Page 106 - 《广西植物》2026年第3期
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４ ８ ２ 广 西 植 物 ４６ 卷
１.８ ＲＮＡ￣ｓｅｑ 分析 ＭｏＴＰＳ 基因的组织表达模式 ＭｏＴＰＳ 家族的 ４７ 个成员分布在 １０ 条染色体上ꎬ
基于厚朴根、茎、叶、果实及不同时期花的转录 其中有 ２３ 个基因定位到 １７ 号条染色上ꎬ ８ 个成
组数据 ( ＧｅｎＢａｎｋ: ＰＲＪＮＡ７５２８３２、 ＰＲＪＮＡ７５２９２３) 员未定位到染色体上ꎬ这些基因未定位到染色体
(Ｙｉｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２１)ꎬ对转录组数据进行有参分析ꎬ得 上的原因可能是基因为重复序列ꎬ如转座子、串联
到每个转录本的每千个碱基的转录每百万映射读 重复 序 列ꎬ 导 致 基 因 难 以 准 确 定 位 ( Ｔｒｅａｎｇｅｎ ＆
取的片段(Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ Ｐｅｒ Ｋｉｌｏｂａｓｅ ｏｆ ｅｘｏｎ ｍｏｄｅｌ ｐｅｒ Ｓａｌｚｂｅｒｇꎬ ２０１１)ꎮ 在 ２、３、１２、１６、１７ 号染色体上存
Ｍｉｌｌｉｏｎ ｍａｐｐｅｄ ｆｒａｇｍｅｎｔｓꎬ ＦＰＫＭ)值ꎬ基于该值使用 在基因 簇ꎬ 形 成 基 因 簇 的 ＭｏＴＰＳ 基 因 存 在 串 联
ＴＢｔｏｏｌｓ 绘制 ＭｏＴＰＳ 在厚朴不同部位及不同花期中 重复ꎮ
的表达量热图ꎮ ２.３ ＭｏＴＰＳ 家族成员的系统进化树构建
１.９ ｑＲＴ￣ＰＣＲ 分析 ＭｏＴＰＳ 在不同时期厚朴花中 为了阐明厚朴 ＭｏＴＰＳ 蛋白的进化关系ꎬ构建
的表达量
了拟南芥、望春花和厚朴 ３ 个物种共 １９１ 个 ＴＰＳ
选取 ６ 个在盛花期中 表 达 量 高 的 基 因 进 行
蛋白的系统发育树ꎬ结果( 图 ３) 显示ꎬ厚朴 ＭｏＴＰＳ
ｑＲＴ￣ＰＣＲ 验 证ꎬ６ 个 基 因 为 ＭｏＴＰＳ４２、 ＭｏＴＰＳ４１、
家族可分为 ＴＰＳ￣ａ、ＴＰＳ￣ｂ、ＴＰＳ￣ｃ、ＴＰＳ￣ｅ / ｆ、ＴＰＳ￣ｇ ５
ＭｏＴＰＳ４０、 ＭｏＴＰＳ４３、 ＭｏＴＰＳ２４、 ＭｏＴＰＳ１３ꎬ 以 初 花
个亚家族ꎬ其中 ＴＰＳ￣ａ 亚家族所包含的 ＭｏＴＰＳ 最
期、展瓣期、盛花期的厚朴花 ｃＤＮＡ 为模板ꎬ参考周
多ꎬ有 ３２ 个ꎬ占总数的 ５８.１８％ꎬ其次为 ＴＰＳ￣ｂ 亚家
罗静(２０２３)的实验方法ꎬ以 Ａｃｔｉｎ 为内参基因( 李
族有 １５ 个ꎬＴＰＳ￣ｇ 亚族有 ２ 个成员ꎬＴＰＳ￣ｃ 亚族有
永宁 等ꎬ２０２３)ꎬ 使 用 Ｐｒｉｍｅｒ Ｐｒｅｍｉｅｒ ５ 软 件 设 计
１ 个成员ꎬＴＰＳ￣ｅ / ｆ 家族有 ５ 个成员ꎮ 未定位到染
ＴＭ
ｑＲＴ￣ＰＣＲ 特异性引物( 表 １)ꎮ 采用 ＳｓｏＦａｓｔ Ｅｖａ
色 体 上 的 ＭｏＴＰＳ４８、 ＭｏＴＰＳ４９、 ＭｏＴＰＳ５０、
Ｇｒｅｅｎ Ｓｕ￣ｐｅｒｅｍｉｘ(Ｂｉｏ￣Ｒａｄꎬ ＵＳＡ)进行定量表达检
ＭｏＴＰＳ５１、ＭｏＴＰＳ５３、ＭｏＴＰＳ５４ 和 ＭｏＴＰＳ５５ 均属于
－△△Ｃｔ 方法计算基因的相对表达量( 李永宁
测ꎬ用 ２
ＴＰＳ￣ａ 亚族ꎬＭｏＴＰＳ５２ 属于 ＴＰＳ￣ｂ 亚族ꎮ
等ꎬ２０２３)ꎮ
２.４ ＭｏＴＰＳ 家族成员的保守基序、结构域及基因
结构分析
２ 结果与分析
对 ＭｏＴＰＳ 的保守基序、结构域和基因结构进
２.１ ＭｏＴＰＳ 基因家族成员的鉴定和蛋白理化性质 行分析ꎬ结果如图 ４ 所示ꎮ 保守基序分析( 图 ４:
Ａ)发现ꎬＭｏＴＰＳ１－ＭｏＴＰＳ５５ 蛋白中保守基序的数
以拟 南 芥 和 水 稻 ＴＰＳ 蛋 白 为 参 考ꎬ 通 过
量在 ３ ~ １８ 个之间且大多基序为 ５ 个亚家族所共
ＢＬＡＳＴＰ 和 ＨＭＭＥＲꎬ在厚朴全基因组中共鉴定到
５５ 个 ＭｏＴＰＳ 家族成员ꎬ根据它们在染色体上的位 有ꎬ如 Ｍｏｔｉｆ ３、Ｍｏｔｉｆ ２ 和 Ｍｏｔｉｆ ５ 等是 ５５ 个 ＭｏＴＰＳ
蛋白中的常见基序ꎬ表明这些基序在 ＭｏＴＰＳ 中较
置分布( 王月雪等ꎬ２０２５)ꎬ依次命名为 ＭｏＴＰＳ１ －
保守ꎬ而 Ｍｏｔｉｆ １９ 只存在于 ＴＰＳ￣ｃ 和 ＴＰＳ￣ｅ / ｆ 亚家
ＭｏＴＰＳ５５ꎮ 理化性质分析结果( 表 ２) 表明ꎬＭｏＴＰＳ
族中ꎬＭｏｔｉｆ ２０ 只存在于 ＴＰＳ￣ｃ 亚家族中ꎮ 基因结
的 氨 基 酸 数 为 １１１ ~ ７９６ ａａꎬ 氨 基 酸 数 平 均 为
４３９.４９ ａａꎬ最大的为 ＭｏＴＰＳ１ꎮ 蛋白相对分子质量 构域分析( 图 ４:Ｂ) 表明ꎬＭｏＴＰＳ 均只包含 １ 个保
为１２ ７２３.０２ ~ ９０ ４５４.６０ Ｄａꎬ平均相对分子质量为 守结构域ꎬ其中包含基因数目最多的结构域为萜
烯环化酶ꎬ有 ２９ 个 ＭｏＴＰＳ 成员ꎬ其次为反式异戊
５０ ６２５.３６ Ｄａꎬ等电点为 ４.６８ ~ ８.９９ꎬ平均为 ５.８２ꎬ
烯基磷酸合酶和Ⅰ类萜烯环化酶超家族ꎬ有 １２ 个
其中 ４８ 个成员为酸性蛋白ꎬ７ 个成员为碱性蛋白ꎮ
不稳定系数为 ２３.０６ ~ ５３.３９ꎬ其中有 ２６ 个蛋白为 ＭｏＴＰＳ 成员ꎬ除此之外ꎬ有 ４ 个 ＭｏＴＰＳ 成员的结构
稳定蛋白ꎬ２９ 个蛋白不稳定系数大于 ４０ꎬ为不稳 域为萜烯合成酶ꎮ 对 ＭｏＴＰＳ 基因结构进行分析
定蛋白ꎬ脂肪系数为 ７６.２１ ~ １１７.７５ꎬＭｏＴＰＳ 家族的 (图 ４:Ｃ)发现ꎬＭｏＴＰＳ 的内含子数目在 １ ~ １１ 个之
５５ 个成员中ꎬ有 ５２ 个成员为亲水蛋白ꎬＭｏＴＰＳ２、 间ꎬ其 中 ＭｏＴＰＳ３１、 ＭｏＴＰＳ３６、 ＭｏＴＰＳ４５、 ＭｏＴＰＳ２１
ＭｏＴＰＳ３１ 和 ＭｏＴＰＳ４０ 为疏水蛋白ꎮ 和 ＭｏＴＰＳ５０ 仅有 １ 个内含子ꎬ大多数 ＭｏＴＰＳ 含有
２.２ ＭｏＴＰＳ 基因家族成员的染色体定位 ６ 个 内 含 子ꎬ ＭｏＴＰＳ１、 ＭｏＴＰＳ４４、 ＭｏＴＰＳ１２ 和
通过厚朴基因组注释ꎬ绘制 ＭｏＴＰＳ 基因家族 ＭｏＴＰＳ１３ 含有 １１ 个内含子且 ＭｏＴＰＳ 的外显子长
成员 的 染 色 体 定 位 图 谱ꎬ 结 果 ( 图 ２) 显 示 厚 朴 度也存在差异ꎮ
