分泌的特异性物质相关ꎮ 刘云露( ２０１９) 发                         后ꎬ低温高速离心ꎬ沉淀即为根际土样本ꎮ 根组织
            现ꎬ酚酸降解菌在黄连种植年份较高的根际土壤
                                                               采用 ７５％的酒精消毒 ５ ｍｉｎꎬ无菌水冲洗ꎬ０.１％的
            中富集ꎬ推测这与黄连根系持续向土壤中释放酚
                                                               次氯酸钠消毒 １０ ｍｉｎꎬ最后用无菌水冲洗ꎬ无菌滤
            酸有关ꎮ 因此ꎬ研究不同种植年限药用植物的根
                                                               纸吸干表面水分ꎬ将处理后的根际土壤和根组织
            际微生物特征ꎬ对解决连作障碍问题至关重要ꎮ
                                                               样本装入无菌管中ꎬ存于－８０ ℃ ꎮ 一年生、两年生
                 短萼黄连作为濒危植物ꎬ与常见植物相比ꎬ其
                                                               和多 年 生 短 萼 黄 连 根 分 别 编 号 Ｒｏｏｔ１、 Ｒｏｏｔ２ 和
            微生物群落可能具有独特的组成和功能ꎬ这可能
                                                               Ｒｏｏｔ３ꎬ根际土壤分别编号为 ＲＳ１、ＲＳ２ 和 ＲＳ３ꎬ每
            与其生存策略、环境适应性及濒危机制密切相关ꎮ
                                                               个处理 ５ 份样本ꎮ
            然而ꎬ目前对短萼黄连的研究主要集中在资源调
                                                               １.２ 基因组 ＤＮＡ 提取及 ＰＣＲ 扩增
            查、种群保护和濒危机制探讨等ꎬ有关其微生物菌
                                                                   根据 Ｅ.Ｚ.Ｎ.Ａ.  ®  ｓｏｉｌ ＤＮＡ ｋｉｔ (Ｏｍｅｇａ Ｂｉｏ￣Ｔｅｋꎬ
            群的研究还未见国内外文献报道ꎮ 本研究以浙江
                                                               Ｎｏｒｃｒｏｓｓꎬ ＧＡꎬ Ｕ.Ｓ.)操作手册ꎬ提取微生物群落的
            省清凉峰自然保护区为研究区域ꎬ采用高通量测
                                                               总基因组 ＤＮＡꎮ 经 ＤＮＡ 质量评估ꎬ以及 ＤＮＡ 纯
            序方法ꎬ通过对一年生、两年生和多年生短萼黄连
            根组织和根际土壤的微生物群落结构与多样性进                              度和浓度测定后ꎬ合格的 ＤＮＡ 作为模板用于 ＰＣＲ
                                                               扩增ꎬ 具 体 使 用 以 下 引 物: 对 根 组 织 样 本 的
            行系统分析ꎬ拟探讨以下问题:(１) 短萼黄连根部
            内生菌群落和根际土壤菌群结构特征及二者的联                              １６Ｓ Ｖ５－ Ｖ７   可 变 区 域 采 用 ７９９Ｆ ( ５′￣
            系如何ꎻ(２)短萼黄连根内及根际微生物群落随生                            ＡＡＣＭＧＧＡＴＴＡＧＡＴＡＣＣＣＫＧ￣３′) 和 １１９３Ｒ ( ５′￣
            长年限的变化规律ꎬ以及各生长阶段的优势微生                              ＡＣＧＴＣＡＴＣＣＣＣＡＣＣＴＴＣＣ￣３′)ꎻ对土壤样本中 １６Ｓ
            物类群(有益和有害菌株)ꎮ 本研究结果有望为短                            Ｖ４ 可变区使用 ５１５Ｆ(５′￣ＧＴＧＣＣＡＧＣＭＧＣＣＧＣＧＧ￣
            萼黄 连 的 后 续 人 工 繁 育 和 保 护 利 用 提 供 理 论               ３′) 和 ８０６Ｒ ( ５′￣ＧＧＡＣＴＡＣＨＶＧＧＧＴＷＴＣＴＡＡＴ￣３′ꎻ
                                                               对 所 有 样 本 中 的 ＩＴＳ 区 域 使 用 ＩＴＳ１Ｆ ( ５′￣
            支撑ꎮ
                                                               ＣＴＴＧＧＴＣＡＴＴＴＡＧＡＧＧＡＡＧＴＡＡ￣３′) 和 ＩＴＳ２Ｒ ( ５′￣
            １  材料与方法                                           ＧＣＴＧＣＧＴＴＣＴＴＣＡＴＣＧＡＴＧＣ￣３′)ꎮ ＰＣＲ 反应体系:
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                                                               ５×Ｐｒｏ Ｔａｑ １０ μＬꎬ上游引物(５ μｍｏｌＬ ) ０.８ μＬꎬ
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            １.１ 样品采集                                           下游引物(５ μｍｏｌＬ )０.８ μＬꎬ模板 ＤＮＡ １０ ｎｇ
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                ２０２４ 年 １ 月上旬ꎬ在浙江清凉峰国家级自然                       μＬ ꎬ用水补足至 ２０ μＬꎮ 扩增程序:９５ ℃ 预变性
            保护区的短萼黄连群落中采集健康植株样品ꎮ 采                             ３ ｍｉｎꎬ接着进行 ２７ 个循环(９５ ℃ 变性 ３０ ｓꎬ５５ ℃
            集样品时ꎬ随机选取 １ ｍ × １ ｍ 大小的样方ꎬ在每                       退火 ３０ ｓꎬ７２ ℃ 延伸 ４５ ｓ)ꎬ７２ ℃ 延伸 １０ ｍｉｎꎬ４
            个样方中选取 １ 株健康短萼黄连植株ꎮ 短萼黄连                           ℃ 保存ꎮ
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