Page 121 - 《广西植物》2026年第3期
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３ 期 黄明慧等: 钩藤钩发育相关 ＳＥＰＡＬＬＡＴＡ￣ｌｉｋｅ 基因的克隆与表达分析 ４ ９ ７
命名为 ＵｒＳＥＰ１ꎬ２ 个 ＳＥＰ３￣ｌｉｋｅ 基因 ＣＤＳ 长度分 Ｃ Ｈ Ｎ Ｏ Ｓ 、 Ｃ Ｈ Ｎ Ｏ Ｓ 、
１２２ ０ １９４２ ３４６ ３８１ １０ １１９８ １９３５ ３５３ ３６８ ９
别为 ７２６ ｂｐ 和 ７２９ ｂｐꎬ分别命名为 ＵｒＳＥＰ３.１ 和 Ｃ Ｈ Ｎ Ｏ Ｓ ꎻ相对分子质量分别为 ２７.８７、
１２１２ １９４２ ３５４ ３７２ １０
ＵｒＳＥＰ３.２ꎬ各 ＣＤＳ 扩增条带大小如图 １ 所示ꎮ 为 ２７.４６、２７.７５ ｋＤａꎻ理论等电点( ｐＩ) 均大于 ７ꎬ分别
检验所得 ＣＤＳ 的完整性ꎬ采用 ＲＡＣＥ 技术对基因 为７.６３、８.９７、８.６０ꎬ属于碱性蛋白ꎻ脂肪族系数分
编码区 ５′和 ３′端的侧翼序列扩增ꎬ所得序列拼接 别为 ８１.６３、８４.６５、８１.０７ꎻ不稳定系数均超过 ４０ꎬ
后使用两端引物再次对 ｃＤＮＡ 扩增验证( 图 １) 和 分别为 ４６.２７、４４.００、４２.５６ꎬ属于较不稳定蛋白ꎻ平
测序ꎬ得到 ＵｒＳＥＰ１、ＵｒＳＥＰ３.１、ＵｒＳＥＰ３.２ 的全长 均亲 水 性 指 数 ( ＧＲＡＶＹ) 均 为 负 值ꎬ 为 － ０. ６６５、
ｃＤＮＡ 长度分别为 ９３１、９８１、１ ０９７ ｂｐꎮ ＮＣＢＩ 网 －０.６７９、 －０.６７７ꎬ 属 于 亲 水 性 蛋 白ꎮ 利 用 ＮＣＢＩ￣
站 ＯＲＦ Ｆｉｎｄｅｒ 在线工具对 ｃＤＮＡ 序列进行分析ꎬ ＣＤＤ 在线网站搜索蛋白的保守结构域ꎬ发现 ３ 个
获得的编码区序列和长度与转录组测序结果基 蛋白均包含 ＭＡＤＳ 和 Ｋ￣ｂｏｘ 结构域(图 ２)ꎬ证明它
本一致ꎮ ＲＡＣＥ 扩增所得 ｃＤＮＡ 及完整编码区序 们均 属 于 ＭＩＫＣ 型 ＭＡＤＳ￣ｂｏｘ 转 录 因 子 家 族ꎮ
列 结 果 提 交 至 ＮＣＢＩ 的 ＧｅｎＢａｎｋ 数 据 库ꎬ ＷＯＬＦ ＰＳＯＲＴ 和 Ｓｏｆｔｂｅｒｒｙ 在线预测蛋白的亚细胞
ＵｒＳＥＰ１、ＵｒＳＥＰ３. １、 ＵｒＳＥＰ３. ２ 的 序 列 号 分 别 为 定位ꎬ显示其均定位于细胞核中ꎬ符合转录因子在
ＰＰ５５８２０９、ＰＰ５５８２１０、ＰＰ５５８２１１ꎮ 细胞中的定位特性ꎮ 利用 Ｓｉｇｎａｌ ＩＰ 和 ＴＭＨＭＭ 网
站预测表明 ＵｒＳＥＰ１、ＵｒＳＥＰ３.１ 以及 ＵｒＳＥＰ３.２ 中
均不存在信号肽和跨膜结构域ꎮ
２.３ 钩藤 ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 蛋白的结构预测
利用 ＳＯＰＭＡ 在线软件进行的二级结构预测
发现ꎬ钩藤 ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 蛋白均由 α￣螺旋、β￣折叠、无
规则卷曲和延伸链组成ꎬ其中 α￣螺旋和无规则卷
曲的 比 例 最 高 ( 图 ３: Ａ )ꎬ α￣螺 旋 在 ＵｒＳＥＰ１、
ＵｒＳＥＰ３.１、ＵｒＳＥＰ３. ２ 中分别占 ５３. ８８％、５５. ６０％、
５５.７９％ꎬ 无 规 则 卷 曲 分 别 占 ３２. ６５％、 ３１. １２％、
２９.７５％ꎮ 因 为 ３ 个 蛋 白 序 列 同 源 性 较 高ꎬ 所 以
ＳＷＩＳＳ￣ＭＯＤＥＬ 预测的三级结构均以同一模板建
Ｍ 表示 ＤＬ２０００ ＤＮＡ ｍａｒｋｅｒꎻ １、２ 和 ３ 分别表示 ＵｒＳＥＰ１、
ＵｒＳＥＰ３.１、ＵｒＳＥＰ３.２ 的 ＣＤＳ 扩增产物ꎻ ４、５ 和 ６ 分别表示 立(ＳＭＴＬ ＩＤ: ４ｏｘ０.２.Ｃ)ꎬ结果( 图 ３:Ｂ) 显示钩藤
ＵｒＳＥＰ１、ＵｒＳＥＰ３.１、ＵｒＳＥＰ３.２ 的全长 ｃＤＮＡ 扩增产物ꎮ ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 蛋白单体能够形成同源四聚体ꎬ这与氨基
Ｍ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ＤＬ２０００ ＤＮＡ ｍａｒｋｅｒꎻ １ꎬ ２ ａｎｄ ３ ｉｎｄｉｃａｔｅ ＣＤＳ
酸序列理化性质分析中单一蛋白均不稳定的结果
ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ＵｒＳＥＰ１ꎬ ＵｒＳＥＰ３. １ꎬ ＵｒＳＥＰ３. ２ꎬ
对应ꎬ也与 ＳＥＰ 蛋白以多聚体形式发挥作用的研
ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎻ ４ꎬ ５ ａｎｄ ６ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｆｕｌｌ￣ｌｅｎｇｔｈ ｃＤＮＡ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ＵｒＳＥＰ１ꎬ ＵｒＳＥＰ３.１ꎬ ＵｒＳＥＰ３.２ꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. 究报道(Ｈｕｇｏｕｖｉｅｕｘ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２４)一致ꎮ
图 １ ＵｒＳＥＰ１、ＵｒＳＥＰ３.１ 和 ＵｒＳＥＰ３.２ 的扩增产物 ２.４ 钩藤 ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 蛋白多序列比对和系统发育进
Ｆｉｇ. １ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ＵｒＳＥＰ１ꎬ 化分析
ＵｒＳＥＰ３.１ ａｎｄ ＵｒＳＥＰ３.２
ＮＣＢＩ 网站中的 Ｂｌａｓｔ 分析显示ꎬ钩藤 ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ
氨基酸序列与同科植物小粒咖啡( Ｃｏｆｆｅａ ａｒａｂｉｃａ)
２.２ 钩藤 ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 蛋白的序列分析 ＳＥＰ 相 似 性 最 高ꎮ 对 ＵｒＳＥＰ１、 ＵｒＳＥＰ３. １、
根据 ＲＡＣＥ 扩增后所得 ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 基因的编码 ＵｒＳＥＰ３.２、小粒咖啡的 ＣａＳＥＰ１ / ２ 和 ＣａＳＥＰ３ 以及
区序列ꎬ使用 ＤＮＡＭＡＮ 软件推导获得氨基酸序列 拟南芥的 ＡｔＳＥＰ１、ＡｔＳＥＰ２、ＡｔＳＥＰ３ 和 ＡｔＳＥＰ４ 进行
并进 行 比 对ꎬ 其 中 ＵｒＳＥＰ１ 编 码 ２４５ 个 氨 基 酸ꎬ 多序列比对ꎮ 根据已有研究报道可知ꎬＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 蛋
ＵｒＳＥＰ３.１ 和 ＵｒＳＥＰ３.２ 分别编码 ２４１ 和 ２４２ 个氨 白的 Ｃ 末端包含特征性的 ＳＥＰ Ⅰ 和 ＳＥＰ Ⅱ 基序
基酸ꎬ３ 个蛋白序列相似性为 ８２. ２６％ꎬＵｒＳＥＰ３. １ (ｍｏｔｉｆ) ( Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２１ꎻ Ｄｒｅｎｉ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２２)ꎮ
和 ＵｒＳＥＰ３.２ 之间的相似性最高ꎬ达 ９３.７８％ꎮ 利用 钩藤 ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 中除了包含保守的 ＭＡＤＳ 和 Ｋ￣ｂｏｘ
ＥｘＰａＳｙ￣ＰｒｏｔＰａｒａｍ 在线分析 ＵｒＳＥＰ１、ＵｒＳＥＰ３.１ 及 结构域外ꎬＳＥＰ Ⅰ和 ＳＥＰ Ⅱ ｍｏｔｉｆ 同样出现在蛋白
ＵｒＳＥＰ３.２ 蛋 白 的 理 化 性 质ꎬ 其 分 子 式 分 别 为 的 Ｃ 末端( 图 ４) ꎮ 利用 ＭＥＭＥ 网站的 Ｍｏｔｉｆ 在线
