Page 72 - 《广西植物》2026年第1期
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６ ８ 广 西 植 物 ４６ 卷
(Ｓａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ １９９７)和 ｒｐｌ１４－ｒｐｌ３６ (Ｆ: ＡＡＧＧＡＡＡＴ 录号为 ＰＱ１９９４０６－ＰＱ１９９５０３ꎬ如表 １ 所示ꎮ
ＣＣＡＡＡＡＧＧＡＡＣＴＣＧꎬＲ: ＧＧＲＴＴＧＧＡＡＣＡＡＡＴＴＡＣＴ １５ 个种群单倍型多样性( Ｈ ) 范围为 ０.３２４ ~
ｄ
ＡＴＡＡＴＴＣＧ) (Ｓｈａｗ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００７) 两对叶绿体 ＤＮＡ ０.９２４ꎬ均值为 ０.７２５( 表 ２)ꎮ 其中ꎬＬＳＺ 和 ＮＣＺ 种
引物ꎬ对所有蕙兰样本进行 ＰＣＲ 扩增ꎬＰＣＲ 反应总 群的 Ｈ 最 高 ( ０. ９２４ )ꎬ ＳＸＸ 种 群 的 Ｈ 最 低
ｄ ｄ
体系 ２０ μＬꎬ１０ ×ｂｕｆｆｅｒ ２ μＬꎬｄＮＴＰｍｉｘ ０.２ ｍｍｏｌ (０.３２４)ꎮ １５ 个种群的核苷酸多态性( π) 范围为
￣３
￣３
￣１ ￣１ １.３ × １０ (ＳＤＦ) ~ ５.６ × １０ (ＬＳＺ)ꎮ 总体而言ꎬ秦
Ｌ ꎬＴａｑ 酶 ０.５ Ｕꎬ上、下游引物均为 ０.２ μｍｏｌＬ ꎬ
ＤＮＡ 模板 ５０ ~ １００ ｎｇꎮ 扩增程序:９４ ℃ 预变性 ５ 岭蕙兰具有较高的单倍型多样性ꎮ
ｍｉｎꎻ９４ ℃变性 ３５ ｓꎬ５６ ℃退火 ４５ ｓꎬ７２ ℃延伸 ９０ ｓꎬ 利用 ＤｎａＳＰ ５.１０ 软件分析得到的 ４９ 种单倍
３５ 个循环ꎻ７２ ℃ 延伸 １０ ｍｉｎꎬ４ ℃ 保存ꎮ 扩增产物 型中ꎬ２７ 种单倍型是单个蕙兰种群特有单倍型ꎬ２２
送北京六合华大基因科技有限公司进行测序ꎮ 种单倍型分布在 ２ 个或多个种群中ꎮ 其中ꎬ单倍
１.４ 序列分析 型 Ｈ２ 出现频率最高ꎬ在 １３ 个种群中均有分布ꎬ包
根据测序峰图对序列进行人工校正ꎬ拼接后 括 ＳＹＸ 和 ＬＳＸ(２ 个种群地理距离为 ４３４ ｋｍ)ꎮ 单
在 ＣｌｕｓｔａｌＸ２.１ 软件(Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ １９９７)中进行 倍型 Ｈ１０ 在 １１ 个种群中均有分布ꎬＨ７ 在 １０ 个种
序列比 对ꎻ 由 于 插 入 缺 失 位 点 ( ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ / ｄｅｌｅｔｉｏｎ 群中均有分布(图 ２)ꎮ
ｓｉｔｅｓꎬ ＩｎＤｅｌｓ) 也 包 含 有 遗 传 信 息ꎬ 因 此 使 用 ２.２ 分子方差分析结果
ＳｅｑＳｔａｔｅ 软 件 ( Ｍüｌｌｅｒꎬ ２００５ ) 中 “ ｓｉｍｐｌｅ ｉｎｄｅｌ￣ 以墨兰作为外类群ꎬ利用 ＭＥＧＡ 软件构建秦
ｃｏｄｉｎｇ”方法(Ｓｉｍｍｏｎｓ ＆ Ｏｃｈｏｔｅｒｅｎａꎬ ２０００)对其进 岭野生蕙兰 １５ 个种群的邻接树ꎮ 由图 ２:ｃ 可知ꎬ
行编 码ꎻ 利 用 ＤｎａＳＰ ５. １０ 软 件 ( Ｒｏｚａｓ ＆ Ｒｏｚａｓꎬ 秦岭野生蕙兰大部分种群聚为一类ꎮ 分子方差分
１９９５) 统计单倍型多样性( ｈａｐｌｏｔｙｐｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＨ ) 析(ＡＭＯＶＡ)结果表明ꎬ８８.８４％的遗传变异发生在
ｄ
和核 苷 酸 多 态 性 ( ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ π)ꎻ 利 用 蕙兰种群内ꎬ种群间的遗传变异仅占 １１.１６％( Ｐ <
Ｎｅｔｗｏｒｋ 软 件 构 建 单 倍 型 网 络 图 ( Ｂａｎｄｅｌｔ ｅｔ ａｌ.ꎬ ０.０１)(表 ３)ꎬ表明秦岭蕙兰种群间遗传分化水平
１９９９)ꎻ在 ＡｒｃＧＩＳ 中 绘 制 单 倍 型 地 理 分 布 图ꎻ 从 较低ꎬ没有形成明显的谱系地理结构ꎮ
ＮＣＢＩ 网 站 ( ｈｔｔｐｓ: / / ｗｗｗ. ｎｃｂｉ. ｎｌｍ. ｎｉｈ. ｇｏｖ / ) 下 载 ２.３ 基因流
兰科兰属植物墨兰( Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ ｓｉｎｅｎｓｅ) 叶绿体全 由 Ｍｉｇｒａｔｅ 软件估算结果( 表 ４) 可知ꎬ除 ＳＦＳ、
基因组序列( ＯＮ９６９３０１.１)ꎬ以墨兰作为外类群ꎬ ＳＸＸ 和 ＳＺＡ 种群存在不对称双向基因流( 迁出的
利用 ＭＥＧＡ ７. ０ 软 件 中 “ Ｋｉｍｕｒａ’ ｓ ｔｗｏ￣ｐａｒａｍｅｔｅｒ 基因流较强ꎬ迁入的基因流较弱) 以外ꎬ蕙兰大部
ｍｏｄｅｌ”计算种群间遗传距离并构建邻接树( Ｋｕｍａｒ 分种群间的双向基因流强度( Ｎ ) 均大于 １ꎬ表明
ｍ
ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１６)ꎬ１ ０００ 次重复ꎻ用 Ａｒｌｅｑｕｉｎ ３.５.２ 软件 秦岭蕙兰种群间种子介导的基因交流频繁ꎬ种子
(Ｅｘｃｏｆｆｉｅｒ ＆ Ｌｉｓｃｈｅｒꎬ２０１０) 对 ＤＮＡ 序列进行分子 在蕙兰物种扩散中起着重要作用ꎮ
方 差 分 析 ( ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｖａｒｉａｎｃｅꎬ
３ 讨论与结论
ＡＭＯＶＡ)ꎻ利用 Ｍｉｇｒａｔｅ ５.０.４ 软件( Ｂｅｅｒｌｉꎬ ２００６)
估算种群间基因流强度( ｇｅｎｅ ｆｌｏｗ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙꎬＮ )ꎬ
ｍ
其中遗传参数的估计采用 Ｂａｙｅｓｉａｎ 方法ꎬ步长设 ３.１ 遗传多样性
置为１０ ０００ꎬｂｕｒｎ￣ｉｎ 设置为 １ ０００ꎮ 基因流强度为 生物多样性保护是生态系统保护的重要组成
ｘＮ ＝ Ｍ×θꎬ其中 Ｍ 为迁移率估计值ꎬθ 表示有效种 部分ꎬ了解遗传变异信息是制定遗传多样性保护
ｍ
群大小ꎬ单倍型 ｘ ＝ １ꎮ 策略的前提ꎮ 通过对秦岭蕙兰 １５ 个种群 ２７１ 个个
体的 ２ 个 ｃｐＤＮＡ 序列分析ꎬ结果显示秦岭蕙兰种
２ 结果与分析 群平均单倍型多样性为 ０.７２５ꎬ平均核苷酸多态性
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π 为 ３.１ × １０ ꎬ高于兰科植物 Ｅｐｉｄｅｎｄｒｕｍ ｆｕｌｇｅｎｓ
２.１ 单倍型多态性 ( Ｈ : ０ ~ ０. ５０８ ) ( Ｐｉｎｈｅｉｒｏ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１１ )、
ｄ
叶绿体 ＤＮＡ ｐｓｂＡ－ｔｒｎＨ 和 ｒｐｌ１４－ｒｐｌ３６ 序列拼 Ｖｅｘｉｌｌａｂｉｕｍ ｙａｋｕｓｈｉｍｅｎｓｅ ( π: １.３０ × １０ ) ( Ｓａｅｋｉ
￣３
接后总长 １ ３４４ ｂｐꎬ共检出 ２９ 个 ＩｎＤｅｌｓꎬ ４９ 种单 ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１４)、Ｍａｌａｘｉｓ ｍｏｎｏｐｈｙｌｌｏｓ ( Ｈ : ０.７０２ꎻ π:
ｄ
倍型ꎬ将序列提交至 ＮＣＢＩ 网站ꎬ获得 ＧｅｎＢａｎｋ 登 １.９６ × １０ ) ( Ｊｅｒｍａｋｏｗｉｃｚ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１５) 、 Ｌｉｐａｒｉｓ
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