Page 71 - 《广西植物》2026年第1期

１ 期 王小国等: 秦岭蕙兰种群遗传结构与基因流研究 ６ ７

等(２００９)对杓兰开展了遗传学研究ꎬ认为 ｃｐＤＮＡ 杜鹃 ( Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ ｓｉｍｓｉｉ)ꎻ 河 南 狮 子 坪 乡 种 群
非编码区 ｒｐｓ１６ 和 ａｃｃＤ－ｐｓａＩ 可作为研究种子基因 (ＬＳＺ)位于海拔 １ ２６１ ｍ 的坡地ꎮ
流的分子标记ꎻＪｅｒｍａｋｏｗｉｃｚ 等(２０１５) 基于 ｃｐＤＮＡ
片段 ｔｒｎＬ、ｒｐｓ１６、ｔｒｎＬ－ｔｒｎＦ 和 ａｃｃＤ－ｐｓａＩ 对欧亚沼
兰种群开展研究ꎬ发现单倍型 Ｈ１ 在大部分欧洲种

群中均存在ꎬ即没有形成明显的谱系地理结构ꎻ
Ｐéｒｅｚ￣Ｅｓｃｏｂａｒ 等( ２０１７) 利 用 内 转 录 间 隔 区 ＩＴＳ、
ｙｃｆ１ 和 ｔｒｎＳ－ｔｒｎＧ 序列ꎬ对兰科植物 Ｃｙｃｎｏｃｈｅｓ 进行
了遗传学研究ꎬ发现安第斯山脉不会成为该兰科

植物种子传播的障碍ꎮ
秦岭是野生蕙兰分布的最北端ꎬ秦岭蕙兰叶形
优美、花香浓郁、花大且瓣型独特ꎬ受到人们的喜
爱ꎮ 近年来由于过度采挖、生境破碎化和气候变化
等因素ꎬ野生蕙兰种群的分布范围和个体数量显著
缩减ꎬ其遗传多样性维持与种群续存面临严峻挑
战ꎮ 在此背景下ꎬ做好野生蕙兰资源收集和遗传背
景分析工作ꎬ对制定科学保护策略具有重要理论和
实践意义ꎮ 尽管近年来学者对兰科植物的研究不
断深入ꎬ在群体遗传学方面取得显著进展ꎬ但是针
对秦岭蕙兰的遗传多样性现状、遗传结构和种群间
种子介导的基因流研究仍较为匮乏ꎮ 本研究以秦
岭野生蕙兰 １５ 个种群 ２７１ 个个体为研究对象ꎬ通过
ｃｐＤＮＡ 中 ｐｓｂＡ－ｔｒｎＨ 和 ｒｐｌ１４－ｒｐｌ３６ 的测序分析ꎬ旨 ａ. 河南崔庄(ＮＣＺ) 种群蕙兰幼苗ꎻ ｂ. 河南淅川( ＮＸＣ) 种
群蕙兰花序ꎻ ｃ. 陕西丹凤种群(ＳＤＦ) 花形态特征ꎻ ｄ. ＮＣＺ
在探究秦岭蕙兰种群的遗传结构及其可能影响因
种群蕙兰蒴果ꎮ
素ꎬ为秦岭蕙兰的就地保护提供科学依据ꎮ ａ. Ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｏｆ Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｆａｂｅｒｉ ｉｎ Ｃｕｉｚｈｕａｎｇꎬ Ｈｅｎａｎ ( ＮＣＺ)
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎꎻ ｂ. Ｐｅｄｕｎｃｌｅｓ ｏｆ Ｃ. ｆａｂｅｒｉ ｉｎ Ｘｉｃｈｕａｎꎬ Ｈｅｎａｎ (ＮＸＣ)
１ 材料与方法 ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎꎻ ｃ. Ｆｌｏｗｅｒｓ ｏｆ Ｃ. ｆａｂｅｒｉ ｉｎ Ｄａｎｆｅｎｇꎬ Ｓｈａａｎｘｉ (ＳＤＦ)
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎꎻ ｄ. Ｃａｐｓｕｌｅｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｓｅｅｄｓ ｏｆ Ｃ. ｆａｂｅｒｉ ｉｎ ＮＣＺ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ.
１.１ 材料
图 １ 秦岭蕙兰形态特征
采集秦岭蕙兰 １５ 个种群 ２７１ 个样本的叶片ꎮ Ｆｉｇ. １ Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ
采集样本时ꎬ每个种群采集 １５ ~ ２１ 个样本ꎬ每个个 ｆａｂｅｒｉ ｉｎ ｔｈｅ Ｑｉｎｌｉｎｇ Ｍｏｕｎｔａｉｎｓ
体采集 ２ ~ ３ 个幼嫩叶片ꎬ硅胶干燥后室温保存ꎬ用
于基因组总 ＤＮＡ 提取ꎮ 部分种群蕙兰的形态特 １.２ 仪器与试剂
征如图 １ 所示ꎮ 在 １５ 个种群中ꎬ河南崔庄 种 群 制冰 机 ( ＳＩＭ￣Ｆ１４０ 型)、 超 纯 水 机 ( ＡＫＪＹ￣２０
(ＮＣＺ)和陕西西乡种群(ＳＸＸ) 地理距离最远(４６３ 型)、ＰＣＲ 仪( 德国 Ｂｉｏｍｅｔｒａ)、涡旋混匀仪( ＸＫ９６￣
ｋｍ)ꎮ ＮＣＺ 种群位于秦岭东麓坡地ꎬ该区年平均气 Ｂ 型)、高压灭菌锅( ＳＡＮＹＯ ＭＬＳ￣３７５０ 型)、高速
温为 １４.８ ℃ ꎬ年降水量 ８００ ~ １ ０００ ｍｍꎬ植被类型 冷冻离心机( ＨＩＴＡＣＨＩ ＣＦ１６ＲＸ Ⅱ型)、凝胶成像
为落叶阔叶林ꎬ林冠层透光率较好ꎬ乔灌木有栓皮 分析系统(Ａｌｐｈａ Ｉｎｎｏｔｅｃｈ)、植物基因组 ＤＮＡ 提取
栎( Ｑｕｅｒｃｕｓ ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ)、黄栌( Ｃｏｔｉｎｕｓ ｃｏｇｇｙｇｒｉａ) 和 试剂盒 [天根生化科技(北京)有限公司]等ꎮ
大花溲疏(Ｄｅｕｔｚｉａ ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒａ)等ꎻＳＸＸ 种群位于秦 １.３ 基因组总 ＤＮＡ 提取和序列扩增
岭腹地村庄附近ꎻ河南淅川种群( ＮＸＣ) 伴生种有 使用天根试剂盒提取蕙兰基因组总 ＤＮＡꎮ 利

栓皮栎、有柄石韦( Ｐｙｒｒｏｓｉａ ｐｅｔｉｏｌｏｓａ) 和蕨类植物ꎬ 用筛选出的 ｐｓｂＡ－ｔｒｎＨ (Ｆ: ＧＴＴＡＴＧＣＡＴＧＡＡＣＧＴＡ
土壤腐殖质丰富ꎻ河南薛家沟种群( ＬＸＧ) 伴生有 ＡＴＧＣＴＣꎬ Ｒ: ＣＧＣＧＣＡＴＧＧＴＧＧＡＴＴＣＡＣＡＡＡＴＣ )