Page 58 - 《广西植物》2026年第1期

５ ４ 广 西 植 物 ４６ 卷
豆兰属植物内生菌的研究已经有所展开ꎮ 其中ꎬ
高景凯等(２０１９)、苗永美等(２０２２) 对广东石豆兰
(Ｂ.ｋｗａｎｇｔｕｎｇｅｎｓｅ)的内生细菌进行了分离鉴定以
及抑菌活性分析ꎮ Ｌｉａｎｇ 等(２０２２) 对天贵卷瓣兰
的根、根状茎和根际土壤中的真菌群落和菌根真

菌组成通过直接提取 ＤＮＡ 测序进行了群落分析ꎬ
但未对具体种类进行分离和鉴定ꎮ 同时ꎬ目前也
有对于尼尔吉里石豆兰( Ｂ. ｎｅｉｌｇｈｅｒｒｅｎｓｅ)、短耳石
豆兰 ( Ｂ. ｃｒａｓｓｉｐｅｓ)、 Ｂ. ｅｘｉｇｕｕｍ、 Ｂ. ｂｒａｃｔｅａｔｕｍ 和
Ｂ. ｓｈｅｐｈｅｒｄｉｉ 等石豆兰属不同组织间的内生真菌种

类差 异 性 进 行 研 究 ( Ｓｕｄｈｅｅｐ ＆ Ｓｒｉｄｈａｒꎬ ２０１２ꎻ
Ｓａｗｍｙａ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１３ꎻＡｄｉｔ ｅｔ ａｌ.ꎬ２０２２)ꎬ但其内生真

菌对植株的促生作用并未深入开展ꎮ
鉴于此ꎬ本研究采用组织块分离法对生长于
不同海拔条件下天贵卷瓣兰内生真菌进行分离鉴
定ꎬ拟解决以下问题:(１) 分离并获得天贵卷瓣兰
不同组织内生真菌ꎻ(２)对不同组织内生真菌促生
特性进行筛选ꎻ(３)探究内生真菌对天贵卷瓣兰移
栽苗的生长是否具有促进作用ꎮ 本研究以期获得
Ａ. 天贵卷瓣兰居群ꎻ Ｂ. 天贵卷瓣兰单株ꎮ
一些具有潜在应用价值的内生真菌菌株ꎬ为进一 Ａ. Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂ. ｔｉａｎｇｕｉｉꎻ Ｂ. Ｓｉｎｇｌｅ ｐｌａｎｔ ｏｆ Ｂ. ｔｉａｎｇｕｉｉ.
步探讨天贵卷瓣兰与内生真菌的相互作用提供理 图 １ 天贵卷瓣兰野外生境照片
论基础ꎮ Ｆｉｇ. １ Ｗｉｌｄ ｈａｂｉｔａｔ ｐｈｏｔｏｓ ｏｆ Ｂｕｌｂｏｐｈｙｌｌｕｍ ｔｉａｎｇｕｉｉ

１ 材料与方法 (２０２４)的方法利用组织块分离法进行内生真菌分
离ꎬ利用解剖刀切取植物组织ꎮ 其中ꎬ根和横走茎
１.１ 试验材料 切成长度为 ０.５ ｃｍ 的小段ꎬ假鳞茎切成 ０.５ ｃｍ ×
天贵卷瓣兰( 包括根、横走茎、假鳞茎、叶片) ０.５ ｃｍ × ０.５ ｃｍ 的小块ꎬ叶片切成 ０.５ ｃｍ × ０.５
于 ２０２３ 年 １１ 月采自广西雅长兰科植物国家自然 ｃｍ 的小块ꎬ将切下的组织块分别接种到 ＰＤＡ 培养
保护 区 ( 地 理 坐 标 为 ２４° ４４′ １６″—２４° ５３′ ５８″ Ｎ、 基上ꎬ每个器官各 ５ 个平板ꎬ每个平板放置 ４ 个组
１０６°１１′３１″—１０６° ２７′０４″ Ｅ) ２ 个 不 同 海 拔 ( 山 腰 织块ꎬ采自山顶、山腰的样本各选取了 ８０ 个组织
９５０ ｍ 和山顶１ ２０８ ｍ)种群ꎮ 共 ２ 个样地ꎬ每个样 块ꎬ共 １６０ 个组织块ꎮ 置于培养箱中 ２８ ℃ 恒温培

地采集 １０ 株左右ꎮ 自然生境见图 １ꎮ 养ꎬ５ ~ １０ ｄ 后ꎬ挑取组织边缘长出的菌丝转接至新
１.２ 试验方法 ＰＤＡ 平板上进行纯化ꎮ 若菌落形态有异ꎬ则进行
１.２.１ 植物组织表面消毒 将植物表面清洗干净 二次 转 接ꎬ 如 此 反 复 直 至 得 到 纯 菌ꎬ 再 接 种 至
后吸干表面水分ꎬ称取植株根、横走茎、假鳞茎、叶 ＰＤＡ 平板上继续培养ꎬ４ ℃ 冰箱保藏ꎬ将每个组
片 ４ 种器官各 １ ｇꎮ 在超净工作台中ꎬ将准备好的 织块分离出的内生真菌进行统计ꎬ记录不同组织

材料分别用 ７５％的酒精浸泡 ３０ ｓꎬ用无菌水清洗 ３ 分离内生真菌的频率ꎬ其中分离频率( ％) ＝ ( 某
次ꎬ再用 ０.１％升汞分别浸泡 ３、５、７ ｍｉｎꎬ用无菌水 组织块中分离到的内生真菌总数 / 某组织总组织
冲洗 ５ 次( 吸取 ２００ μＬ 最后 １ 次洗涤水涂布于 块数) ×１００ꎮ
ＰＤＡ 平板ꎬ培养 ３ ~ ５ ｄꎬ以检查植株表面消毒效 １.２.３ 内生真菌的形态学鉴定 将纯化后得到的

果)ꎬ最后用无菌滤纸吸干组织表面水分ꎬ备用ꎮ 菌种 进 行 分 离 培 养 ５ ~ ８ ｄ 后ꎬ 参 照 刘 艳 萍 等
１.２.２ 内生真菌分离纯化 按照 １.２.１ 所得出的最 (２０２４)的方法观察并记录培养得到的内生真菌菌
佳消 毒 时 间 进 行 表 面 消 毒 后ꎬ 参 考 刘 艳 萍 等 落形态ꎬ指标主要包括菌落颜色、形状、生长特征