Page 44 - 《广西植物》2026年第2期
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２ ３ ８ 广 西 植 物 ４６ 卷
ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ)上ꎮ α￣淀粉酶和 β￣淀粉酶的免疫印迹检 在相同的温度和 ｐＨ 条件下ꎬ外源 α￣淀粉酶和
测方法参照 Ｎｉｕ 等(２０１９)ꎮ 转移后的 ＰＶＤＦ 膜用 β￣淀粉酶水解雪松花粉淀粉产生的还原糖显著低
５％脱脂奶粉封闭 ２ ｈꎬ分别与 α￣淀粉酶和 β￣淀粉酶 于玉米花粉( 等淀粉量比较) ( 图 ３:Ｆ)ꎮ 这说明ꎬ
的单克隆抗体(ＡＳ１０ ７１２ꎬＡＳ１５ ２８９５ꎬＡｇｒｉｓｅｒａ) (１ / 与玉米花粉相比ꎬ雪松花粉淀粉更难被淀粉酶水
５ ０００稀释)孵育 １ ｈꎻＴＢＳＴ 冲洗膜后ꎬ与过氧化物酶 解ꎬ这可能与其淀粉粒中直链淀粉含量较高有关ꎮ
偶联的山羊抗兔 ＩｇＧ(１ / ２ ０００稀释) 孵育 １ ｈꎻ冲洗 ２.３ 淀粉结合蛋白的提取与分析
后与 化 学 发 光 ＨＲＰ 底 物 ( Ｉｍｍｏｂｉｌｏｎä Ｗｅｓｔｅｒｎꎬ ＳＤＳ￣ＰＡＧＥ 分析发现ꎬ雪松花粉和玉米花粉的
Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎꎬ Ｂｉｌｌｅｒｉｃａꎬ ＵＳＡ) 孵 育 ５ ｍｉｎꎮ 结合蛋白带型存在明显差异ꎬ包括蛋白质条带的
免疫印迹用 Ｂｉｏ￣Ｒａｄ Ｆｌｕｏｒ￣Ｓ ＭｕｌｔｉＩｍａｇｅｒ 检测拍照ꎮ 种类和丰度( 图 ４:Ａ)ꎮ 免疫印迹分析表明ꎬ雪松
１.２.９ 数据处理 每个处理包括 ３ 个生物学重复ꎬ 花粉中存在 ２ 个主要的 α￣淀粉酶相关条带ꎬ而玉
采用 ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８、Ａｄｏｂｅ Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ 和 Ａｄｏｂｅ 米花粉中至少有 ４ 个ꎻ雪松中仅检测到 １ 条微弱的
Ｉｌｌｕｓｔｒａｔｏｒ 软件进行数据统计处理和图表制作ꎻ使 β￣淀粉酶相关条带ꎬ而玉米花粉中有 ２ 个主要的
用 Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ￣ｔｅｓｔ 分析数据显著性差异ꎮ 条带(图 ４:Ｂ)ꎮ 这说明ꎬ雪松花粉中 α￣淀粉酶和
β￣淀粉酶的种类和丰度明显低于玉米花粉ꎮ
２ 结果与分析 ＳＤＳ￣ＰＡＧＥ 分析表明ꎬ２ 种花粉的淀粉表面蛋
白和内部结合蛋白均存在明显差异( 图 ４:Ｃ)ꎮ 尤
２.１ 花粉形态及淀粉粒观察 其在 ６０ ｋＤａ 处ꎬ雪松花粉淀粉的内部结合蛋白丰
显微观察发现ꎬ雪松花粉带有 ２ 个气囊ꎬ由外 度明显低于玉米花粉ꎬ该蛋白为颗粒结合淀粉合
壁的外层向外扩展而成( 图 １:Ａ)ꎬ玉米花粉呈近 成酶 ＧＢＳＳＩꎮ 另外ꎬ淀粉酶同工酶分析发现ꎬ玉米
圆形(图 １:Ｂ)ꎮ 两种花粉中均存在碘染色的淀粉 花粉中出现明亮的同工酶信号ꎬ而雪松花粉的信
粒ꎮ 透射电镜观察发现ꎬ雪松花粉的淀粉主要分 号较弱ꎬ并且二者淀粉酶的位置也不同( 图 ４:Ｄ)ꎮ
布在近花粉内壁的细胞质中ꎬ而两侧气囊中无淀 根据同工酶信号的范围和强度分析ꎬ雪松花粉的
粉粒存在(图 １:Ｃ、Ｄ)ꎮ 扫描电镜下可以更清晰看 淀粉同工酶活性和种类明显少于玉米花粉ꎮ
到雪松花粉结构(图 １:Ｅ、Ｆ)ꎮ ２.４ 雪松花粉萌发过程中淀粉粒的变化
雪松和玉米花粉淀粉的形态和大小有明显差 雪松花粉萌发较慢ꎬ体外萌发 ３６ ｈ 时才见明
异(图 ２)ꎮ 碘染色后在光镜下观察ꎬ雪松花粉淀粉 显的花粉管生长ꎬ７２ ｈ 时花粉管平均长度为 ７３.８
粒呈现不规则形状ꎬ大小范围为 １.５ ~ ５.５ μｍꎻ玉米 μｍ(图 ５:Ａ)ꎮ 其间ꎬ花粉中淀粉粒的位置发生了
花粉淀粉粒为短棒状ꎬ大小范围为 ０.５ ~ ３.５ μｍ(图 明显变化:最初在细胞质中分散存在ꎬ逐渐富集到
２:Ａ、Ｂ)ꎮ 在扫描电镜下ꎬ雪松花粉淀粉粒像不规则 萌发孔处ꎮ 随着花粉管的生长ꎬ淀粉粒进入花粉
的鹅卵石ꎬ玉米花粉淀粉粒为短棒状(图 ２:Ｃ、Ｄ)ꎮ 管中ꎬ最终到达花粉管尖端ꎮ 在萌发过程中ꎬ花粉
２.２ 花粉淀粉的生理生化分析 中的淀粉含量逐渐降低ꎬ而可溶性糖含量逐渐升
雪松花粉和玉米花粉的淀粉含量存在显著性 高(图 ５:Ｂ)ꎮ 与此一致ꎬ随着萌发时间的延长ꎬ花
差异(图 ３:Ａ)ꎬ雪松花粉淀粉含量较低ꎮ 雪松花 粉 α￣淀粉酶和 β￣淀粉酶的活性均逐渐升高( 图 ５:
粉淀粉的糊化温度为 ６５ ℃ ꎬ低于玉米 ７４ ℃ (图 ３: Ｃ)ꎬ淀粉酶同工酶种类和活性增强( 图 ５:Ｄ)ꎮ 以
Ｂ)ꎮ 淀粉糊化温度通常与直链淀粉含量呈负相 上结果说明ꎬ在花粉萌发过程中ꎬ淀粉逐渐被淀粉
关ꎮ 淀粉组成测定表明ꎬ雪松花粉淀粉的直链淀 酶降解为可溶性糖ꎬ以支持花粉管的生长ꎮ
粉含量显著高于玉米(图 ３:Ｃ)ꎮ
无论以可溶性淀粉或玉米淀粉为底物ꎬ玉米 ３ 讨论
花粉的粗酶液比雪松的粗酶液降解淀粉的程度更
高ꎬ产生的还原糖更多(图 ３:Ｄ)ꎮ 另外ꎬ雪松花粉 ３.１ 淀粉粒特征及其在萌发过程中的变化
中 α￣淀粉酶和 β￣淀粉酶的活性均显著低于玉米花 本研究发现ꎬ雪松和玉米的花粉形状、花粉中
粉(图 ３:Ｅ)ꎮ 这些结果说明ꎬ雪松花粉的淀粉酶 淀粉粒形状和淀粉组成存在显著性差异ꎮ 雪松花
活性显著低于玉米花粉ꎮ 粉有 ２ 个气囊ꎬ 花粉中的淀粉粒多为不规则形ꎬ而
