Page 123 - 《广西植物》2026年第3期

３ 期 黄明慧等: 钩藤钩发育相关 ＳＥＰＡＬＬＡＴＡ￣ｌｉｋｅ 基因的克隆与表达分析 ４ ９ ９

ＵｒＳＥＰ１. 钩藤 ( ＰＰ５５８２０９ )ꎻ ＵｒＳＥＰ３. １. 钩 藤 ( ＰＰ５５８２１０ )ꎻ ＵｒＳＥＰ３. ２. 钩 藤 ( ＰＰ５５８２１１ )ꎻ ＣａＳＥＰ１ / ２. 小 粒 咖 啡 ( ＸＰ ＿
０２７０７８０３４.１)ꎻ ＣａＳＥＰ３. 小粒咖啡( ＸＰ ＿０２７０９６７２３.１)ꎻ ＡｔＳＥＰ１. 拟南芥( ＮＰ ＿５６８３２２.１)ꎻ ＡｔＳＥＰ２. 拟南芥( ＮＰ ＿１８６８８０.１)ꎻ
ＡｔＳＥＰ３. 拟南芥(ＮＰ＿５６４２１４.２)ꎻ ＡｔＳＥＰ４. 拟南芥(ＮＰ＿１７８４６６.１)ꎮ 黑色代表序列一致性为 １００％ꎬ灰色为序列一致性≥８０％ꎬ浅
灰色为序列一致性≥６０％ꎮ 黑线表示保守结构域ꎬ红色矩形框和蓝色矩形框分别表示 ＳＥＰ Ⅰ和 ＳＥＰ Ⅱ基序ꎮ
ＵｒＳＥＰ１. Ｕｎｃａｒｉａ ｒｈｙｎｃｈｏｐｈｙｌｌａ ( ＰＰ５５８２０９)ꎻ ＵｒＳＥＰ３. １. Ｕ. ｒｈｙｎｃｈｏｐｈｙｌｌａ ( ＰＰ５５８２１０)ꎻ ＵｒＳＥＰ３. ２. Ｕ. ｒｈｙｎｃｈｏｐｈｙｌｌａ ( ＰＰ５５８２１１)ꎻ
ＣａＳＥＰ１/ ２. Ｃｏｆｆｅａ ａｒａｂｉｃａ (ＸＰ＿０２７０７８０３４.１)ꎻ ＣａＳＥＰ３. Ｃ. ａｒａｂｉｃａ (ＸＰ＿０２７０９６７２３.１)ꎻ ＡｔＳＥＰ１. Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ (ＮＰ＿５６８３２２.１)ꎻ
ＡｔＳＥＰ２. Ａ. ｔｈａｌｉａｎａ (ＮＰ＿１８６８８０.１)ꎻ ＡｔＳＥＰ３. Ａ. ｔｈａｌｉａｎａ (ＮＰ＿５６４２１４.２)ꎻ ＡｔＳＥＰ４. Ａ. ｔｈａｌｉａｎａ (ＮＰ＿１７８４６６.１). Ｔｈｅ ｂｌａｃｋ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ
ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｔｙ ｉｓ １００％ꎬ ｔｈｅ ｇｒｅｙ ｉｓ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｔｙ ≥ ８０％ꎬ ｔｈｅ ｌｉｇｈｔ ｇｒｅｙ ｉｓ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｔｙ ≥ ６０％. Ｔｈｅ ｂｌａｃｋ ｌｉｎｅｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ
ｄｏｍａｉｎｓꎬ ｔｈｅ ｒｅｄ ａｎｄ ｂｌｕｅ ｂｏｘｅｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ＳＥＰⅠａｎｄ ＳＥＰ Ⅱｍｏｔｉｆｓꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.
图 ４ 钩藤 ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 蛋白与小粒咖啡和拟南芥同源 ＳＥＰ 多序列比对
Ｆｉｇ. ４ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ Ｕｎｃａｒｉａ ｒｈｙｎｃｈｏｐｈｙｌｌａ
ｗｉｔｈ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ＳＥＰ ｉｎ Ｃｏｆｆｅａ ａｒａｂｉｃａ ａｎｄ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ

表达载体ꎬ采用农杆菌介导的烟草叶片瞬时表达 腺嘌呤和组氨酸缺陷型培养基(ＳＤ￣ＷＨＡ) 平板上ꎬ
方法分析蛋白的亚细胞定位ꎮ 观察发现融合蛋白 ＵｒＳＥＰ１ 和 ＵｒＳＥＰ３.２ 在酵母中的表达能使菌落正常
的绿色荧光均集中分布于细胞核中ꎬ并且与细胞 生长并显蓝色ꎬ而转化 ｐＧＢＫＴ７￣ＵｒＳＥＰ３.１ 的酵母细
核标记染料 ＤＡＰＩ 的蓝色荧光位置基本重合( 图 胞和空载体阴性对照均不能生长ꎮ 以上结果表明ꎬ
７)ꎬ表明 ３ 个蛋白均定位于 细 胞 核 中ꎬ与 ＷＯＬＦ ＵｒＳＥＰ１ 和 ＵｒＳＥＰ３.２ 具有转录激活活性ꎬ能够激活
ＰＳＯＲＴ 和 Ｓｏｆｔｂｅｒｒｙ 在线预测的结果(表 ３)一致ꎮ 酵母单杂交系统报告基因 ＨＩＳ３、ＡＤＥ２ 和 ＭＥＬ１ 的
２.６ 钩藤 ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 蛋白的转录激活活性分析 表达ꎬ而 ＵｒＳＥＰ３.１ 无此活性ꎮ
采用酵母单杂交检测系统对钩藤 ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 蛋白 ２.７ 钩藤 ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 基因的表达分析
的转录激活活性进行分析ꎬ 结果如图 ８ 所示: 将 采用 ＲＴ￣ｑＰＣＲ 对钩藤 ＳＥＰ￣ｌｉｋｅ 基因在不同组

ｐＧＢＫＴ７￣ＵｒＳＥＰ１、 ｐＧＢＫＴ７￣ＵｒＳＥＰ３. １、 ｐＧＢＫＴ７￣ 织ꎬ以及钩和花序不同发育时期的表达情况进行
ＵｒＳＥＰ３.２ 重组载体和空载体阴性对照(ｐＧＢＫＴ７)分 分析ꎮ 钩芽和钩分别代表钩发育的早期和形成期
别转化至酵母中ꎬ转化子均能在色氨酸缺陷型培养 (图 ９:Ａ)ꎮ 花序芽、幼花序和小花序为花序发育
基(ＳＤ￣Ｗ)平板上正常长出白色菌落ꎻ在加入了酵 的 ３ 个不同时期ꎬ花序芽和幼花序分别为花序发
母半乳糖苷酶(ＭＥＬ１)显色底物 Ｘ￣α￣ｇａｌ 的色氨酸、 育早期和头状花序形成初期( 图 ９:Ｂ) ꎬ 小花序为