Page 118 - 《广西植物》2026年第3期

４ ９ ４ 广 西 植 物 ２０２６ 卷
别为 ＳＥＰ１、ＳＥＰ２、ＳＥＰ３ 和 ＳＥＰ４ꎬＳＥＰ 蛋 白 与 Ａ￣
ｃｌａｓｓ 蛋白互作控制萼片分化ꎬ与 Ａ￣ｃｌａｓｓ 和 Ｂ￣ｃｌａｓｓ １ 材料与方法
蛋白形成复合物决定花瓣发育ꎬ通过介导 Ｂ￣ｃｌａｓｓ
和 Ｃ￣ｃｌａｓｓ 蛋白结合控制雄蕊分化ꎬ与 Ｃ￣ｃｌａｓｓ 蛋白 １.１ 材料
结合控制心皮形成ꎬ与 Ｃ￣ｃｌａｓｓ 和 Ｄ￣ｃｌａｓｓ 形成多聚 生长 ４ 年的钩藤植株种植于贵州中医药大学
体决定胚珠的发育( Ｗｉｌｓ ＆ Ｋａｕｆｍａｎｎꎬ ２０１７)ꎮ 除 国家基本药物所需中药材种子种苗繁育基地的种
了决定花器官分化外ꎬＳＥＰ 蛋白还广泛参与各类 质资源圃中ꎬ为贵州省剑河县钩藤种植基地移栽
花序的发育过程ꎬ从而在被子植物生殖生长中发 而来ꎬ经贵州中医药大学魏升华教授鉴定为钩藤

挥着核 心 作 用ꎮ 大 麦 ( Ｈｏｒｄｅｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ) ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ (Ｕｎｃａｒｉａ ｒｈｙｎｃｈｏｐｈｙｌｌａ)ꎮ 实验材料来源于同一植
蛋白 ＨｖＭＡＤＳ１ 通过细胞分裂素途径调控花序形 株并于 ４—５ 月进行采集ꎬ根挖取后清洗并切段ꎬ
态ꎬ并且该蛋白对于 ＣＡｒＧ￣ｂｏｘ 基序的结合受环境 带钩茎枝(钩茎)采集后立即在实验室进行茎、叶、

温度 影 响 ( Ｌｉ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２１)ꎻ 水 稻 ( Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ) 钩芽、钩的分离ꎬ其中钩芽从钩茎茎尖以下第一节
ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 基因 ＯｓＭＡＤＳ５ 和 ＯｓＭＡＤＳ３４ 参与调控圆 处切取ꎬ茎、叶、未木质化的钩从钩茎第三节分离
锥花序结构ꎬ过表达植株的花序二级分枝均受到 获得ꎮ 采集处于开花期的开花茎枝( 花茎)ꎬ随后
抑 制 ( Ｚｈｕ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２２ )ꎻ 番 茄 ( Ｓｏｌａｎｕｍ 在实验室分离头状花序不同发育时期材料ꎬ包括
ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ)ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 基因 ＳＩＭＢＰ２１ 在花序分生组 花序芽、幼花序和小花序ꎬ花序芽和幼花序从花茎
织生长与分化中起到了关键作用ꎬ抑制其表达可 茎尖以下第一节和第三节处切取ꎬ小花序为幼花
促进植株花序生长并分化产生更多的花(Ｚｈａｎｇ ｅｔ 序继续生长 ２ 周后从花序梗上切下的未开放头状
ａｌ.ꎬ ２０２４)ꎻ非洲菊(Ｇｅｒｂｅｒａ ｈｙｂｒｉｄａ)的 ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 基 花序ꎮ 所有材料获得后立即投入液氮中速冻ꎬ随
因在头状花序发生早期调控花序分生组织分化和 后放置于－８０ ℃ 超低温冰箱保存备用ꎮ
花分生组织发生ꎬ并能够控制花序分生组织分化 １.２ 方法
终止( Ｅｌｏｍａａ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１８)ꎻ甘菊( Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ １.２.１ 总 ＲＮＡ 提取和 ｃＤＮＡ 合成 总 ＲＮＡ 提取方
ｌａｖａｎｄｕｌｉｆｏｌｉｕｍ) 的 ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 基因在头状花序分生 法参照天根生化科技(北京) 有限公司的多糖多酚
组织顶端隆起及小花原基形成初期均有高水平表 植物总 ＲＮＡ 提取试剂盒说明书进行ꎬ利用 １％ 琼
达( Ｗｅｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２２)ꎻ金盏菊( Ｔａｇｅｔｅｓ ｅｒｅｃｔａ) 的 脂糖凝胶电泳检测 ＲＮＡ 条带的完整性ꎬ采用微量
ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 基因在花序芽和花中高表达ꎬ并且能够使 分光光度计 Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＮａｎｏＤｒｏｐ １０００
转基因拟南芥和烟草开花时间提前ꎬ转基因烟草 检测其纯度和浓度ꎬ按照生工生物工程( 上海) 股
的花序分枝减少( Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２１)ꎻ此外ꎬ二球 份有 限 公 司 的 ＭｉｇｈｔｙＳｃｒｉｐｔ 第 一 链 ｃＤＮＡ 合 成
悬铃木(Ｐｌａｔａｎｕｓ ａｃｅｒｉｆｏｌｉａ)中 ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 基因在头状 Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ(去 ｇＤＮＡ) 说明书操作步骤ꎬ反转录得
花序发育过程中表达ꎬ并促进转基因烟草花序二 到 ｃＤＮＡ 产物后保存于－２０ ℃ 低温冰箱ꎮ
级分枝产生( Ｚｈａｎｇ Ｓ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１７)ꎮ 综 上 表 明ꎬ １.２.２ 钩藤 ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 基因克隆 根据课题组前期获
ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 基因在不同物种中均参与花序发育和分 得 的 钩 藤 转 录 组 数 据 ( ＮＣＢＩ 登 录 号:

化过程的调控ꎬ其功能在被子植物中相对保守ꎮ ＰＲＪＮＡ１２２６７３５)中 ３ 个注释为 ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 基因的编码
为了深入探究钩藤钩的发生及形态建成调控 区序列(表 １)ꎬ通过 Ｐｒｅｍｉｅｒ ５.０ 软件分别设计基因
机制ꎬ课题组基于前期从钩和花序不同发育时期 特异性引物(表 ２)ꎬ以钩藤头状花序 ｃＤＮＡ 作为模
转录组数据中筛选得到的 ３ 个 ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 基因ꎬ通过 板ꎬ参照北京康润诚业生物科技有限公司高保真
ＲＴ￣ＰＣＲ 和 ＲＡＣＥ 技术克隆其完整编码区序列ꎬ并 ＤＮＡ 聚合酶 ＳｕｐｅｒＮｏｖａ ＰＣＲ Ｍｉｘ 说明书对 ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ
通过生物信息学、亚细胞定位、转录激活活性实验 基因的编码区进行 ＲＴ￣ＰＣＲ 扩增ꎮ 扩增产物经电泳
进行了初步的功能分析ꎬ进一步采用实时荧光定 检测并切胶回收目的片段ꎬ连接 ｐＴＯＰＯ ＩＩ 载体(北
量(ＲＴ￣ｑＰＣＲ)方法比较分析 ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 基因在不同 京康润诚业生物科技有限公司)后转化 ＤＨ５α 大肠
组织中的表达情况ꎬ以及在钩和花序发育过程中 杆菌感受态细胞ꎬ挑选阳性克隆并委托生工生物工
的表达模式ꎬ为揭示钩器官的起源ꎬ解析钩藤药用 程(上海) 股份有限公司进行测序ꎮ 根据测序结果
部位形态建成的分子机制奠定基础ꎮ 设计 ５′ ＲＡＣＥ 和 ３′ ＲＡＣＥ 引物ꎬ以头状花序 ｃＤＮＡ