Page 34 - 《广西植物》2026年第1期

３ ０ 广 西 植 物 ４６ 卷
洋等(２０２３) 对堇叶紫金牛( Ａｒｄｉｓｉａ ｖｉｏｌａｃｅａ) 的研 保护区)和广西下雷自治区级自然保护区(以下简
究结果表明ꎬ堇叶紫金牛 １３ 个居群的整体遗传多 称下雷保护区)采集了 ４ 个居群(居群分布的最高
样性偏低ꎬ但居群间的遗传分化程度较高ꎬ建议优 海拔 ８６５ ｍꎬ最低海拔 ７７ ｍ)ꎬ共计 ５６ 份凹脉金花
先保护 ３ 个遗传多样性较高的居群ꎬ并开展相关 茶样品ꎬ详情见表 １ꎮ 为探究凹脉金花茶的系统发
繁育工作维持和扩大居群数量ꎻＲｙｕ 等(２０１９) 对 育关系ꎬ 在 弄 岗 保 护 区 采 集 了 ３ 份 淡 黄 金 花 茶
石斛(Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｎｏｂｉｌｅ) 的遗传多样性分析研究 (Ｃａｍｅｌｌｉａ ｆｌａｖｉｄａ) 样品作为外类群ꎮ 根据居群大

结果表明ꎬ该物种不同基因型之间存在明显差异ꎬ 小ꎬ采用随机抽样的方法ꎬ每个居群采集 １０ ~ １６ 个
共有 １８ 个 ＳＮＰ 用于开发 ＫＡＳＰ(Ｋｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ Ａｌｌｅｌｅ￣ 体ꎬ采样植株间隔 １０ ｍ 以上ꎬ每株采集 ２ 片健康
Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＰＣＲ)检测集ꎬ其中 １０ 个成功用于区分石 且幼嫩的新鲜叶片ꎬ放入茶叶袋并编号ꎬ将其放入
斛 基 因 型ꎻ Ｃｈｅｎ 等 ( ２０２２ ) 对 坡 垒 ( Ｈｏｐｅａ 装有变色硅胶的封口袋中干燥保存ꎮ 样品送至上
ｈａｉｎａｎｅｎｓｉｓ ) 的遗传多样性分析结果表明ꎬ７ 个居 海凌恩生物科技有限公司进行简化基因组测序ꎮ
群的平均杂合度为 １９.７７％ꎬ表明坡垒的遗传多样 根据经纬度计算各居群间的空间距离ꎬ弄岗保护
性较 低ꎻ Ｈｕ 等 ( ２０２２) 对 三 棱 栎 ( Ｔｒｉｇｏｎｏｂａｌａｎｕｓ 区三联站卜那( ＣＩ￣ＢＮ) 和弄岗保护区三联站陇米
ｄｏｉｃｈａｎｇｅｎｓｉｓ)遗传多样性分析结果表明ꎬ６ 个三棱 督(ＣＩ￣ＬＭ) 居群之间的距离为 ４.３４ ｋｍꎻＣＩ￣ＢＮ 和
栎居群存在较高的遗传多样性和中等程度遗传分 下雷保护区板六村陇恒( ＣＩ￣ＬＨ) 居群之间的距离
化ꎬ大部分遗传变异发生在居群之间ꎬ基于这些结 为 ２０.４５ ｋｍꎻＣＩ￣ＢＮ 和下雷保护区板六村陇位( ＣＩ￣
果ꎬ提出了基于遗传多样性高的三棱栎的居群就 ＬＷ)居群之间的距离为 ２０.２１ ｋｍꎻＣＩ￣ＬＭ 和 ＣＩ￣ＬＨ
地保护策略ꎬ并提出了种质收集和人工育苗的相 居群之间的距离为 ２３.５８ ｋｍꎻＣＩ￣ＬＭ 和 ＣＩ￣ＬＷ 居
关策略ꎮ 群之间的距离为 ２３.０３ ｋｍꎻＣＩ￣ＬＨ 和 ＣＩ￣ＬＷ 居群
目前ꎬ凹脉金花茶的研究主要集中在繁育技 之间的距离为 ０.４７ ｋｍꎮ
术(潘文等ꎬ２０２５)、光合特性( 陈妮等ꎬ２０２４)、化 １.２ ＤＮＡ 提取及文库构建
学成分(程金生等ꎬ２０２０)等方面ꎬ关于凹脉金花茶 使用 Ｅ. Ｚ. Ｎ. Ａ. Ｔｉｓｓｕｅ ＤＮＡ ｋｉｔ ( Ｏｍｅｇａ Ｂｉｏ￣
居群的遗传多样性和遗传结构研究较少ꎬ仅赖彦 Ｔｅｋ)提取 ５６ 份凹脉金花茶样本和 ３ 份淡黄金花
池( ２０２１) 运 用 一 个 叶 绿 体 小 单 拷 贝 区 ( ｓｍａｌｌ 茶样本的 ＤＮＡꎬ并利用 １％琼脂糖电泳进行质检ꎮ
ｓｉｎｇｌｅ ｃｏｐｙꎬＳＳＣ)的片段( 包括 ４ 个基因ꎬ即 ｎｄｈＦ、 选择 ＥｃｏＲ Ｉ 酶 ＮｌａⅢ的酶组合对质量经过检查的
ｒｐｌ３２、ｔｒｎＬ￣ＵＡＧ、 ＣＣＳＡ) 和 简 单 重 复 序 列 ( ｓｉｍｐｌｅ ＤＮＡ 进行双酶解ꎬ对获得的酶切片段一端连接标
ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｒｅｐｅａｔꎬＳＳＲ) 分子标记联合的方法ꎬ对凹 签接头 Ｐ１ꎬ随即将其混合ꎬ通过物理方法将混合片
脉金花茶进行遗传多样性和遗传结构分析ꎮ 但 段随机打断至 ３００ ~ ５００ ｂｐ 范围内ꎬ以满足后续测
是ꎬ此方法受限于标记数量和基因组覆盖度ꎬ需依 序文库构建的需求ꎮ 在打断后的片段两端连接 Ｐ２
赖同源物种引物跨物种扩增ꎬ可能因引物不匹配 通用 接 头ꎬ 再 进 行 ＰＣＲ 扩 增ꎬ 最 后 通 过 Ｉｌｌｕｍｉｎａ
导致数据缺失或偏差ꎬ因此ꎬ无法准确评估凹脉金 ＨｉＳｅｑ ＰＥ１５０(Ｐａｉｒｅｄ￣Ｅｎｄ １５０ ｂｐ)测序ꎮ
花茶的遗传多样性和遗传结构ꎮ 为此ꎬ本研究利 １.３ 质量测序及 ＳＮＰ 过滤
用 ＧＢＳ 技术ꎬ对广西区内采集的 ４ 个居群 ５６ 份凹 通过 Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＨｉＳｅｑ ＰＥ１５０ 进行测序获得原始
脉金花茶样品进行简化基因组测序ꎬ旨在更精准 图像数据ꎬ利用 ＦａｓｔＱＣ 工具对数据质量进行评估ꎮ
评估凹脉金花茶的遗传多样性ꎬ计算居群遗传结 使用 Ｔｒｉｍｍｏｍａｔｉｃ ｖ０.３６ (Ｂｏｌｇｅｒ ｅｔ ａｌ.ꎬ２０１４)ꎬ采用
构ꎬ为制定凹脉金花茶的遗传保育和有效保护策 默认参 数 过 滤 原 始 序 列 中 适 配 序 列、 切 割 位 点

略提供科学依据ꎮ (ｒｅａｄｓ 的前 ６ 个 碱 基 对) 和 低 质 量 ｒｅａｄｓ ( Ｑ２０ <
２０ꎬ长 度 < ３６ ｂｐ)ꎬ 再 使 用 ＢＷＡ ｖ０. ７. １２ ( Ｌｉ ＆
１ 材料与方法 Ｄｕｒｂｉｎꎬ ２００９ ) 将 干 净 的 ｒｅａｄｓ 映 射 到 茶 树

(Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ ) 参 考 基 因 组 ( 版 本 ＧＣＡ ＿
１.１ 材料 ０１３６７６２３５. １０ꎬ ｈｔｔｐｓ: / / ｗｗｗ. ｎｃｂｉ. ｎｌｍ. ｎｉｈ. ｇｏｖ / )ꎮ
在广泛调查凹脉金花茶现存野生资源的基础 使用 ＧＡＴＫ ｖ４.１.２.０ ( ＭｃＫｅｎｎａ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１０) 检测
上ꎬ在广西弄岗国家级自然保护区( 以下简称弄岗 ＳＮＰꎬ参数为默认参数ꎮ 使用 ｓｔａｃｋｓ 软件包中 ｃｓｔａｃｋｓ