Page 120 - 《广西植物》2026年第3期
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４ ９ ６ 广 西 植 物 ２０２６ 卷
呤缺陷型培养基(ＳＤ￣ＷＨＡ)平板上ꎬ３０ ℃ 培养 ３ ~ ＳＹＢＲ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ 染料( 北京康润诚业生物科技有
５ ｄ 后观察酵母生长状况并拍照ꎮ 所用酵母感受 限公司)ꎬ按照 ＳＹＢＲ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ ５ μＬ、ｄｄＨ Ｏ ３ μＬ、
２
态细胞、Ｘ￣α￣ｇａｌ 和缺陷培养基均购买自北京酷来 正反向引物各 ０.５ μＬ(１０ μｍｏｌＬ )、模板 １ μＬ
￣１
搏科技有限公司ꎮ 的反应体系ꎬ设置 ９５ ℃ ２ ｍｉｎ 后 ９５ ℃ １５ ｓ、５８ ℃
１.２.６ 钩藤 ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 基因的表达模式分析 参考周 ３０ ｓ、７２ ℃ ３０ ｓꎬ共 ４０ 个循环的反应程序ꎬ在 Ｂｉｏ￣
浩等(２０２２)的研究ꎬ采用 ＲＴ￣ｑＰＣＲ 方法进行钩藤 ｒａｄ ＣＦＸ９６ Ｔｏｕｃｈ 上进行 ＲＴ￣ｑＰＣＲ 检测ꎮ 每个样
－ΔΔＣｔ
基因的表达分析ꎬ分别设计 ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 基因的 ＲＴ￣ 本设置 ３ 次生物学重复ꎬ采用 ２ 法计算得到待
ｑＰＣＲ 引物ꎬ并以钩藤 ＧＡＤＰＨ 作为内参基因( 表 测基因的相对表达量ꎮ
２)ꎮ 对根、茎、叶、钩芽、钩及头状花序不同发育时 １.２.７ 数据和图片处理 使用 ＩＢＭ ＳＰＳＳ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ
期的材料提取总 ＲＮＡ 并检测其浓度ꎬ取 ２ μｇ ＲＮＡ ２６ 和 Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ９ 软件进行数据的显著性分
进行反转录获得 ｃＤＮＡ 产物ꎬ随后稀释 １０ 倍作为 析及绘制柱状图ꎬ使用 Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ ＣＳ６ 软件进行图
荧光 定 量 ｑＰＣＲ 的 模 板ꎬ 采 用 ２ × ＲｅａｌＳｔａｒ Ｆａｓｔ 片制作ꎮ
表 ２ ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 基因克隆及表达分析的引物
Ｔａｂｌｅ ２ Ｐｒｉｍｅｒｓ ｆｏｒ ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ ｇｅｎｅｓ ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ
产物长度
引物名称
引物用途 正向引物(５′→３′) 反向引物(５′→３′) Ｐｒｏｄｕｃｔ
Ｐｒｉｍｅｒ
Ｐｒｉｍｅｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ (５′→３′) Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ (５′→３′) ｌｅｎｇｔｈ
ｎａｍｅ
(ｂｐ)
ＣＤＳ 扩增 ＳＥＰ１ ＡＴＧＧＧＴＡＧＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＡＡＧ ＴＣＡＡＡＧＣＡＴＣＣＡＡＣＣＧＧＧＡＡＴＴＡＴＴＣＣ ７３８
ＣＤＳ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ＳＥＰ３.１ ＴＡＡＧＡＧＡＡＡＧＧＡＴＧＧＧＡＡＧＡＧＧＴＡＧＡＧＴＴ ＣＴＴＡＴＴＡＡＴＴＡＴＣＡＴＧＧＴＡＡＣＣＡＡＣＣＴ ７４８
ＳＥＰ３.２ ＡＧＡＡＡＧＡＧＡＡＴＧＧＧＡＡＧＡＧＧＧＡＧＧＧＴＧ ＣＴＴＴＴＴＣＴＴＧＴＴＡＴＣＡＴＧＧＴＡＡＣＣＡＡＣＣＧ ７５１
ｃＤＮＡ 扩增 ＳＥＰ１￣ｃ ＡＧＡＧＡＴＧＧＧＴＡＧＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＧＡＧＣＴＧ ＣＣＧＡＡＡＡＡＴＧＴＡＧＣＡＴＧＡＴＴＡＡＣＴＴＡＡＡＡＴＣＧ ９３１
ｃＤＮＡ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ＳＥＰ３.１￣ｃ ＧＡＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＡＧＡＡＴＴＡＴＴＴＴＴＧＣＧＧＴＴＣ ＡＧＧＡＴＡＧＧＡＣＡＴＡＡＧＧＴＴＣＧＴＣＣＡＣ ９８１
ＳＥＰ３.２￣ｃ ＧＡＧＧＡＴＴＧＴＧＴＧＴＡＧＴＧＴＡＣＴＧＴＧＧＡＡＴＣ ＧＡＧＴＡＡＡＧＡＡＡＡＡＴＴＧＡＣＡＡＡＡＧＣＡＡＧＴＧＣ １ ０９７
ＲＴ￣ｑＰＣＲ ＳＥＰ１￣ｑ ＣＴＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＴＣＴＡＡＣＣＧＴＧＧＣＡＡＧ ＧＣＣＴＧＡＡＴＧＧＣＴＧＡＣＴＴＣＴＡＡＴＧＣＴＣＣ １２０
ＳＥＰ３.１￣ｑ ＧＡＡＣＣＡＡＣＡＴＴＡＣＡＡＡＴＴＧＧＧＴＡＣＣＡＧ ＴＡＡＴＴＡＴＣＡＴＧＧＴＡＡＣＣＡＡＣＣＴＧＣＣ １０２
ＳＥＰ３.２￣ｑ ＣＡＴＴＡＣＡＡＡＴＴＧＧＡＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＣ ＣＡＡＴＣＴＴＧＴＧＣＡＡＧＧＧＡＡＴＣＡＴＡＣＣ １３９
ＧＡＤＰＨ ＡＧＣＡＡＧＧＡＣＴＧＧＡＧＡＧＧＴＧＧＡＡＧ ＣＣＧＴＴＧＡＧＧＧＣＴＧＧＡＡＧＡＡＣＴＴＴＣ １０１
载体构建 ＳＥＰ１￣ｇ ＧＣＴＣＴＡＧＡＡＴＧＧＧＴＡＧＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＧ ＣＧＧＧＡＴＣＣＡＡＧＣＡＴＣＣＡＡＣＣＧＧＧＡＡＴ ７５１
Ｖｅｃｔｏｒ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ
ＳＥＰ３.１￣ｇ ＧＣＴＣＴＡＧＡＡＴＧＧＧＡＡＧＡＧＧＴＡＧＡＧＴＴＧ ＣＧＧＧＡＴＣＣＴＧＧＴＡＡＣＣＡＡＣＣＴＧ ７３９
ＳＥＰ３.２￣ｇ ＧＣＴＣＴＡＧＡＡＴＧＧＧＡＡＧＡＧＧＧＡＧＧＧＴＧ ＣＧＧＧＡＴＣＣＴＧＧＴＡＡＣＣＡＡＣＣＧＧ ７４２
ＳＥＰ１￣ｙ ＣＡＴＧＣＣＡＴＧＧＧＴＡＧＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＧＡＧＣ ＣＧＧＧＡＴＣＣＴＣＡＡＡＧＣＡＴＣＣＡＡＣＣＧＧＧ ７５２
ＳＥＰ３.１￣ｙ ＣＡＴＧＣＣＡＴＧＧＧＡＡＧＡＧＧＴＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣ ＣＧＧＧＡＴＣＣＴＣＡＴＧＧＴＡＡＣＣＡＡＣＣＴＧ ７４０
ＳＥＰ３.２￣ｙ ＣＡＴＧＣＣＡＴＧＧＧＡＡＧＡＧＧＧＡＧＧＧＴＧＧＡＧＣ ＣＧＧＧＡＴＣＣＴＣＡＴＧＧＴＡＡＣＣＡＡＣＣＧＧ ７４３
注: 下划线表示酶切位点ꎮ
Ｎｏｔｅ: Ｕｎｄｅｒｌｉｎｅ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｅｎｚｙｍｅ ｃｕｔｔｉｎｇ ｓｉｔｅ.
Ｕｎｉｇｅｎｅ 的注释信息中检索到 ３ 个 ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 基因
２ 结果与分析 ( ＵｒＳＥＰ) ꎬ其中包含 １ 个 ＳＥＰ１￣ｌｉｋｅ 和 ２ 个 ＳＥＰ３￣
ｌｉｋｅ 基因ꎮ 以钩藤头状花序 ｃＤＮＡ 作为模板ꎬ根
２.１ 钩藤 ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 基因的克隆 据转录组测序获得的编码区序列信息设计基因
基于课题组前期获得的钩藤钩 和 花 序 发 育 特异性 引 物ꎬＲＴ￣ＰＣＲ 扩 增 和 测 序 后 得 到 ＳＥＰ１￣
不同 时 期 转 录 组 数 据 ( ＰＲＪＮＡ１２２６７３５ ) ꎬ 从 ｌｉｋｅ 基因 ＣＤＳ( ｃｏｄｉｎｇ ｓｅｑｕｅｎｃｅ) 长 度 为 ７３８ ｂｐꎬ
